ISSN 1866-8836
Клеточная терапия и трансплантация

Кокультивирование кардиомиоцитов и эпителиальных стволовых клеток амниона человека в амниотическом двуслойном матриксе в целях кардиомиогенеза

Мухаммад А. Путра1, Нормалина Сандора2, Тиас Р. Кусума2, Нур А. Фитриа2, Три В. Сетисна3, Прибади В. Бусро1, Арднансиа1, Чайдар Муттакин1, Вильям Макдината1, Идрус Альви1

1 Отдел торакальной и сердечно-сосудистой хирургии, факультет медицины, Индонезийский университет, Джакарта, Индонезия
2 Индонезийский институт медицинского образования и исследований, Научный центр репродукции, бесплодия и планирования семьи, Джакарта, Индонезия
3 Отдел сердечной хирургии взрослых, Национальный сердечно-сосудистый центр Харапан Кита, Джакарта, Индонезия

doi 10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-2-72-83
Отправлено 27 Мая 2022
Одобрено 24 Июня 2022

Резюме

В нашем исследовании разрабатывается система культивирования и доставки клеток для регенерации ткани миокарда в зоне инфаркта. Миокардиоциты человека (hCardio) и стволовые эпителиальные клетки амниона человека (hAESC) культивировали совместно на биологическом каркасе, образующем трехмерную (3D) матрицу в качестве возможного материала для заплаты на сердце. Настоящее исследование имело целью определение количественного соотношения миокардиоцитов и клеток амниона при их посеве для оценки лучших условий достижения кардиомиогенеза, а именно 1:5 или 1:6. Это соотношение соответствовало оптимальному числу 500000 клеток на см2, что обеспечивает приготовление заплаты на сердце площадью 12 см2. Это соотношение видов клеток уже сообщалось нами для кокультур стволовых клеток жировой ткани и миокардиоцитов. Миокардиоциты изолировали из операционного материала взятого от пациентов с гипертрофией правого желудочка. В изолированных клеточных популяциях показана экспрессия cTnT (10,7%), cKit/CD117 (16%), ICAM (94%) и PECAM+/VCAM- 33%. Амниотические эпителиальные стволовые клетки (hAESC) получали от доноров-женщин при кесаревом сечении. В этих клетках отмечена экспрессия TRA-1-60 (82,4%), SSEA-4 (28,2%), Oct-3/4 (2,9%), Nanog (11,4%), при отсутствии экспрессии иммунных антигенов, в т.ч., HLA-DR (0%), HLA-ABC (0,2%), а также низкий уровень экспрессии маркеров мезенхимальных стволовых клеток (MSC), т.е. CD73 (20,2%), CD90 (0,4%), CD105 (59,2%). Эти клетки не проявляли фенотипа Lin phenotype (CD3, CD14, CD16, CD19, CD20, CD56). При обоих соотношениях клеток в культуре в матрице выделялись небольшие количества TNF-α (<1 пг/мл) на протяжении культивирования с 1-го по 8-й день. Обе группы экспериментов имели сравнимый уровень роста клеток на протяжении времени. Конфокальные изображения показывают, что клеточная популяция размножалась и мигрировала в глубину до 140 мкм после 5 сут. культивирования кА в группе 1:5, так и в режиме 1:6. При этом отмечалось соединение клеток и образование отростков, начиная с 5 сут., более заметно в опытах с соотношением 1:5. Отмечалась быстрая пролиферация и отсутствие отдельно лежащих клеток после 8 сут. культивирования. Экспрессия генов кардиомиогенеза, в т.ч. cTnT и ACTN2, в группе с соотношением 1:6 на 8 сут. была сравнима с таковой в нормальных кардиомиоцитах. Гены MHC в группе с соотношением клеток 1:6 также экспрессировались, хотя и в меньшей степени, чем в в нормальных кардиомиоцитах. Эта работа показала, что кокультивирование миокардиоцитов и амниотических стволовых клеток при соотношении 1:6 на бислое амниотических клеток может поддерживать развитие кардиомиогенеза из клеток-предшественников.

Ключевые слова

Амниотические эпителиальные клетки человека, кардиомиоциты человека, кардиомиогенез, амниотический бислой, каркас трехмерный, клеточная терапия.


Том 11, Номер 2
30.06.2022

Загрузить версию в PDF

doi 10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-2-72-83
Отправлено 27 Мая 2022
Одобрено 24 Июня 2022

Возврат к списку