AW-02. Результаты отсроченной аутологичной трансплантации стволовых клеток у пациентов с продвинутыми стадиями системного AL амилоидоза
Дарья С. Дубняк, Наталья В. Рисинская, Михаил Ю. Дроков, Вера А. Васильева, Ольга С. Старикова, Ульяна В. Масликова, Екатерина Д. Михальцова, Наталья Н. Попова, Анна А. Дмитрова, Ольга М. Королева, Наталья М. Никифорова, Зоя В. Конова, Мобил И. Ахмедов, Мария В. Довыденко, Феруза А. Омарова, Эльмира И. Кольгаева, Юлия О. Давыдова, Николай М. Капранов, Лариса А. Кузьмина, Ирина В. Гальцева, Андрей Б. Судариков, Елена Н. Паровичникова
Национальный медицинский исследовательский центр гематологии МЗ России, Москва, Россия
Резюме
Острая реакция трансплантат против хозяина (оРТПХ) развивается в 30-50% случаев у больных после трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток (алло-ТГСК). Т-регуляторные клетки (Т-рег) являются ведущими участниками всех иммунных процессов, в том числе осуществляют регуляцию оРТПХ. По данным множественных исследований оРТПХ чаще возникает при полном донорском химеризме. Целью работы была оценка ассоциации смешанного химеризма в популяции Т-рег с развитием оРТПХ на фоне отмены иммуносупрессивной терапии.
Материалы и методы
В исследование включено 42 пациента после алло-ТГСК с диагнозом острый лейкоз. Подробная характеристика групп пациентов указана в таблице №1. На +90 день после алло-ТГСК у всех пациентов был произведен забор периферической крови. Далее было проведено выделение мононуклеаров с использованием градиента плотности фиколла (1,077 г/л). Посредством магнитной сепарации (CD4+CD25+ Regulatory T Cell Isolation Kit, Milteney Biotec, Германия) была выделена популяция клеток, имеющих фенотип CD4+CD25+, который преимущественно ассоциирован с Т-рег. Из полученной клеточной суспензии была произведена экстракция ДНК с использованием наборов для выделения ДНК/РНК «Ампли Прайм РИБО-преп». Химеризм в образцах ДНК определялся при помощи метода STR-PCR (полимеразная цепная реакция с панелью праймеров к локусам коротких тандемных повторов (short tandem repeat) человека. Процент донорского химеризма вычислялся с помощью стандартных формул. Статистический анализ данных проводился с использованием R 4.1. Для оценки статистической значимости различий между двумя независимыми выборками использовался U-критерий Манна-Уитни. Вероятность развития оРТПХ оценивалась с учетом конкурирующих рисков. Для сравнения различий между двумя группами использовался тест Грея. Различия признавались значимыми при p<0,05.
Результаты
Генетический химеризм определяли в клетках костного мозга и в селектированных Т-рег. Показано, что при сравнении доли клеток с хозяйским генотипом среди групп пациентов, достоверные различия получены в группе с поздней (индуцированной началом отмены ИСТ) оРТПХ (р=0,0096; р=0,0097). Нами была выполнена оценка вероятности развития острой РТПХ при различном уровне химеризма в Т-рег. У пациентов с долей хозяйских Т-рег более 17,5% вероятность развития оРТПХ составила более 66,7%. В том случае, если доля этих клеток была меньше определенного значения, вероятность острой РТПХ была значимо меньше и составила 5,6% (Тест Грея, p=0,001).
Заключение
Несмотря на то, что у пациентов на поздних сроках по данным молекулярного исследования установлен полный донорский химеризм в клетках костного мозга, в отдельных популяциях клеток, в том числе регуляторных, сохраняется примесь хозяйского кроветворения. Учитывая их генетическую принадлежность, авторы предполагают, что способность этих клеток выполнять регуляторную функцию снижена, особенно это касается описанной ранее Vigouroux и соавт. антиген-зависимой регуляции. При установленном в популяции Т-регуляторных клеток смешанном химеризме с примесью собственных клеток от 17,5% начинающаяся после +90 дня отмена иммуносупрессии на фоне «полного донорского химеризма» в костном мозге индуцирует развитие острой РТПХ.
Ключевые слова
Т-регуляторные клетки, химеризм, реакция трансплантат против хозяина, острый лейкоз.
