Оценка молекулярного приживления гемопоэтических стволовых клеток на основе анализа STR

Резюме

Мониторинг химеризма – основной способ контроля процесса приживления трансплантата. Оценка динамики приживления у онкогематологических больных является важным для выбора тактики лечения и дальнейшего ведения пациента.

Пациенты и методы

С целью оценки приживления было проанализировано 38 пациентов с онкогематологическими заболеваниями, которым с 2017 по 2019 год было проведено 38 трансплантаций гемопоэтических стволовых клеток (ТГСК), из них 13 женщин (34%) и 25 мужчин (66%). Медиана возраста на момент трансплантации составила 33 (диапазон 2-47) года. Среди доноров распределение по полу было 19 женщин (50%) и 19 мужчин (50%). Пациенты были поделены на две группы: пациенты после аллогенной ТГСК (алло-ТГСК) 26 (68%), 12 (32%) пациентов после гаплоидентичной ТГСК (гапло-ТГСК).

Определение химеризма проводилось методом полимеразной цепной реакции коротких тандемных повторов – (STR-ПЦР) в периферической крови на 30, 60 и 100-й дни после ТГСК. При выявлении смешанного химеризма исследование проводили чаще. Для амплификации маркеров использовали коммерческий набор AmpFlSTR® Identifiler® Plus Kit (UK), разделение продуктов ПЦР производили с помощью капиллярного электрофореза на анализаторе 3500 Genetic Analyzer (HITACHI Applied Biosystems, Япония). Идентификацию аллелей осуществляли с использованием программного обеспечения Chimer Мarker v3.1.0.

Результаты

По соотношению пар донор/реципиент чаще встречались сочетания донор-женщина/ реципиент-мужчина (15 пар), донор-мужчина/ реципиент-мужчина (13 пар), реже встретились сочетания донор-мужчина/реципиент-женщина и донор-женщина/ реципиент-женщина. При оценке приживления все маркеры были информативны для исследуемых пар донор/реципиент. По степени значимости локусы у пар алло-ТГСК распределялись следующим образом: D13S317/D18S51>D5S818/D16S539/D21S11/ D7S820 > TH01/AMEL/FGA/D8s1179/D2S1338 > CSF1PO/D3S1358/TPOX > D19S433/VWA. Количество информативных локусов между парами донор/реципиент составило 4-13. У пар гапло-ТГСК распределение локусов следующее: D13S317/D7S820/ AMEL > D16S539/D2S1338/D18S51 > D5S818/FGA > D8s1179/D21S11/CSF1PO/D3S1358/VWA > D19S433 > TH01/TPOX, с количеством информативных локусов 1-8. По результатам анализа полный донорский химеризм (99-100%) у гапло-ТГСК был установлен у 2 (18%) пациентов на 30 день после ТГСК, по степени соответствия 5/10 и 6/10 по HLA системе, у оставшихся 10 наблюдался смешанный химеризм. На 100 сутки 2 из 10 вышли на полный донорский химеризм. У 11 пар с алло-ТГСК был выявлен полный химеризм, среди них степень сочетания HLA у 9 пар – 10/10 и у двух пар – 5/10. К 100 суткам у 3 наблюдался переход со смешанного химеризма к полному.

Выводы

Анализ показал зависимость соответствия HLA системы и источника перенесенной ТГСК (алло- или гапло-ТГСК). Мониторинг химеризма после трансплантации является неотъемлемой частью более эффективного прогнозирования развития рецидива и фактором улучшения выживаемости пациентов после ТГСК.

Ключевые слова

Химеризм, приживление, трансплантация гемопоэтических стволовых клеток, STR- локусы.