ISSN 1866-8836
Клеточная терапия и трансплантация

Производство лекарственных препаратов на основе аутологичных Т-лимфоцитов с анти-CD19 химерным антигенным рецептором с использованием автоматизированного полностью закрытого и бессывороточного технологического процесса

Владислав С. Сергеев1,2, Наталья В. Емельянова2, Владислав В. Маркелов1, Иван Н. Гапоненко1, Кирилл В. Лепик1, Алена И. Шакирова1, Татьяна Л. Нехаева2, Ирина А. Балдуева2, Илья С. Зюзгин2, Марина О. Попова1, Александр Д. Кулагин1

1 НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р. М. Горбачевой, Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И. П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия
2 Национальный медицинский исследовательский центр им. Н. Н. Петрова, Санкт-Петербург, Россия

doi 10.18620/ctt-1866-8836-2023-12-4-50-57
Отправлено 28 Ноября 2023
Одобрено 15 Декабря 2023

Резюме

Препараты аутологичных Т-лимфоцитов c анти-CD19 химерными рецепторами (анти-CD19 CAR-T) могут быть произведены с использованием закрытых автоматизированных систем, которые являются, вероятно, наиболее удобным форматом для «point-of-care» производства. Тем не менее, для полного соответствия надлежащим практикам и использования окружающих условий с относительно низким классом чистоты процессы производства должны осуществляться в полностью закрытом формате и без использования пулированных продуктов крови человека. Тестирование процесса производства, полностью соответствующего необходимым требованиям, являлось предметом настоящего исследования.

Материалы и методы

Для производства продуктов CAR-T в качестве исходного материала использовались обогащенные мононуклеарами продукты афереза от 5 здоровых доноров. Производство осуществлялось с использованием закрытой автоматизированной системы для процессинга клеток CliniMACS Prodigy, реагентов и расходных материалов класса GMP производства Miltenyi Biotec, дополнительных мероприятий для осуществления процесса в полностью закрытом формате и без использования пулированных продуктов крови человека. Анализ ключевых характеристик исходных материалов, промежуточных продуктов и финальных продуктов осуществлялся с помощью метода проточной цитометрии, программного обеспечения MACS Quantify и экспресс-модов. Пролиферативный потенциал CAR+ Т-клеток анализировался в тесте хронической стимуляции.

Результаты

Получено 5 препаратов аутологичных анти-CD19 CAR-T с воспроизводимыми ключевыми характеристиками: уровень трансдукции Т-лимфоцитов в среднем составил 62,41% ± 3,32%, абсолютное количество CAR+ Т-лимфоцитов – 2462,0 ± 205,7 млн клеток, жизнеспособность клеток в суспензии после отмывки перед этапом криоконсервирования – 96,2% ± 0,37%. В тесте хронической стимуляции CAR+ клетки полученных препаратов продемонстрировали выраженный пролиферативный потенциал с пиком экспансии на 4 раунд стимуляции.

Заключение

В исследовании продемонстрирована возможность производства препаратов анти-CD19 CAR-T с использованием закрытой полуавтоматизированной системы для процессинга клеток CliniMACS Prodigy и полностью закрытого бессывороточного технологического процесса. Разработанный технологический процесс отвечает необходимым требованиям надлежащих практик и может широко использоваться для безопасного «point-of-care» производства препаратов анти-CD19 CAR-T с воспроизводимыми ключевыми характеристиками в условиях окружающей среды относительно невысокого класса чистоты.

Ключевые слова

Химерный антигенный рецептор, CD19, Т-лимфоциты, CAR-T, закрытые процессы производства, CliniMACS Prodigy.


Том 12, Номер 4
29.12.2023

Загрузить версию в PDF

doi 10.18620/ctt-1866-8836-2023-12-4-50-57
Отправлено 28 Ноября 2023
Одобрено 15 Декабря 2023

Возврат к списку