Определение гемопоэтических стволовых клеток в периферической крови и продукте афереза на гематологическом анализаторе Sysmex XN (XN-HPC): клинический случай
Резюме
Введение
Рутинным методом определения количества гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) является проточная цитофлуориметрия с использованием меченых антител и витального красителя. К серьезным недостаткам данного метода можно отнести сложность стандартизации, отсутствие автоматизации, большие трудозатраты квалифицированного персонала, а также относительная дороговизна расходных материалов. В связи с высокой потребностью частого определения ГСК в периферической крови (ПК) и продуктах афереза существует необходимость разработки стандартизированных, автоматизированных методов. Sysmex-XN является использующимся в клинической практике гематологическом анализатором, имеющим все необходимые возможности для стандартизации проводящихся на нем исследований. В настоящее время разработана возможность определения количества ГСК на Sysmex-XN в канале WPC в режиме XN-HPC. Определение ГСК данным методом является исследовательским, но в перспективе может быть внедрено в клиническую практику в дополнение к рутинному методу в случае получения сопоставимых данных. Целью работы было сравнение данных по количественному определению ГСК в ПК и продукте афереза после мобилизации с помощью Г-КСФ двумя методами, а также трудовых и финансовых затрат.
Методы
В качестве стандарта использовался метод подсчета ГСК: подсчет лейкоцитов в камере Горяева и проточная цитофлуориметрия с маркерами CD45/CD34/7AAD (BD; San Jose, USA) на аппарате BD FacsCalibur по протоколу ISHAGE. Исследуемый метод – автоматизированный метод подсчета ГСК, доступный на анализаторах Sysmex XN (XN-HPC) в канале WPC, основанный на измерении размера, структуры и интенсивности флуоресценции клеток. Пробы ПК и продукта афереза забирались для исследований из одних образцов. Заготовка ГСК проводилась на сепараторе COBE Spectra.
Результаты
Представляется клинический случай пациентки Г., 2 г. 4 мес., рост 85,5 см., вес 15 кг, с диагнозом медуллобластома. Для лечения рецидива планируется высокодозная химиотерапии с аутотрансплантацией ГСК. Заготовка ГСК ПК проводилась после стимуляции Г-КСФ в дозе 10 мкг/кг однократно в течение 5-ти дней. На пятый день выполнен аферез. Объем перфузии составил 2900.0 мл, получено 230.0 мл концентрата. Результаты исследований представлены в таблицах: (1) количественное определение ГСК в ПК, (2) оценка количества ГСК в аферезном концентрате, (3) оценка финансовых и трудозатрат (без учета амортизации оборудования и коммунальных затрат).
Выводы
Представленный клинический случай демонстрирует, что результаты количественного определения ГСК на анализаторе Sysmex-XN сопоставимы с результатами рутинного метода, в то время как трудовые и финансовые затраты по меньшей мере в 3 раза ниже. Быстрота получения результата и относительно низкая стоимость позволяет предложить использование количественного определения ГСК на анализаторе Sysmex-XN в качестве дополнительного скринингового метода, результаты которого в дальнейшем будут валидироваться стандартным методом исследования. Внедрение нового скринингового метода определения ГСК приведет к оптимизации алгоритмов проведения афереза и, как следствие, получению трансплантатов ГСК лучшего качества. Тем не менее, для использования нового метода в клинической практике необходимо проведение сравнительных исследований по количественному определению ГСК в ПК и продуктах афереза от широкой когорты доноров/пациентов.
Ключевые слова
Гемопоэтические стволовые клетки, заготовка ГСК, периферическая кровь, продукт афереза, проточная цитометрия, Sysmex-XN, скрининг количества ГСК.