Однородительская дисомия в геноме опухолевых клеток как фактор неблагоприятного прогноза при остром лимфобластном лейкозе

Резюме

Явление однородительской дисомии (ОРД), или потери гетерозиготности без изменения копийности ДНК, описано для ряда опухолей, в том числе и для острых лимфобластных лейкозов. При ОРД хромосомы или их участки (которые могут содержать мутации в генах, ассоциированных с опухолевой трансформацией) оказываются в гомозиготной форме. К сожалению, стандартный цитогенетический анализ не выявляет ОРД. Однако, признаком ОРД является потеря гетерозиготности по генетическим маркерам в сочетании с нормальной копийностью хромосомы. Целью работы было сопоставление данных цитогенетического анализа и потери гетерозиготности в STR-локусах, выявление ОРД в бластных клетках пациентов с ОЛЛ в начале заболевания и анализ исходов терапии для этой группы пациентов относительно пациентов без потери гетерозиготности. Если ОРД для пациентов с de novo ОЛЛ окажется неблагоприятным фактором прогноза, эти пациенты, возможно, должны рассматриваться как группа высокого риска и кандидаты первой очереди на трансплантацию костного мозга.

Пациенты и методы

Данное исследование включает сравнительный анализ STR-профилей ДНК опухоли и нормальных клеток из образцов костного мозга от 32 пациентов с диагнозом de novo ОЛЛ, проходящих лечение по схеме «ОЛЛ-2016» в Национальном исследовательском центре гематологии (Москва, Россия). Критерии включения: de novo диагностированный Ph-отрицательный острый лимфобластный лейкоз,18-55 лет, группа среднего риска без транслокации MLL t (4; 11) (q21; q23). Критерии исключения: другой диагноз, взрослые пациенты старше 55 лет, транслокация MLL t (4; 11) (q21; q23), лечение по другому протоколу. Наличие бластных клеток в образцах костного мозга подтверждено морфологически, кариотип опухоли установлен стандартным цитогенетическим анализом. Образцы контрольной ДНК были взяты из крови пациентов с полной ремиссией и/или из буккального эпителия. STR-профили изучали посредством ПЦР с мультиплексным набором COrDIS Plus для амплификации 19 полиморфных STR-маркеров и маркеры амелогенина (Gordiz Ltd, Россия). Разделение фрагментов проводили на генетическом анализаторе ABI 3130 с последующим анализом программным обеспечением GeneMapper v.4-0. Пакет SAS V9 /4 был использован для статистического анализа данных. Анализ бессобытийной выживаемости был использован для оценки потери гетерозиготности как фактора риска. Смерть от любых причин, рецидив и второй лейкоз были выбраны в качестве событий неудачи, интервал времени выживания отсчитывался от начала лечения.

Результаты

У шести из 32 пациентов была обнаружена потеря гетерозиготности в определенных локусах STR (19%). Из этих шести двое были устойчивы к терапии и умерли от прогрессии заболевания. Один пациент с потерей гетерозиготности в настоящее время находится в рецидиве, и один пациент с множественный потерей гетерозиготности имеет второй лейкоз (Рис. 1a). Только двое из шести пациентов в настоящее время находятся в ремиссии. В группе контроля погибли только трое из 26 (двое от инфекционных осложнений и один от РТПХ после ТКМ).

Выводы

Мы обнаружили статистически значимую ассоциацию клинических неудач с потерей гетерозиготности в геноме бластных клеток (Рис. 1б). Для всех шестерых пациентов группы риска была найдена потеря гетерозиготности в STR-маркерах, не связанная с делециями или моносомией, выявленными стандартным цитогенетическим анализом (для одной пациентки однородительская дисомия была подтверждена хромосомным микроматричным анализом – см. Рис. 2). Возможно, однородительская дисомия является неблагоприятным прогностическим фактором для всех пациентов с ОЛЛ и может быть использована как фактор стратификации риска и выбора адекватной терапии, предполагающей трансплантацию аллогенных гемопоэтических стволовых клеток, или применение современных инновационных методов терапии.

Ключевые слова

Острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ), однородительская дисомия, потеря гетерозиготности.