DT-03. Определение D слабого у доноров с помощью молекулярно-генетического типирования

Резюме

Определение антигена D при исследовании резус-принадлежности крови является важной составляющей тестирования доноров и реципиентов для профилактики посттрансфузионных осложнений (ПТО) гемолитического типа. Экспрессия антигена D зависит от количества антигенных детерминант (эпитопов) на эритроцитах. У здоровых индивидов с резус-положительной принадлежностью крови чаще экспрессированы все эпитопы антигена D (нормально выраженный D антиген). Cнижение количества антигенных эпитопов D на поверхности эритроцитов приводит к слабой агглютинации или ее отсутствию при тестировании образца крови серологическими методами. Вследствие высокого полиморфизма гена RHD существуют варианты антигена D, сложнодиагностируемые серологическими методами, например слабый D (D weak). Доноры с D слабым антигеном типов 1, 2, 3 являются резус-положительными, заготовленные от них гемокомпоненты нельзя использовать для трансфузий резус-отрицательным реципиентам. При наличии у донора крови D слабого антигена использование только серологических методов может приводить к ошибочному заключению об отрицательной резус-принадлежности и к риску развития ПТО у реципиента. Использование в иммуногематологии молекулярно-генетических методов исследования позволяет выявить варианты антигена D и сократить количество ошибок. Цель работы: определение резус-принадлежности доноров с помощью генотипирования в сложнодиагностируемых случаях.

Материалы и методы

Материалом для исследования служили 20 образцов крови доноров (13 мужчин и 7 женщин, медиана возраста 37 лет), взятых в Российском НИИ гематологии и трансфузиологии, в которых при определении резус-принадлежности были получены неоднозначные результаты. Серологически антиген D определяли гелевой технологией в ID-картах DiaClon ABO/D + Reversе Grouping, содержащих анти-D IgM (BioRad, США) и в непрямом антиглобулиновом тесте (НАГТ) с реактивом ID-DiaClon анти-D IgG (BioRad, США). Характер агглютинации эритроцитов оценивали в интервале от 1+ до 4+. Генетические исследования проводили методом полимеразной цепной реакции в реальном времени, используя набор реактивов RBC-Gene D weak/variant (Inno-Train, Германия), позволяющий идентифицировать слабые D типов 1; 1.1; 2; 3; 4; 4.0; 4.1; 4.2 (DAR); 5; 11; 14; 15, 17. Выделение геномной ДНК осуществляли с помощью комплекта реагентов «ДНК-сорб-В» (AmpliSens, Россия) из цельной крови, взятой в пробирку с 5% К2ЭДТА.

Результаты

В ID-картах, содержащих анти-D IgM, в 5 случаях агглютинация отсутствовала, в 4 случаях результат был сомнительный (+/-). В 11 образцах наблюдалась слабая агглютинация от 1+ до 2+. В НАГТ в 5 образцах агглютинации не наблюдалось, в остальных образцах характер агглютинации колебался от 1+ до 3+. В результате молекулярно-генетического типирования выявлено присутствие D слабых антигенов в 12 образцах. Специфичность D слабого была представлена следующими типами: 1; 1.1; 2; 3. RHD*D weak typе 1 обнаружен у 2 доноров, RHD*D weak typе 1.1. у троих. У 2 доноров выявлен RHD*D weak typе 2. RHD*D weak typе 3 встречался чаще – 5 случаев (25%). Другие типы антигена RHD*D weak (4, 4.0, 4.1, 4.2 (DAR), 5, 11, 14, 15, 17) диагностированы не были. В 3 случаях ген RHD не был обнаружен, установлена отрицательная резус-принадлежность; в 5 случаях обнаружен обычный D антиген.

Заключение

Серологически по результатам НАГТ у 5 доноров верифицируется отрицательная резус-принадлежность, однако только у 3 из них отсутствовал ген RHD, в 2 случаях были обнаружены аллельные варианты антигена RHD*D weak. Применение молекулярно-генетического типирования позволило достоверно установить резус-принадлежность доноров и определить типы слабого антигена D.

Ключевые слова

Резус-принадлежность, определение, групповой D антиген, D слабый.