Результаты внедрения контроля качества на этапе введения диметилсульфоксида в аутологичный трансплантат гемопоэтических стволовых клеток
Евгений В. Коротаев1, Андрей А. Степанов1, Сергей А. Пономарев1, Алексей Н. Косарев1, Светлана С. Каракальчева1, Елена Е. Зинина2
1 Югорский НИИ клеточных технологий, Ханты-Мансийск, Россия
2 Сургутская окружная клиническая больница, Сургут, Россия
Резюме
При проведении аутологичной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (ауто-ТГСК) обычно не учитывается снижение сохранности ГСК на этапе введения криопротектора. Между тем, введение концентрированного диметилсульфоксида (ДМСО) негативно воздействует на клеточные мембраны, что ведет к гибели ГСК. Применение контроля качества на данном этапе позволит оптимизировать сохранность ГСК. Целью работы была оптимизация сохранности ГСК путем внедрения контроля качества на этапе введения криопротектора.
Материалы и методы
Исследование проведено на 467 концентратах ГСК, полученных путем лейкоцитафереза из периферической крови у 86 пациентов с гемобластозами. 167 концентратов составили группу до оптимизации, 300 – опытную группу. гемобластозами. 167 концентратов составили группу до оптимизации, 300 – опытную группу. Конечная концентрация ДМСО в клеточной взвеси – 7,5%. Сохранность количества ГСК и их суммарная колониеобразующей активность (КОЕ) рассчитывалась как отношение результатов после введения криопротектора в криопакет и до него. Количество ГСК определяли по фенотипу CD34+/CD45dim/7AAD и сохранность мембран ядросодержащих клеток (ЯСК) по фенотипу CD45/7AAD оценивали проточной цитометрией (ISHAGE). Колониеобразующая активность ГСК (КОЕ) оценивали путем их 14-суточного культивирования в системе Methocult H4435 и подсчетом суммарных колоний (КОЕ). Подсчет ядросодержащих клеток (ЯСК) выполнялся с помощью обычной световой микроскопии.
Результаты
В группе до оптимизации сохранность ГСК составила 79,4±29,0%. Корреляционный анализ показал, что сохранность ГСК, КОЕ и целостность мембран клеток зависит от концентрации ЯСК (рис. 1). В части лейкоконцентратов была повышенной концентрация ЯСК (150-370)×109/л, при сохранности ГСК, в среднем, 35,5±28%. Для решения проблемы низкой сохранности мы предложили оптимизировать этот этап: перед внесением криопротектора мы разбавляли лейкоконцентраты ГСК реополиглюкином – известным плазмозаменителем – до конечной концентрации 150×109/л (при концентрации ЯСК>150×109/л). Благодаря этому сохранность ГСК увеличилась (p≤0,05) до 91±14,0% (рис. 2).
Заключение
Сохранность ГСК на этапе введения ДМСО зависит от концентрации ЯСК в лейкоконцентрате. Контроль количества ЯСК и разведение лейкоконцентратов позволяет увеличить сохранность ГСК.
Ключевые слова
Криоконсервация, диметилсульфоксид, контроль качества, гемопоэтические стволовые клетки, аутологичная трансплантация.
