Влияние высокодозного циклофосфамида на реконституцию Т цитотоксических клеток памяти в костном мозге у больных после трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток

Резюме

Введение

Трансплантация аллогенных гемопоэтических стволовых клеток (алло-ТГСК) является одним из наиболее эффективных методов лечения больных гемобластозами. Успех алло-ТГСК зависит от многих факторов, таких как возраст больного, коморбидность, режим кондиционирования и др. Однако, определяющим фактором успешной алло-ТГСК является реконституция иммунной системы. Т цитотоксические CD8+ клетки памяти в костном мозге представляют собой популяцию клеток, обеспечивающих противоопухолевый и противоинфекционный иммунный ответ. В данном исследовании показано влияние посттрансплантационного циклофосфамида (ЦФ) на реконституцию Т цитотоксических клеток памяти в костном мозге у больных после алло-ТГСК. Целью работы было изучение реконституции Т цитототоксических CD8+ клеток памяти в костном мозге у больных после алло-ТГСК.

Пациенты и методы

Для определения CD8+ клеток памяти были использованы образцы костного мозга (КМ) 19 больных с гемобластозами (муж. 9, жен. 10) на сроках +30, +60, +90 дней после алло-ТГСК. Медиана возраста больных 36 лет (20-60 лет). Алло-ТГСК была выполнена больным с ОЛЛ (n=3), ОМЛ (n=13), ЛПЗ (n=3). На момент алло-ТГСК 16 пациентов находились в ремиссии заболевания и 3 больным алло-ТГСК выполнена в прогрессии заболевания. Миелоаблативный режим кондиционирования применялся у 7 больных, режим пониженной интенсивности – у 12. В качестве иммуносупрессивной терапии использовались классические схемы (n=12) или применялся высокодозный циклофосфамид (ЦФ) на +3, +4 день в сочетании с другими иммуносупрессивными агентами (n=7): ЦсА+ММФ+МТХ+АТГ (n=11), ЦФ+АТГ (n=2), ЦсА+ММФ+ЦФ+АТГ (n=5), ЦсА+МТХ (n=1). Исследование образцов КМ для определения Т клеток памяти проведено с использованием метода проточной цитометрии (BD FACS Canto II, Becton Dickinson, USA). Для идентификации субпопуляций Т клеток памяти применялся стандартный протокол с использованием анти-CD8-APC-Cy7, анти-CCR7-PE-Cy7, анти-CD28-PE, анти-CD45R0-FITС антител (Becton Dickinson, USA): T наивные и T стволовые клетки памяти (Tnv+Tscm) – CD8+CD45R0-CCR7+CD28+; T клетки центральной памяти (Tcm) – CD8+CD45R0+CCR7+CD28+; T клетки транзиторной памяти (Ttm) – CD8+CD45R0+CCR7- CD28+; T клетки эффекторной памяти (Tem) – CD8+CD45R0+CCR7-CD28-; T терминальные эффекторы (Tte) – CD8+CD45R0-CCR7-CD28-. Для исключения из анализа мертвых клеток применялся 7-AAD. Для оценки различий между двумя независимыми выборками использовался U-критерий Манна-Уитни. Значение р<0,05 считалось статистически значимым. Весь анализ данных проводился с использованием SPSS ver 23. (IBM, Chicago, Ill., USA).

Результаты

По данным проведенного исследования, в этих подгруппах больных получено значимо меньшее количество наивных и стволовых CD8+ клеток памяти (Tnv+Tscm) в костном мозге у пациентов в течение первых 100 дней после алло-ТГСК, получивших с целью индукции толерантности высокодозный ЦФ на +3,+4 день, в сравнении с классическими схемами иммуносупрессивной терапии (р<0.05). Полученные данные представлены в таблице 1.

Заключение

Наивные и стволовые CD8+ клетки памяти (Tnv+Tscm) представляют собой самостоятельную субпопуляцию клеток в костном мозге, которые способны к антигеннезависимой пролиферации, что является ключевым моментом в реализации вторичного (адоптивного) иммунного ответа. В данном исследовании показано влияние посттрансплантационного ЦФ, используемого в режимах профилактики РТПХ, на Т цитотоксические клетки памяти. Вероятно, малое число наивных и стволовых CD8+ клеток памяти (Tnv+Tscm) в костном мозге после использования ЦФ является ключевым фактором в механизме профилактики РТПХ. Однако этот факт может иметь значение и в развитии как инфекционных осложнений, так и рецидивов заболевания после алло-ТГСК.

Ключевые слова

Трансплантация гемопоэтических стволовых клеток, клетки памяти костного мозга, Т цитотоксические клетки, реконституция иммунной системы, высокодозный циклофосфамид.