ISSN 1866-8836
Клеточная терапия и трансплантация

Морфологическая оценка кожи больных системной склеродермией до и после трансплантации гемопоэтических стволовых клеток костного мозга

Галина В. Федотовских, Галия М. Шаймарданова, Манарбек Б. Аскаров, Айнаш А. Жусупова, Наталья А. Криворучко, Татьяна Г. Ежеленко, Сапаргуль Марат

АО «Национальный научный медицинский центр», г. Нур-Cултан (Астана), Казахстан

doi 10.18620/ctt-1866-8836-2020-9-2-60-66
Отправлено 09 Апреля 2020
Одобрено 05 Июня 2020

Резюме

Результаты клинических отчетов по оценке трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) при лечении тяжелых форм различных аутоиммунных заболеваний являются обнадеживающими. В гистологический контроль динамики фиброза кожи в процессе лечения больных системной склеродермией (ССД), как правило, включается счет миофибробластов, отвечающих за избыточное отложение компонентов внеклеточного матрикса. Цель исследования состояла в оценке морфофункционального состояния кожи больных системной склеродермией до и после трансплантации аутологичных гемопоэтических стволовых клеток костного мозга.

Пациенты и методы

Под клиническим наблюдением в Национальном научном медицинском центре г. Нур-Султана находилось 28 больных, средний возраст 45+11 лет (мужчин 2, женщин 26) с достоверным диагнозом ССД согласно ACR/EULAR, 2013. Продолжительность заболевания составляла 12+5,4 года. Контрольную группу, получавшую базисную терапию составляли 12 человек. В протокол лечения основной группы (16 человек) дополнительно включали трансфузию ГСК. Основанием для проведения трансплантации стволовых клеток послужила резистентность к иммуносупрессивной терапии.

После клинико-лабораторного обследования больных ССД проводилась аспирация костного мозга из гребня подвздошной кости в количестве 200-300 мл под местной или эпидуральной анестезией в стерильных условиях хирургического отделения. Выделение мононуклеарных клеток полученных из аутологичных клеток костного мозга, проводили центрифугированием после наслоения на градиентную среду плотности с использованием Percoll (Sigma Aldrich, P1644). Выделенные клетки культивировали в среде DMEM (среда Игла, модифицированная Dulbecco, Sigma Aldrich, D1145) с 10% FBS при 37°С в течение 72 часов. Жизнеспособность клеток определяли окрашиванием трипановым синим. Количественное определение двойных положительных CD45 + / CD34 + мононуклеарных клеток проводили на проточном цитометре BD FACSCalibur (США). Переливание аутологичных культивированных HSC проводили в физиологическом растворе (в среднем 140×106 клеток на 200 мл) внутривенно капельно со скоростью 50 мл/ч. Клиническую эффективность (оценки по шкале Роднана) оценивали по критериям Европейской группы исследований и исследований по склеродермии (2017).

Материалом для морфологического исследования послужил биопсийный материал кожи голени, взятый методом панч-биопсии у 15 пациентов до клеточной терапии и у 9 пациентов через 3 месяца после трансплантации при клиническом улучшении состояния кожных покровов. Гистологические парафиновые срезы окрашивались гематоксилином и эозином, а также по Массон – трихром. Для электронной микроскопии биопсийные кусочки кожи проводили по общепринятой методике и заключали в Эпон. Полутонкие срезы окрашивали метиленовым синим, азуром – 2 и основным фуксином по C. Humphrey и F. Pittman [5]. Ультратонкие срезы для ЭМ контрастировали уранилацетатом и цитратом свинца.

Результаты

Кожа больных ССД до лечения находилась в состоянии индурации и характеризовалась дистрофией, атрофией и деструкцией эпидермиса, склерозированием и гиалинозом соединительной ткани дермы, патологией сосудов микроциркуляторного русла. Ультраструктура миофибробластов, расположенных в склерозированной дерме характеризовалась признаками функциональной перегрузки. Активные участники процесса фибрилогенеза располагались в периваскулярной зоне и были представлены лимфоцитами и фибробластами особой склеродермаспецифической популяции, продуцирующими повышенное количество коллагена и межуточного матрикса.

Через три месяца после трансплантации ГСК в основной группе пациентов отмечался выраженный клинический эффект со значительным уменьшением индурации кожи, дисфагии, купировались мышечные контрактуры, уменьшались приступы вазоспазма (синдром Рейно). Достоверно уменьшались плотность кожи со снижением кожного счета по Роднану на 4,2 балла с 12,9 до 8,7 (в контрольной группе – лишь на 1 балл). Трансплантация ГСК способствовала биодеградации фиброзной ткани кожи больных ССД основной группы. Подвергались деструкции миофибробласты, увеличивалось количество и протяженность капилляров, менялся клеточный состав периваскулярного инфильтрата, направленный ранее на активный процесс фибрилогенеза. Появлялись многочисленные фагоцитарные и секреторные макрофаги, участвующие в выделении индукторов ангиогенеза, ремоделировании ткани, регуляции количества и активности фиброкластов, супрессии Т- и В-лимфоцитарных механизмов иммунитета, играющих важную роль в патогенезе ССД. Обширные межклеточные связи, предположительно, телоцитов свидетельствовали об их участии в неоангиогенезе и передаче сложных регулирующих сигналов в процессе регенерации.

Выводы

Трансплантация культивированных аутологичных гемопоэтических стволовых клеток костного мозга больным ССД способствовала биодеградации склерозированной ткани дермы, стимуляции ангиогенеза, восстановлению эпителия и придатков кожи через 3 месяца после трансплантации, что соответствовало признакам улучшения клинической симптоматики.

Ключевые слова

Системная склеродермия, трансплантация гемопоэтических стволовых клеток, костный мозг, морфология кожи.


Том 9, Номер 2
30.07.2020

Загрузить версию в PDF

doi 10.18620/ctt-1866-8836-2020-9-2-60-66
Отправлено 09 Апреля 2020
Одобрено 05 Июня 2020

Возврат к списку