Восстановление Т-клеток памяти у больных острыми лейкозами после трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток при использовании альтернативных схем профилактики острой реакции трансплантат против хозяина (оРТПХ)

Резюме

Введение

Т-клетки памяти представляют собой гетерогенную субпопуляцию иммунных клеток, участвующих в развитии аллоиммунных реакций после алло-ТГСК – реакции трансплантат против опухоли (РТПО) и РТПХ. В настоящее время созданы новые программы иммуносупрессивной терапии, но единого унифицированного подхода профилактики острой РТПХ не существует. Необходимость проведения иммуносупрессии, особенно при несовместимых/гаплоидентичных алло-ТГСК, когда требуется максимальная иммуноаблация, позволяет контролировать развитие/течение РТПХ. Однако необходимость своевременной реконституции иммунной системы является ключевым фактором для реализации противоопухолевого контроля. Цель работы состояла в оценке влияния различных схем профилактики острой РТПХ на восстановление субпопуляций Т-клеток памяти и их предшественников у больных острыми лейкозами после алло-ТГСК.

Материалы и методы

В исследование включены 39 пациентов с острыми лейкозами, которым была выполнена алло-ТГСК в ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава РФ. Медиана возраста составила 36 лет (17-60 лет). Альтернативные программы профилактики острой РТПХ использовали при несовместимых/гаплоидентичных алло-ТГСК (n=17), которые включали в себя посттрансплантационный циклофосфамид (ПТ-ЦФ) на +3, +4 день или Тαβ-деплецию у молодых пациентов. В контрольную группу мы включили пациентов с классическим режимом иммуносупрессии (классическая ИСТ) с использованием циклоспорина А в сочетании с микофенолатом мофетилом и малыми дозами метотрексата, применяемых после совместимой родственной/неродственной алло-ТГСК (n=22). Характеристика больных, включенных в исследование, схемы профилактики РТПХ, частота развития острой РТПХ и рецидивов заболевания приведена в таблице 1.

Таблица 1. Характеристика пациентов

Рисунок 1. Восстановление субпопуляций Т-клеток памяти у больных острыми лейкозами после алло-ТГСК

Примечание. На графике показаны значимые отличия (p<0,005) по количеству клеток в субпопуляциях CD4+/CD8+ Т-клеток памяти при использовании альтернативных режимов профилактики оРТПХ – ПТ-ЦФ или Т-деплеции, в сравнении с классической ИСТ.

Для исследования реконституции субпопуляций Т-клеток памяти использовали нативные образцы перифе-рической крови больных после алло-ТГСК на +30, +60, +90 день. С помощью метода многоцветной проточной цитометрии (BD FACS Canto II, Becton Dickinson, USA) были определены следующие субпопуляции Т-клеток памяти периферической крови: Т-наивные и стволовые клетки памяти (Tnv+Tscm) – CD8+/СD4+ CD45R0-CCR7+CD28+; T-клетки центральной памяти (Tcm) – CD8+/СD4+ CD45R0+CCR7+CD28+; T-клетки тран-зиторной памяти (Ttm) – CD8+/СD4+ CD45R0+CCR7-CD28+; T-клетки эффекторной памяти (Tem) – CD8+/СD4+ CD45R0+CCR7-CD28-; T- терминальные эффек-торы (Tte) – CD8+/СD4+ CD45R0-CCR7-CD28-. Для оценки различий между двумя независимыми выборками использовали U-критерий Манна-Уитни. Значениер<0,05 считали статистически значимым. Весь анализ данных проводили с использованием SPSS ver 23. (IBM, Chicago,Ill., USA).

Результаты

Данные представлены на рисунке 1. Показано, что на +30, +60, +90 день абсолютное количество CD8+ Tnv+Tscm после классической ИСТ было значимо больше, чем после использования ПТ-ЦФ или Тαβ-деплеции. На +30 день абсолютное количество CD8+ Tnv+Tscm после использования классической схемы профилактики РТПХ составило 4,22 кл/мкл (1,21-7,0кл кл/мкл), после ПТ-ЦФ – 0,38 кл/мкл (0,17-0,63 кл/мкл) (p=0,001), после Т-деплеции – 0,14 кл/мкл (0,05-0,15 кл/мкл) (р=0,03). На +60 день – 2,57 кл/мкл (1,49-4,99 кл/мкл) после классической ИСТ; 0,12 кл/мкл (0,02-0,15 кл/мкл) после Т-деплеции; 1,1 кл/мкл (0,72-2,8 кл/мкл) после ПТ-ЦФ (p=0,009). На +90 день – 4,29 кл/мкл (2,08-6,58 кл/мкл) после классического режима; 1,82 кл/мкл (0,16-3,3 кл/мкл) после ПТ-ЦФ; 0,35 кл/мкл (0,01-0,7 кл/мкл) после Т-деплеции (p=0,035). На +30, +60 день абсолютное количество CD8+ Tcm было значимо меньше после использования альтернативных подходов в сравнении с классической ИСТ – на +30 день 1,07 кл/мкл (0,27-1,75 кл/мкл) после классической ИСТ, 0,25 кл/мкл (0,12-0,68 кл/мкл) после ПТ-ЦФ (р=0,032), 0,18 кл/мкл (0,01-0,34 кл/мкл) после Т-деплеции (р=0,036); на +60 день 0,9 кл/мкл (0,65-1,68 кл/мкл), 0,42 кл/мкл (0,33-0,73 кл/мкл), 0,05 кл/мкл (0,01-0,07 кл/мкл) соответственно (р=0,02). Абсолютное количество CD4+ Tnv+Tscm на +30 день было значимо больше после применения классической схемы профилактики РТПХ – 16,1 кл/мкл (2,1-55,0 кл/мкл), в сравнении с использованием ПТ-ЦФ – 1,35 кл/мкл (0,7-5,36 кл/мкл) и Т-деплеции – 0,31 кл/мкл (0,27-0,71 кл/мкл) (р=0,05). Субпопуляция Тtm CD8+ на +60, +90 дни и CD4+ на +30 день отличалась при использовании классической ИСТ и альтернативных режимов (Рисунок 1). Мы не выявили корреляции между числом Tnv+Tscm, Tcm, Ttm, Tem, Tte и развитием оРТПХ или рецидива заболевания.

Заключение

Субпопуляция наивных и стволовых Т-клеток памяти является пулом клеток-предшественников для целого эффекторного звена Т-клеток (Ttm, Tem, Tte), реализующего аллоиммунный ответ. Значимое уменьшение пула CD4+/CD8+ Tnv+Tscm, CD8+ Tcm после использования альтернативных схем профилактики острой РТПХ может свидетельствовать о более глубокой иммуноаблации при этих режимах, используемых при несовместимых/гапло-ТГСК. За счет этого сохраняющееся низкое количество Tnv+Tscm на +60, +90 день, как клеток-предшественников для целой популяции Т-клеток памяти, может свидетельствовать об отсроченной реконституции адаптивного звена иммунного ответа при альтернативных режимах профилактики оРТПХ.

Ключевые слова

Т-клетки памяти, реконституция иммунной системы, трансплантация аллогенных гемопоэтических стволовых клеток, профилактика острой РТПХ.