Поиск прогностических биомаркеров у взрослых пациентов при родственных и неродственных трансплантациях гемопоэтических стволовых клеток с посттрансплантационным циклофосфаном
2 Лаборатория диагностики аутоиммунных заболеваний, Первый Санкт-Петербургский Государственный Медицинский Университет им. И. П. Павлова
Резюме
Введение
В настоящий момент существует ряд биомаркеров, которые обладают прогностическим значением в отношении реакции «трансплантат против хозяина» (РТПХ), трансплантационной летальности (ТЛ) и рецидивов основного заболевания. Однако, валидация этих биомаркеров преимущественно выполнялась после классической профилактики РТПХ, включающий ингибитор кальциневрина, метотрексат/микофенолат и антитимоцитарный глобулин при неродственных трансплантациях. Число исследований прогностического значения биомаркеров после посттрансплантационного циклофосфана (ПТЦф) крайне ограничено.
Пациенты и методы
С 2015 по 2016 было проведено проспективное исследование с включением 79 реципиентов аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (ТГСК). В исследование были включены только пациенты в ремиссии острого лейкоза, 34% с острым лимфобластным лейкозом, 66% с острым миелобластным. В первой ремиссии ТГСК выполнялась 68% пациентов, во второй – 27%, в третьей – 5%. Двадцати шести пациентам выполнена ТГСК от родственного донора с источником трансплантата – костный мозг, 53 – выполнена неродственная ТГСК с источником трансплантата – стволовые клетки периферической крови. Профилактика РТПХ при родственных включала только ПТЦф 50 мг/кг в Д+3,+4 без дальнейшей иммуносупрессии, при неродственных – комбинацию ПТЦф, такролимуса и микофенолата мофетила. Медиана возраста составила 35 лет (диапазон 18-59). Было проведено расширенное исследование трансплантата методом проточной цитометрии (цитометр FACS ARIA II, моноклональные антитела Miltenyi biotec). Исследовалось наличие следующих популяций лимфоцитов: CD3, CD4, CD8, CD16CD56, NKT, iNKT, Т-регуляторы, дубль-позитивные Т-клетки, дубль-негативные Т-клетки, TCRalpha/beta, Т-клетки памяти TCR v11. Также исследовались замороженные образцы плазмы методом ИФА: VEGF A в Д0, растворимый рецептор к ФНОальфа, ИЛ-8, ИЛL-6, растворимый рецептор к ИЛ-2 (ИЛ-2Р) в Д+7, и ST2, ИЛ-17, растворимый рецептор к ФНОальфа в Д+21-30 (образец после приживления).
Результаты
При медиане наблюдения 15 месяцев общая выживаемость (ОВ) в исследуемой группе составила 79%, трансплантационная летальность – 6%, частота рецидивов – 20%, бессобытийная выживаемость – 75%, острая РТПХ II-IV степени – 13%, III-IV степени – 5%, хроническая РТПХ средней и тяжелой степени – 22%. Трансплантационная летальность в группе пациентов с РТПХ составила 0%. Несмотря на то, что в ROC анализе содержание Трег (AUC 0.608), CD4 (0.628) и iNKT (0.630) в трансплантате имели предиктивное значение, различия были не значимы из-за низкой частоты РТПХ (р>0.07). Прогностическим значением в отношении хронической РТПХ обладал ИЛ-17 при измерении на Д+30 (AUC 0.615, 57% против 29%, р=0.017). Наиболее прогностическими популяциями в трансплантате в отшении ОВ были CD3 (AUC 0.626), CD4 (AUC 0.628), CD8 (AUC 0.653), NKT (AUC 0.615), TCRalpha/beta (0.634), iNKT (0.615), iNKT CD8+ (0.613дубль-позитивные T-клетки (AUC 0.657). Прогностическая значимость цитокинов в отношении ОВ была ограничена, за исключением ИЛ-2Р (AUC 0.610). Различия в ОВ в основном были связаны с рецидивом основного заболевания. Например, содержание CD8 клеток в трансплантате >18% достоверно повышало вероятность рецидива (53% vs 12%, p<0.001). Такой же тренд наблюдался и для других популяций. Наблюдаемый фенотип со сниженной реакцией трансплантат-против-лейкоза наблюдался независимо от источника трансплантата (р=0.57), развития острой (р=0.37) или хронической РТПХ (р=0.50).
Заключение
Исследованные биомаркеры РТПХ обладали ограниченным прогностическим значением после родственных и неродственных ТГСК с ПТЦф, что связано с низкой частотой развития этого осложнения и нулевой РТПХ-ассоциированной летальностью. Тем не менее, было выявлено, что пацинты, которым выполнена трансфузия трансплантата с высоким содержанием эффекторных популяций лимфоцитов, имели повышенный риск рецидива после трансплантации. Биологическое обоснование этому феномену может быть получено в дальнейших исследованиях иммунной реконституции этих популяций.
Конфликт интересов
Данное исследование проведено при поддержке РФФИ, грант № 16-34-60142 мол_а_дк.
Ключевые слова
Трансплантация гемопоэтических клеток, реакция «трансплантат против хозяина», циклофосфамид, профилактика, биомаркеры, эффективность.