Антонина Е. Щекина, Геннадий М. Галстян, Ольга А. Гаврилина, Залина Т. Фидарова, Вера В. Троицкая, Вера А. Васильева, Елена Н. Паровичникова, Михаил А. Масчан
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Авторы" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["ORGANIZATION_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "26" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(22) "Организации" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28255" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(163) "<p>Национальный медицинский исследовательский центр гематологии, Москва, Россия</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(151) "Национальный медицинский исследовательский центр гематологии, Москва, Россия
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(22) "Организации" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["SUMMARY_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "27" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28256" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(5764) "<p style="text-align: justify;">Терапия T-лимфоцитами с химерным антигенным рецептором (CAR-T-терапия) является высокоэффективным методом лечения рефрактерных к химиотерапии В-клеточных лимфом и острых лимфобластных лейкозов (ОЛЛ). Однако CAR-T-терапия может сопровождаться развитием тяжелых, угрожающих жизни осложнений, среди которых наиболее серьезные – синдром выброса цитокинов (СВЦ) и c иммунными клетками ассоциированный нейротоксический синдром (ИКАНС). Цель работы – установить характер, частоту развития и методы лечения осложнений CAR-T-терапии у взрослых больных.</p> <h3>Материалы и методы</h3> <p style="text-align: justify;">В проспективный анализ включено 9 процедур CAR-T-терапии, которые были проведены у 5 больных (3 женщины, 2 мужчины) В-клеточными лимфомами и В-ОЛЛ в возрасте от 19 до 38 лет (медиана – 29 лет). 1 больному с рецидивом В-ОЛЛ выполнено 4 процедуры CAR-T-терапии, у 1 больной с рефрактерной диффузной В-крупноклеточной лимфомой – 2 процедуры. У 3 больных с экстрамедуллярными рецидивами В-ОЛЛ (у 1 больного – нейрорецидив) процедуры CAR-T-терапии выполнялась однократно. Доза и вид CAR-T-терапии определялись индивидуально. Все больные перед CAR-T-терапией получали тоцилизумаб и наблюдались в отделении реанимации и интенсивной терапии (ОРИТ). Регистрировали сроки возникновения осложнений, виды осложнений на основании принятых критериев1, эффективность проводимого лечения осложнений CAR-T-терапии.</p> <h3>Результаты</h3> <p style="text-align: justify;">СВЦ развился в 4 из 9 процедур CAR-T-терапии. Частота развития тяжелого СВЦ (≥3 степени) составила 25%. У всех больных с СВЦ была лихорадка > 39ºС. Артериальная гипотензия была в 3 из 4 случаев СВЦ. В 1 случае развился шок с полиорганной дисфункцией, для лечения которого применялась вазопрессорная терапия, экстракорпоральная сорбция цитокинов, гемодиафильтрация. Гипоксемия зарегистрирована в 2 из 4 случаев, ни в одном из них не потребовалось проведения искусственной вентиляции легких. Медиана времени развития СВЦ составила +6,5 день (4-7 дни) после трансфузии CAR-T-клеток, медиана продолжительности СВЦ – 4,5 дня (2-5 дней). Тоцилизумаб (8 мг/кг) применяли в 2 случаях СВЦ в виде однократных введений. В 8 из 9 случаев CAR-T-терапии наблюдалась гипофибриногенемия (медиана 1,2 г/л, разброс 0,8-1,9 г/л). В 6 из 9 случаев отмечена гипонатриемия (медиана 124 ммоль/л, разброс 122-132 ммоль/л). У 1 больного с нейролейкемией на +7 сутки развился ИКАНС 3 степени тяжести. Цитоз ликвора составил 77 клеток/мл, при иммунофенотировании в ликворе обнаружены CAR-T-клетки. Проводилась терапия дексаметазоном (20 мг/м<sup>2</sup>/сут.), реверсия ИКАНС наблюдалась в течение 24 ч после начала терапии дексаметазоном. В 2 из 9 случаев развился синдром лизиса опухоли, в 1 случае развился септический шок, явившийся причиной смерти больного. Общая выживаемость после CAR-T-терапии составила 89%.</p> <h3>Выводы</h3> <p style="text-align: justify;">В 55% случаев после CAR-T-терапии могут развиваться серьезные осложнения (СВЦ, ИКАНС, септический шок), требующие интенсивной дифференциальной диагностики и лечения. </p> <h2>Ключевые слова</h2> <p style="text-align: justify;">CAR-Т-терапия, синдром высвобождения цитокинов, синдром нейротоксичности.</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(5591) "Терапия T-лимфоцитами с химерным антигенным рецептором (CAR-T-терапия) является высокоэффективным методом лечения рефрактерных к химиотерапии В-клеточных лимфом и острых лимфобластных лейкозов (ОЛЛ). Однако CAR-T-терапия может сопровождаться развитием тяжелых, угрожающих жизни осложнений, среди которых наиболее серьезные – синдром выброса цитокинов (СВЦ) и c иммунными клетками ассоциированный нейротоксический синдром (ИКАНС). Цель работы – установить характер, частоту развития и методы лечения осложнений CAR-T-терапии у взрослых больных.
Материалы и методы
В проспективный анализ включено 9 процедур CAR-T-терапии, которые были проведены у 5 больных (3 женщины, 2 мужчины) В-клеточными лимфомами и В-ОЛЛ в возрасте от 19 до 38 лет (медиана – 29 лет). 1 больному с рецидивом В-ОЛЛ выполнено 4 процедуры CAR-T-терапии, у 1 больной с рефрактерной диффузной В-крупноклеточной лимфомой – 2 процедуры. У 3 больных с экстрамедуллярными рецидивами В-ОЛЛ (у 1 больного – нейрорецидив) процедуры CAR-T-терапии выполнялась однократно. Доза и вид CAR-T-терапии определялись индивидуально. Все больные перед CAR-T-терапией получали тоцилизумаб и наблюдались в отделении реанимации и интенсивной терапии (ОРИТ). Регистрировали сроки возникновения осложнений, виды осложнений на основании принятых критериев1, эффективность проводимого лечения осложнений CAR-T-терапии.
Результаты
СВЦ развился в 4 из 9 процедур CAR-T-терапии. Частота развития тяжелого СВЦ (≥3 степени) составила 25%. У всех больных с СВЦ была лихорадка > 39ºС. Артериальная гипотензия была в 3 из 4 случаев СВЦ. В 1 случае развился шок с полиорганной дисфункцией, для лечения которого применялась вазопрессорная терапия, экстракорпоральная сорбция цитокинов, гемодиафильтрация. Гипоксемия зарегистрирована в 2 из 4 случаев, ни в одном из них не потребовалось проведения искусственной вентиляции легких. Медиана времени развития СВЦ составила +6,5 день (4-7 дни) после трансфузии CAR-T-клеток, медиана продолжительности СВЦ – 4,5 дня (2-5 дней). Тоцилизумаб (8 мг/кг) применяли в 2 случаях СВЦ в виде однократных введений. В 8 из 9 случаев CAR-T-терапии наблюдалась гипофибриногенемия (медиана 1,2 г/л, разброс 0,8-1,9 г/л). В 6 из 9 случаев отмечена гипонатриемия (медиана 124 ммоль/л, разброс 122-132 ммоль/л). У 1 больного с нейролейкемией на +7 сутки развился ИКАНС 3 степени тяжести. Цитоз ликвора составил 77 клеток/мл, при иммунофенотировании в ликворе обнаружены CAR-T-клетки. Проводилась терапия дексаметазоном (20 мг/м2/сут.), реверсия ИКАНС наблюдалась в течение 24 ч после начала терапии дексаметазоном. В 2 из 9 случаев развился синдром лизиса опухоли, в 1 случае развился септический шок, явившийся причиной смерти больного. Общая выживаемость после CAR-T-терапии составила 89%.
Выводы
В 55% случаев после CAR-T-терапии могут развиваться серьезные осложнения (СВЦ, ИКАНС, септический шок), требующие интенсивной дифференциальной диагностики и лечения.
Ключевые слова
CAR-Т-терапия, синдром высвобождения цитокинов, синдром нейротоксичности.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["DOI"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "28" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2016-04-06 14:11:12" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(3) "DOI" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(3) "DOI" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28257" ["VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(3) "DOI" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["AUTHOR_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "37" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(6) "Author" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28258" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(184) "<p>Antonina E. Shchekina, Gennady M. Galstyan, Olga A. Gavrilina, Zalina T. Fidarova, Vera V. Troitskaya, Vera A. Vasilyeva, Elena N. Parovichnikova, Michael A. Maschan</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(172) "Antonina E. Shchekina, Gennady M. Galstyan, Olga A. Gavrilina, Zalina T. Fidarova, Vera V. Troitskaya, Vera A. Vasilyeva, Elena N. Parovichnikova, Michael A. Maschan
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(6) "Author" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["ORGANIZATION_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "38" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Organization" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28259" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(233) "<p>National Medical Research Center of Hematology, Moscow, Russia</p><br> <p><b>Correspondence:</b><br> Antonina E. Shchekina, phone: +7 (916) 330-96-10, e-mail: shekina_ae@mail.ru</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(185) "National Medical Research Center of Hematology, Moscow, Russia
Correspondence:
Antonina E. Shchekina, phone: +7 (916) 330-96-10, e-mail: shekina_ae@mail.ru
Chimeric antigen receptor T-lymphocytes (CAR-T) therapy is a highly effective method in treating refractory B-cell lymphomas and acute lymphoblastic leukemias (ALL). However, CAR-T therapy can be associated with the development of severe life-threatening complications. Cytokine release syndrome (CRS) and immune effector cell-associated neurotoxicity syndrome (ICANS) are the most serious toxicities. The aim of this study is to evaluate the nature, frequency and treatment methods of CAR-T therapy complications in adult patients.
Materials and methods
The prospective analysis included 9 CAR-T therapy procedures, which were performed in 5 patients (3 women, 2 men) with B-cell lymphomas and B-ALL at the age from 19 to 38 years (median – 29 years). 1 patient with relapse B-ALL underwent 4 CAR-T-therapy procedures, 1 patient with refractory diffuse large B-cell lymphoma underwent 2 procedures. In 3 patients with extramedullary relapses of B-ALL (1 patient with neuroleukemia relapse), CAR-T therapy procedures were performed once. The dose and type of CAR-T therapy were determined individually. All patients before CAR-T therapy received tocilizumab and were observed in the intensive care unit (ICU). The timing of complications, the types of complications based on the accepted criteria1 and the effectiveness of the treatment of complications of CAR-T therapy were recorded.
Results
CRS developed in 4 of 9 CAR-T therapy procedures. The incidence of severe CRS (grade ≥3) was 25%. All patients with CRS had a fever >39°C. Hypotension was presented in 3 of 4 cases of CRS. Shock with multiple organ dysfunction developed in 1 case, in which vasopressor agents, extracorporeal cytokine adsorption and hemodiafiltration were used. Hypoxemia was registered in 2 of 4 cases, none of patients required mechanical ventilation. The median time to the onset of CRS was +6.5 days (range 4-7) after the transfusion of CAR-T cells, the median duration of CRS was 4.5 days (range 2-5 days). Tocilizumab (8 mg/kg) was used in 2 cases of CRS as single injections. Hypofibrinogenemia was observed in 8 of 9 cases of CAR-T therapy (median 1.2 g/l, range 0.8-1.9 g/l). In 6 of 9 cases, hyponatremia was noted (median 124 mmol/l, range 122-132 mmol/l). 1 patient with neuroleukemia developed ICANS grade 3 on +7 day. Cerebrospinal fluid (CSF) cytosis was 77 cells/ml (CAR-T cells were detected in the CSF by immunophenotyping). ICANS was resolved within 24 hours after the initiation of dexamethasone in dose 20 mg/m2/day. Tumor lysis syndrome developed in 2 of 9 cases, septic shock developed in 1 case and caused the patient’s death. The overall survival rate after CAR-T therapy was 89%.
Conclusions
The incidence of serious CAR-T therapy complications (CRS, ICANS, septic) requiring intensive differential diagnosis and treatment can reach 55%.
Reference
Lee DW, Santomasso BD, Locke FL, et al. ASTCT Consensus Grading for Cytokine Release Syndrome and Neurologic Toxicity Associated with Immune Effector Cells. Biol Blood and Marrow Transplant. 2019; 25 (4): 625-38. doi: 10.1016/j.bbmt.2018.12.758
Keywords
CAR-T therapy, cytokine release syndrome, neurotoxicity syndrome.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["NAME_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "40" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:49:47" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(4) "Name" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "NAME_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28261" ["VALUE"]=> string(77) "GC-11. Complications after chimeric antigen receptor T-cell therapy in adults" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(77) "GC-11. Complications after chimeric antigen receptor T-cell therapy in adults" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(4) "Name" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["FULL_TEXT_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "42" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-07 20:29:18" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(23) "Полный текст" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(12) "FULL_TEXT_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(23) "Полный текст" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["PDF_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "43" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-09 16:05:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(7) "PDF RUS" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(6) "PDF_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "F" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(18) "doc, txt, rtf, pdf" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28262" ["VALUE"]=> string(4) "2647" ["DESCRIPTION"]=> NULL ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(4) "2647" ["~DESCRIPTION"]=> NULL ["~NAME"]=> string(7) "PDF RUS" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["PDF_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "44" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-09 16:05:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(7) "PDF ENG" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(6) "PDF_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "F" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(18) "doc, txt, rtf, pdf" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28263" ["VALUE"]=> string(4) "2648" ["DESCRIPTION"]=> NULL ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(4) "2648" ["~DESCRIPTION"]=> NULL ["~NAME"]=> string(7) "PDF ENG" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["NAME_LONG"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "45" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2023-04-13 00:55:00" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(72) "Название (для очень длинных заголовков)" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "NAME_LONG" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TYPE"]=> string(4) "HTML" ["TEXT"]=> string(0) "" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(80) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(72) "Название (для очень длинных заголовков)" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TYPE"]=> string(4) "HTML" ["TEXT"]=> string(0) "" } } } ["DISPLAY_PROPERTIES"]=> array(8) { ["AUTHOR_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "37" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(6) "Author" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28258" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(184) "<p>Antonina E. Shchekina, Gennady M. Galstyan, Olga A. Gavrilina, Zalina T. Fidarova, Vera V. Troitskaya, Vera A. Vasilyeva, Elena N. Parovichnikova, Michael A. Maschan</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(172) "Antonina E. Shchekina, Gennady M. Galstyan, Olga A. Gavrilina, Zalina T. Fidarova, Vera V. Troitskaya, Vera A. Vasilyeva, Elena N. Parovichnikova, Michael A. Maschan
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(6) "Author" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(172) "Antonina E. Shchekina, Gennady M. Galstyan, Olga A. Gavrilina, Zalina T. Fidarova, Vera V. Troitskaya, Vera A. Vasilyeva, Elena N. Parovichnikova, Michael A. Maschan
" } ["SUMMARY_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "39" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28260" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(3824) "<p style="text-align: justify;"> Chimeric antigen receptor T-lymphocytes (CAR-T) therapy is a highly effective method in treating refractory B-cell lymphomas and acute lymphoblastic leukemias (ALL). However, CAR-T therapy can be associated with the development of severe life-threatening complications. Cytokine release syndrome (CRS) and immune effector cell-associated neurotoxicity syndrome (ICANS) are the most serious toxicities. The aim of this study is to evaluate the nature, frequency and treatment methods of CAR-T therapy complications in adult patients. </p> <h3>Materials and methods</h3> <p style="text-align: justify;"> The prospective analysis included 9 CAR-T therapy procedures, which were performed in 5 patients (3 women, 2 men) with B-cell lymphomas and B-ALL at the age from 19 to 38 years (median – 29 years). 1 patient with relapse B-ALL underwent 4 CAR-T-therapy procedures, 1 patient with refractory diffuse large B-cell lymphoma underwent 2 procedures. In 3 patients with extramedullary relapses of B-ALL (1 patient with neuroleukemia relapse), CAR-T therapy procedures were performed once. The dose and type of CAR-T therapy were determined individually. All patients before CAR-T therapy received tocilizumab and were observed in the intensive care unit (ICU). The timing of complications, the types of complications based on the accepted criteria1 and the effectiveness of the treatment of complications of CAR-T therapy were recorded. </p> <h3>Results</h3> <p style="text-align: justify;"> CRS developed in 4 of 9 CAR-T therapy procedures. The incidence of severe CRS (grade ≥3) was 25%. All patients with CRS had a fever >39°C. Hypotension was presented in 3 of 4 cases of CRS. Shock with multiple organ dysfunction developed in 1 case, in which vasopressor agents, extracorporeal cytokine adsorption and hemodiafiltration were used. Hypoxemia was registered in 2 of 4 cases, none of patients required mechanical ventilation. The median time to the onset of CRS was +6.5 days (range 4-7) after the transfusion of CAR-T cells, the median duration of CRS was 4.5 days (range 2-5 days). Tocilizumab (8 mg/kg) was used in 2 cases of CRS as single injections. Hypofibrinogenemia was observed in 8 of 9 cases of CAR-T therapy (median 1.2 g/l, range 0.8-1.9 g/l). In 6 of 9 cases, hyponatremia was noted (median 124 mmol/l, range 122-132 mmol/l). 1 patient with neuroleukemia developed ICANS grade 3 on +7 day. Cerebrospinal fluid (CSF) cytosis was 77 cells/ml (CAR-T cells were detected in the CSF by immunophenotyping). ICANS was resolved within 24 hours after the initiation of dexamethasone in dose 20 mg/m<sup>2</sup>/day. Tumor lysis syndrome developed in 2 of 9 cases, septic shock developed in 1 case and caused the patient’s death. The overall survival rate after CAR-T therapy was 89%. </p> <h3>Conclusions</h3> <p style="text-align: justify;"> The incidence of serious CAR-T therapy complications (CRS, ICANS, septic) requiring intensive differential diagnosis and treatment can reach 55%. </p> <h3>Reference</h3> <p style="text-align: justify;"> Lee DW, Santomasso BD, Locke FL, et al. ASTCT Consensus Grading for Cytokine Release Syndrome and Neurologic Toxicity Associated with Immune Effector Cells. Biol Blood and Marrow Transplant. 2019; 25 (4): 625-38. doi: <a target="_blank" href="https://doi.org/10.1016/j.bbmt.2018.12.758"><u>10.1016/j.bbmt.2018.12.758</u></a> </p> <h2>Keywords</h2> <p style="text-align: justify;"> CAR-T therapy, cytokine release syndrome, neurotoxicity syndrome. </p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(3572) "Chimeric antigen receptor T-lymphocytes (CAR-T) therapy is a highly effective method in treating refractory B-cell lymphomas and acute lymphoblastic leukemias (ALL). However, CAR-T therapy can be associated with the development of severe life-threatening complications. Cytokine release syndrome (CRS) and immune effector cell-associated neurotoxicity syndrome (ICANS) are the most serious toxicities. The aim of this study is to evaluate the nature, frequency and treatment methods of CAR-T therapy complications in adult patients.
Materials and methods
The prospective analysis included 9 CAR-T therapy procedures, which were performed in 5 patients (3 women, 2 men) with B-cell lymphomas and B-ALL at the age from 19 to 38 years (median – 29 years). 1 patient with relapse B-ALL underwent 4 CAR-T-therapy procedures, 1 patient with refractory diffuse large B-cell lymphoma underwent 2 procedures. In 3 patients with extramedullary relapses of B-ALL (1 patient with neuroleukemia relapse), CAR-T therapy procedures were performed once. The dose and type of CAR-T therapy were determined individually. All patients before CAR-T therapy received tocilizumab and were observed in the intensive care unit (ICU). The timing of complications, the types of complications based on the accepted criteria1 and the effectiveness of the treatment of complications of CAR-T therapy were recorded.
Results
CRS developed in 4 of 9 CAR-T therapy procedures. The incidence of severe CRS (grade ≥3) was 25%. All patients with CRS had a fever >39°C. Hypotension was presented in 3 of 4 cases of CRS. Shock with multiple organ dysfunction developed in 1 case, in which vasopressor agents, extracorporeal cytokine adsorption and hemodiafiltration were used. Hypoxemia was registered in 2 of 4 cases, none of patients required mechanical ventilation. The median time to the onset of CRS was +6.5 days (range 4-7) after the transfusion of CAR-T cells, the median duration of CRS was 4.5 days (range 2-5 days). Tocilizumab (8 mg/kg) was used in 2 cases of CRS as single injections. Hypofibrinogenemia was observed in 8 of 9 cases of CAR-T therapy (median 1.2 g/l, range 0.8-1.9 g/l). In 6 of 9 cases, hyponatremia was noted (median 124 mmol/l, range 122-132 mmol/l). 1 patient with neuroleukemia developed ICANS grade 3 on +7 day. Cerebrospinal fluid (CSF) cytosis was 77 cells/ml (CAR-T cells were detected in the CSF by immunophenotyping). ICANS was resolved within 24 hours after the initiation of dexamethasone in dose 20 mg/m2/day. Tumor lysis syndrome developed in 2 of 9 cases, septic shock developed in 1 case and caused the patient’s death. The overall survival rate after CAR-T therapy was 89%.
Conclusions
The incidence of serious CAR-T therapy complications (CRS, ICANS, septic) requiring intensive differential diagnosis and treatment can reach 55%.
Reference
Lee DW, Santomasso BD, Locke FL, et al. ASTCT Consensus Grading for Cytokine Release Syndrome and Neurologic Toxicity Associated with Immune Effector Cells. Biol Blood and Marrow Transplant. 2019; 25 (4): 625-38. doi: 10.1016/j.bbmt.2018.12.758
Keywords
CAR-T therapy, cytokine release syndrome, neurotoxicity syndrome.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(3572) "Chimeric antigen receptor T-lymphocytes (CAR-T) therapy is a highly effective method in treating refractory B-cell lymphomas and acute lymphoblastic leukemias (ALL). However, CAR-T therapy can be associated with the development of severe life-threatening complications. Cytokine release syndrome (CRS) and immune effector cell-associated neurotoxicity syndrome (ICANS) are the most serious toxicities. The aim of this study is to evaluate the nature, frequency and treatment methods of CAR-T therapy complications in adult patients.
Materials and methods
The prospective analysis included 9 CAR-T therapy procedures, which were performed in 5 patients (3 women, 2 men) with B-cell lymphomas and B-ALL at the age from 19 to 38 years (median – 29 years). 1 patient with relapse B-ALL underwent 4 CAR-T-therapy procedures, 1 patient with refractory diffuse large B-cell lymphoma underwent 2 procedures. In 3 patients with extramedullary relapses of B-ALL (1 patient with neuroleukemia relapse), CAR-T therapy procedures were performed once. The dose and type of CAR-T therapy were determined individually. All patients before CAR-T therapy received tocilizumab and were observed in the intensive care unit (ICU). The timing of complications, the types of complications based on the accepted criteria1 and the effectiveness of the treatment of complications of CAR-T therapy were recorded.
Results
CRS developed in 4 of 9 CAR-T therapy procedures. The incidence of severe CRS (grade ≥3) was 25%. All patients with CRS had a fever >39°C. Hypotension was presented in 3 of 4 cases of CRS. Shock with multiple organ dysfunction developed in 1 case, in which vasopressor agents, extracorporeal cytokine adsorption and hemodiafiltration were used. Hypoxemia was registered in 2 of 4 cases, none of patients required mechanical ventilation. The median time to the onset of CRS was +6.5 days (range 4-7) after the transfusion of CAR-T cells, the median duration of CRS was 4.5 days (range 2-5 days). Tocilizumab (8 mg/kg) was used in 2 cases of CRS as single injections. Hypofibrinogenemia was observed in 8 of 9 cases of CAR-T therapy (median 1.2 g/l, range 0.8-1.9 g/l). In 6 of 9 cases, hyponatremia was noted (median 124 mmol/l, range 122-132 mmol/l). 1 patient with neuroleukemia developed ICANS grade 3 on +7 day. Cerebrospinal fluid (CSF) cytosis was 77 cells/ml (CAR-T cells were detected in the CSF by immunophenotyping). ICANS was resolved within 24 hours after the initiation of dexamethasone in dose 20 mg/m2/day. Tumor lysis syndrome developed in 2 of 9 cases, septic shock developed in 1 case and caused the patient’s death. The overall survival rate after CAR-T therapy was 89%.
Conclusions
The incidence of serious CAR-T therapy complications (CRS, ICANS, septic) requiring intensive differential diagnosis and treatment can reach 55%.
Reference
Lee DW, Santomasso BD, Locke FL, et al. ASTCT Consensus Grading for Cytokine Release Syndrome and Neurologic Toxicity Associated with Immune Effector Cells. Biol Blood and Marrow Transplant. 2019; 25 (4): 625-38. doi: 10.1016/j.bbmt.2018.12.758
Keywords
CAR-T therapy, cytokine release syndrome, neurotoxicity syndrome.
" } ["DOI"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "28" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2016-04-06 14:11:12" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(3) "DOI" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(3) "DOI" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28257" ["VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(3) "DOI" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["DISPLAY_VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" } ["NAME_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "40" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:49:47" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(4) "Name" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "NAME_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28261" ["VALUE"]=> string(77) "GC-11. Complications after chimeric antigen receptor T-cell therapy in adults" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(77) "GC-11. Complications after chimeric antigen receptor T-cell therapy in adults" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(4) "Name" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["DISPLAY_VALUE"]=> string(77) "GC-11. Complications after chimeric antigen receptor T-cell therapy in adults" } ["ORGANIZATION_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "38" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Organization" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28259" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(233) "<p>National Medical Research Center of Hematology, Moscow, Russia</p><br> <p><b>Correspondence:</b><br> Antonina E. Shchekina, phone: +7 (916) 330-96-10, e-mail: shekina_ae@mail.ru</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(185) "National Medical Research Center of Hematology, Moscow, Russia
Correspondence:
Antonina E. Shchekina, phone: +7 (916) 330-96-10, e-mail: shekina_ae@mail.ru
National Medical Research Center of Hematology, Moscow, Russia
Correspondence:
Antonina E. Shchekina, phone: +7 (916) 330-96-10, e-mail: shekina_ae@mail.ru
Антонина Е. Щекина, Геннадий М. Галстян, Ольга А. Гаврилина, Залина Т. Фидарова, Вера В. Троицкая, Вера А. Васильева, Елена Н. Паровичникова, Михаил А. Масчан
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Авторы" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(286) "Антонина Е. Щекина, Геннадий М. Галстян, Ольга А. Гаврилина, Залина Т. Фидарова, Вера В. Троицкая, Вера А. Васильева, Елена Н. Паровичникова, Михаил А. Масчан
" } ["SUMMARY_RU"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "27" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28256" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(5764) "<p style="text-align: justify;">Терапия T-лимфоцитами с химерным антигенным рецептором (CAR-T-терапия) является высокоэффективным методом лечения рефрактерных к химиотерапии В-клеточных лимфом и острых лимфобластных лейкозов (ОЛЛ). Однако CAR-T-терапия может сопровождаться развитием тяжелых, угрожающих жизни осложнений, среди которых наиболее серьезные – синдром выброса цитокинов (СВЦ) и c иммунными клетками ассоциированный нейротоксический синдром (ИКАНС). Цель работы – установить характер, частоту развития и методы лечения осложнений CAR-T-терапии у взрослых больных.</p> <h3>Материалы и методы</h3> <p style="text-align: justify;">В проспективный анализ включено 9 процедур CAR-T-терапии, которые были проведены у 5 больных (3 женщины, 2 мужчины) В-клеточными лимфомами и В-ОЛЛ в возрасте от 19 до 38 лет (медиана – 29 лет). 1 больному с рецидивом В-ОЛЛ выполнено 4 процедуры CAR-T-терапии, у 1 больной с рефрактерной диффузной В-крупноклеточной лимфомой – 2 процедуры. У 3 больных с экстрамедуллярными рецидивами В-ОЛЛ (у 1 больного – нейрорецидив) процедуры CAR-T-терапии выполнялась однократно. Доза и вид CAR-T-терапии определялись индивидуально. Все больные перед CAR-T-терапией получали тоцилизумаб и наблюдались в отделении реанимации и интенсивной терапии (ОРИТ). Регистрировали сроки возникновения осложнений, виды осложнений на основании принятых критериев1, эффективность проводимого лечения осложнений CAR-T-терапии.</p> <h3>Результаты</h3> <p style="text-align: justify;">СВЦ развился в 4 из 9 процедур CAR-T-терапии. Частота развития тяжелого СВЦ (≥3 степени) составила 25%. У всех больных с СВЦ была лихорадка > 39ºС. Артериальная гипотензия была в 3 из 4 случаев СВЦ. В 1 случае развился шок с полиорганной дисфункцией, для лечения которого применялась вазопрессорная терапия, экстракорпоральная сорбция цитокинов, гемодиафильтрация. Гипоксемия зарегистрирована в 2 из 4 случаев, ни в одном из них не потребовалось проведения искусственной вентиляции легких. Медиана времени развития СВЦ составила +6,5 день (4-7 дни) после трансфузии CAR-T-клеток, медиана продолжительности СВЦ – 4,5 дня (2-5 дней). Тоцилизумаб (8 мг/кг) применяли в 2 случаях СВЦ в виде однократных введений. В 8 из 9 случаев CAR-T-терапии наблюдалась гипофибриногенемия (медиана 1,2 г/л, разброс 0,8-1,9 г/л). В 6 из 9 случаев отмечена гипонатриемия (медиана 124 ммоль/л, разброс 122-132 ммоль/л). У 1 больного с нейролейкемией на +7 сутки развился ИКАНС 3 степени тяжести. Цитоз ликвора составил 77 клеток/мл, при иммунофенотировании в ликворе обнаружены CAR-T-клетки. Проводилась терапия дексаметазоном (20 мг/м<sup>2</sup>/сут.), реверсия ИКАНС наблюдалась в течение 24 ч после начала терапии дексаметазоном. В 2 из 9 случаев развился синдром лизиса опухоли, в 1 случае развился септический шок, явившийся причиной смерти больного. Общая выживаемость после CAR-T-терапии составила 89%.</p> <h3>Выводы</h3> <p style="text-align: justify;">В 55% случаев после CAR-T-терапии могут развиваться серьезные осложнения (СВЦ, ИКАНС, септический шок), требующие интенсивной дифференциальной диагностики и лечения. </p> <h2>Ключевые слова</h2> <p style="text-align: justify;">CAR-Т-терапия, синдром высвобождения цитокинов, синдром нейротоксичности.</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(5591) "Терапия T-лимфоцитами с химерным антигенным рецептором (CAR-T-терапия) является высокоэффективным методом лечения рефрактерных к химиотерапии В-клеточных лимфом и острых лимфобластных лейкозов (ОЛЛ). Однако CAR-T-терапия может сопровождаться развитием тяжелых, угрожающих жизни осложнений, среди которых наиболее серьезные – синдром выброса цитокинов (СВЦ) и c иммунными клетками ассоциированный нейротоксический синдром (ИКАНС). Цель работы – установить характер, частоту развития и методы лечения осложнений CAR-T-терапии у взрослых больных.
Материалы и методы
В проспективный анализ включено 9 процедур CAR-T-терапии, которые были проведены у 5 больных (3 женщины, 2 мужчины) В-клеточными лимфомами и В-ОЛЛ в возрасте от 19 до 38 лет (медиана – 29 лет). 1 больному с рецидивом В-ОЛЛ выполнено 4 процедуры CAR-T-терапии, у 1 больной с рефрактерной диффузной В-крупноклеточной лимфомой – 2 процедуры. У 3 больных с экстрамедуллярными рецидивами В-ОЛЛ (у 1 больного – нейрорецидив) процедуры CAR-T-терапии выполнялась однократно. Доза и вид CAR-T-терапии определялись индивидуально. Все больные перед CAR-T-терапией получали тоцилизумаб и наблюдались в отделении реанимации и интенсивной терапии (ОРИТ). Регистрировали сроки возникновения осложнений, виды осложнений на основании принятых критериев1, эффективность проводимого лечения осложнений CAR-T-терапии.
Результаты
СВЦ развился в 4 из 9 процедур CAR-T-терапии. Частота развития тяжелого СВЦ (≥3 степени) составила 25%. У всех больных с СВЦ была лихорадка > 39ºС. Артериальная гипотензия была в 3 из 4 случаев СВЦ. В 1 случае развился шок с полиорганной дисфункцией, для лечения которого применялась вазопрессорная терапия, экстракорпоральная сорбция цитокинов, гемодиафильтрация. Гипоксемия зарегистрирована в 2 из 4 случаев, ни в одном из них не потребовалось проведения искусственной вентиляции легких. Медиана времени развития СВЦ составила +6,5 день (4-7 дни) после трансфузии CAR-T-клеток, медиана продолжительности СВЦ – 4,5 дня (2-5 дней). Тоцилизумаб (8 мг/кг) применяли в 2 случаях СВЦ в виде однократных введений. В 8 из 9 случаев CAR-T-терапии наблюдалась гипофибриногенемия (медиана 1,2 г/л, разброс 0,8-1,9 г/л). В 6 из 9 случаев отмечена гипонатриемия (медиана 124 ммоль/л, разброс 122-132 ммоль/л). У 1 больного с нейролейкемией на +7 сутки развился ИКАНС 3 степени тяжести. Цитоз ликвора составил 77 клеток/мл, при иммунофенотировании в ликворе обнаружены CAR-T-клетки. Проводилась терапия дексаметазоном (20 мг/м2/сут.), реверсия ИКАНС наблюдалась в течение 24 ч после начала терапии дексаметазоном. В 2 из 9 случаев развился синдром лизиса опухоли, в 1 случае развился септический шок, явившийся причиной смерти больного. Общая выживаемость после CAR-T-терапии составила 89%.
Выводы
В 55% случаев после CAR-T-терапии могут развиваться серьезные осложнения (СВЦ, ИКАНС, септический шок), требующие интенсивной дифференциальной диагностики и лечения.
Ключевые слова
CAR-Т-терапия, синдром высвобождения цитокинов, синдром нейротоксичности.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(5591) "Терапия T-лимфоцитами с химерным антигенным рецептором (CAR-T-терапия) является высокоэффективным методом лечения рефрактерных к химиотерапии В-клеточных лимфом и острых лимфобластных лейкозов (ОЛЛ). Однако CAR-T-терапия может сопровождаться развитием тяжелых, угрожающих жизни осложнений, среди которых наиболее серьезные – синдром выброса цитокинов (СВЦ) и c иммунными клетками ассоциированный нейротоксический синдром (ИКАНС). Цель работы – установить характер, частоту развития и методы лечения осложнений CAR-T-терапии у взрослых больных.
Материалы и методы
В проспективный анализ включено 9 процедур CAR-T-терапии, которые были проведены у 5 больных (3 женщины, 2 мужчины) В-клеточными лимфомами и В-ОЛЛ в возрасте от 19 до 38 лет (медиана – 29 лет). 1 больному с рецидивом В-ОЛЛ выполнено 4 процедуры CAR-T-терапии, у 1 больной с рефрактерной диффузной В-крупноклеточной лимфомой – 2 процедуры. У 3 больных с экстрамедуллярными рецидивами В-ОЛЛ (у 1 больного – нейрорецидив) процедуры CAR-T-терапии выполнялась однократно. Доза и вид CAR-T-терапии определялись индивидуально. Все больные перед CAR-T-терапией получали тоцилизумаб и наблюдались в отделении реанимации и интенсивной терапии (ОРИТ). Регистрировали сроки возникновения осложнений, виды осложнений на основании принятых критериев1, эффективность проводимого лечения осложнений CAR-T-терапии.
Результаты
СВЦ развился в 4 из 9 процедур CAR-T-терапии. Частота развития тяжелого СВЦ (≥3 степени) составила 25%. У всех больных с СВЦ была лихорадка > 39ºС. Артериальная гипотензия была в 3 из 4 случаев СВЦ. В 1 случае развился шок с полиорганной дисфункцией, для лечения которого применялась вазопрессорная терапия, экстракорпоральная сорбция цитокинов, гемодиафильтрация. Гипоксемия зарегистрирована в 2 из 4 случаев, ни в одном из них не потребовалось проведения искусственной вентиляции легких. Медиана времени развития СВЦ составила +6,5 день (4-7 дни) после трансфузии CAR-T-клеток, медиана продолжительности СВЦ – 4,5 дня (2-5 дней). Тоцилизумаб (8 мг/кг) применяли в 2 случаях СВЦ в виде однократных введений. В 8 из 9 случаев CAR-T-терапии наблюдалась гипофибриногенемия (медиана 1,2 г/л, разброс 0,8-1,9 г/л). В 6 из 9 случаев отмечена гипонатриемия (медиана 124 ммоль/л, разброс 122-132 ммоль/л). У 1 больного с нейролейкемией на +7 сутки развился ИКАНС 3 степени тяжести. Цитоз ликвора составил 77 клеток/мл, при иммунофенотировании в ликворе обнаружены CAR-T-клетки. Проводилась терапия дексаметазоном (20 мг/м2/сут.), реверсия ИКАНС наблюдалась в течение 24 ч после начала терапии дексаметазоном. В 2 из 9 случаев развился синдром лизиса опухоли, в 1 случае развился септический шок, явившийся причиной смерти больного. Общая выживаемость после CAR-T-терапии составила 89%.
Выводы
В 55% случаев после CAR-T-терапии могут развиваться серьезные осложнения (СВЦ, ИКАНС, септический шок), требующие интенсивной дифференциальной диагностики и лечения.
Ключевые слова
CAR-Т-терапия, синдром высвобождения цитокинов, синдром нейротоксичности.
" } ["ORGANIZATION_RU"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "26" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(22) "Организации" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28255" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(163) "<p>Национальный медицинский исследовательский центр гематологии, Москва, Россия</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(151) "Национальный медицинский исследовательский центр гематологии, Москва, Россия
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(22) "Организации" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(151) "Национальный медицинский исследовательский центр гематологии, Москва, Россия
" } } } [1]=> array(49) { ["IBLOCK_SECTION_ID"]=> string(3) "196" ["~IBLOCK_SECTION_ID"]=> string(3) "196" ["ID"]=> string(4) "2024" ["~ID"]=> string(4) "2024" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["~IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(222) "GC-10. Биоинформатический анализ онкогена RAD54L для выявления влияния на возникновение гемопоэтических стволовых нарушений" ["~NAME"]=> string(222) "GC-10. Биоинформатический анализ онкогена RAD54L для выявления влияния на возникновение гемопоэтических стволовых нарушений" ["ACTIVE_FROM"]=> NULL ["~ACTIVE_FROM"]=> NULL ["TIMESTAMP_X"]=> string(22) "12/21/2021 12:01:51 pm" ["~TIMESTAMP_X"]=> string(22) "12/21/2021 12:01:51 pm" ["DETAIL_PAGE_URL"]=> string(237) "/en/archive/tom-10-nomer-3/tezisy-dokladov-xv-simpoziuma-pamyati-r-m-gorbachevoy-po-razdelam/gennaya-i-kletochnaya-terapiya-gc-01-gc-15/gc-10-bioinformaticheskiy-analiz-onkogena-rad54l-dlya-vyyavleniya-vliyaniya-na-vozniknovenie-gemopoe/" ["~DETAIL_PAGE_URL"]=> string(237) "/en/archive/tom-10-nomer-3/tezisy-dokladov-xv-simpoziuma-pamyati-r-m-gorbachevoy-po-razdelam/gennaya-i-kletochnaya-terapiya-gc-01-gc-15/gc-10-bioinformaticheskiy-analiz-onkogena-rad54l-dlya-vyyavleniya-vliyaniya-na-vozniknovenie-gemopoe/" ["LIST_PAGE_URL"]=> string(12) "/en/archive/" ["~LIST_PAGE_URL"]=> string(12) "/en/archive/" ["DETAIL_TEXT"]=> string(0) "" ["~DETAIL_TEXT"]=> string(0) "" ["DETAIL_TEXT_TYPE"]=> string(4) "text" ["~DETAIL_TEXT_TYPE"]=> string(4) "text" ["PREVIEW_TEXT"]=> string(0) "" ["~PREVIEW_TEXT"]=> string(0) "" ["PREVIEW_TEXT_TYPE"]=> string(4) "text" ["~PREVIEW_TEXT_TYPE"]=> string(4) "text" ["PREVIEW_PICTURE"]=> NULL ["~PREVIEW_PICTURE"]=> NULL ["LANG_DIR"]=> string(4) "/ru/" ["~LANG_DIR"]=> string(4) "/ru/" ["SORT"]=> string(3) "100" ["~SORT"]=> string(3) "100" ["CODE"]=> string(100) "gc-10-bioinformaticheskiy-analiz-onkogena-rad54l-dlya-vyyavleniya-vliyaniya-na-vozniknovenie-gemopoe" ["~CODE"]=> string(100) "gc-10-bioinformaticheskiy-analiz-onkogena-rad54l-dlya-vyyavleniya-vliyaniya-na-vozniknovenie-gemopoe" ["EXTERNAL_ID"]=> string(4) "2024" ["~EXTERNAL_ID"]=> string(4) "2024" ["IBLOCK_TYPE_ID"]=> string(7) "journal" ["~IBLOCK_TYPE_ID"]=> string(7) "journal" ["IBLOCK_CODE"]=> string(7) "volumes" ["~IBLOCK_CODE"]=> string(7) "volumes" ["IBLOCK_EXTERNAL_ID"]=> NULL ["~IBLOCK_EXTERNAL_ID"]=> NULL ["LID"]=> string(2) "s2" ["~LID"]=> string(2) "s2" ["EDIT_LINK"]=> NULL ["DELETE_LINK"]=> NULL ["DISPLAY_ACTIVE_FROM"]=> string(0) "" ["IPROPERTY_VALUES"]=> array(18) { ["ELEMENT_META_TITLE"]=> string(222) "GC-10. Биоинформатический анализ онкогена RAD54L для выявления влияния на возникновение гемопоэтических стволовых нарушений" ["ELEMENT_META_KEYWORDS"]=> string(0) "" ["ELEMENT_META_DESCRIPTION"]=> string(350) "GC-10. Биоинформатический анализ онкогена RAD54L для выявления влияния на возникновение гемопоэтических стволовых нарушенийGC-10. Bioinformatic analysis of the RAD54L oncogene for detecting the effect on the occurrence of hematopoietic stem disorders " ["ELEMENT_PREVIEW_PICTURE_FILE_ALT"]=> string(5101) "<p style="text-align: justify;">В ряде исследований была продемонстрирована АТФ-зависимая активность гемопоэтических стволовых клеток из иммуноочищенного меченого маркера элюата RecQL1 на примере человеческого гена RAD54L. Также в браузере генома UCSC представлено множество публикаций, связанных с мутантной активностью гена, что указывает на биомедицинский потенциал изучения этого гена.</p> <h3>Материалы и методы</h3> <p style="text-align: justify;">Данные были собраны и сохранены в геномном браузере UCSC. Для рассматриваемого гена большинство совпадений с мРНК человека были обнаружены в базах данных NCBI RefSeq, UCSC и GENCODE. Соотношение большинства интронов и экзон (только исходные имеют разную длину), их длина соответствует мРНК человека и аннотации экспрессированному тэгу последовательности (EST) человека. При рассмотрении гена RAD54L с различными аннотациями в RefSeq невозможно дать точную оценку сравнения с экспериментальными и прогнозируемыми РНК с концом PolyA (таких РНК нет). Согласно гену RAD54L, при секвенировании в клеточной культуре K562 PolyA+ преобладает множество псевдогенов. Большая часть транскрипта находится в цитозоле и нуклеосоме. Уровень экспрессии для CAGE в большей степени наблюдается в нуклеосоме и цитозоле. </p> <h3>Результаты</h3> <p style="text-align: justify;">Результаты показали, что этот ген в аннотациях был достаточно точно рассчитан и интерпретирован. Для гена RAD54L наблюдается большое количество пептидов, высокий уровень рибосомных сигналов профилирования, которые совпадают со структурой экзона гена, поэтому он является геном, кодирующим белок. По данным базы данных COSMIC, были выявлены множественные мутации, которые соответствуют всем экзонам гена при заболеваниях гемопоэза, эндометрия и опухолей легких. Аденокарцинома, толстая кишка, соматика, лимфома, неходжкинский рак, рак молочной железы, патологии стволовых клеток были обнаружены в базе данных OMIM.</p> <h3>Заключение</h3> <p style="text-align: justify;">Исходя из полученных результатов, можно утверждать, что данный ген RAD54L кодирует белок, который является важным звеном во многих физиологических, функциональных и патологических процессах в организме человека. Мутационная активность этого гена с высокой вероятностью приводит к развитию патологий различного генеза: анализ показал влияние на онкогенный процесс, развитие соматических заболеваний. Он играет большую роль в развитии наследственных заболеваний. Более того, имеется достаточное количество публикаций по исследованиям рассматриваемого гена, что указывает на возможные перспективные исследования биомедицины в части профилактики и лечения соматических и онкогенных заболеваний человека. </p> <h2>Ключевые слова</h2> <p style="text-align: justify;">Биоинформатический анализ, гемопоэтические стволовые клетки, ген RAD54L.</p>" ["ELEMENT_PREVIEW_PICTURE_FILE_TITLE"]=> string(222) "GC-10. Биоинформатический анализ онкогена RAD54L для выявления влияния на возникновение гемопоэтических стволовых нарушений" ["ELEMENT_DETAIL_PICTURE_FILE_ALT"]=> string(222) "GC-10. Биоинформатический анализ онкогена RAD54L для выявления влияния на возникновение гемопоэтических стволовых нарушений" ["ELEMENT_DETAIL_PICTURE_FILE_TITLE"]=> string(222) "GC-10. Биоинформатический анализ онкогена RAD54L для выявления влияния на возникновение гемопоэтических стволовых нарушений" ["SECTION_META_TITLE"]=> string(222) "GC-10. Биоинформатический анализ онкогена RAD54L для выявления влияния на возникновение гемопоэтических стволовых нарушений" ["SECTION_META_KEYWORDS"]=> string(222) "GC-10. Биоинформатический анализ онкогена RAD54L для выявления влияния на возникновение гемопоэтических стволовых нарушений" ["SECTION_META_DESCRIPTION"]=> string(222) "GC-10. Биоинформатический анализ онкогена RAD54L для выявления влияния на возникновение гемопоэтических стволовых нарушений" ["SECTION_PICTURE_FILE_ALT"]=> string(222) "GC-10. Биоинформатический анализ онкогена RAD54L для выявления влияния на возникновение гемопоэтических стволовых нарушений" ["SECTION_PICTURE_FILE_TITLE"]=> string(222) "GC-10. Биоинформатический анализ онкогена RAD54L для выявления влияния на возникновение гемопоэтических стволовых нарушений" ["SECTION_PICTURE_FILE_NAME"]=> string(100) "gc-10-bioinformaticheskiy-analiz-onkogena-rad54l-dlya-vyyavleniya-vliyaniya-na-vozniknovenie-gemopoe" ["SECTION_DETAIL_PICTURE_FILE_ALT"]=> string(222) "GC-10. Биоинформатический анализ онкогена RAD54L для выявления влияния на возникновение гемопоэтических стволовых нарушений" ["SECTION_DETAIL_PICTURE_FILE_TITLE"]=> string(222) "GC-10. Биоинформатический анализ онкогена RAD54L для выявления влияния на возникновение гемопоэтических стволовых нарушений" ["SECTION_DETAIL_PICTURE_FILE_NAME"]=> string(100) "gc-10-bioinformaticheskiy-analiz-onkogena-rad54l-dlya-vyyavleniya-vliyaniya-na-vozniknovenie-gemopoe" ["ELEMENT_PREVIEW_PICTURE_FILE_NAME"]=> string(100) "gc-10-bioinformaticheskiy-analiz-onkogena-rad54l-dlya-vyyavleniya-vliyaniya-na-vozniknovenie-gemopoe" ["ELEMENT_DETAIL_PICTURE_FILE_NAME"]=> string(100) "gc-10-bioinformaticheskiy-analiz-onkogena-rad54l-dlya-vyyavleniya-vliyaniya-na-vozniknovenie-gemopoe" } ["FIELDS"]=> array(1) { ["IBLOCK_SECTION_ID"]=> string(3) "196" } ["PROPERTIES"]=> array(18) { ["KEYWORDS"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "19" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:46:01" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(27) "Ключевые слова" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(8) "KEYWORDS" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "E" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "Y" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "4" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "Y" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(13) "EAutocomplete" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(9) { ["VIEW"]=> string(1) "E" ["SHOW_ADD"]=> string(1) "Y" ["MAX_WIDTH"]=> int(0) ["MIN_HEIGHT"]=> int(24) ["MAX_HEIGHT"]=> int(1000) ["BAN_SYM"]=> string(2) ",;" ["REP_SYM"]=> string(1) " " ["OTHER_REP_SYM"]=> string(0) "" ["IBLOCK_MESS"]=> string(1) "Y" } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> bool(false) ["VALUE"]=> bool(false) ["DESCRIPTION"]=> bool(false) ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> bool(false) ["~DESCRIPTION"]=> bool(false) ["~NAME"]=> string(27) "Ключевые слова" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["SUBMITTED"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "20" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 17:21:42" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(21) "Дата подачи" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "SUBMITTED" ["DEFAULT_VALUE"]=> NULL ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(8) "DateTime" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(21) "Дата подачи" ["~DEFAULT_VALUE"]=> NULL } ["ACCEPTED"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "21" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 17:21:42" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(25) "Дата принятия" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(8) "ACCEPTED" ["DEFAULT_VALUE"]=> NULL ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(8) "DateTime" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(25) "Дата принятия" ["~DEFAULT_VALUE"]=> NULL } ["PUBLISHED"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "22" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 17:21:42" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(29) "Дата публикации" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "PUBLISHED" ["DEFAULT_VALUE"]=> NULL ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(8) "DateTime" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(29) "Дата публикации" ["~DEFAULT_VALUE"]=> NULL } ["CONTACT"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "23" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 14:43:05" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(14) "Контакт" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "CONTACT" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "E" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "3" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(13) "EAutocomplete" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(9) { ["VIEW"]=> string(1) "E" ["SHOW_ADD"]=> string(1) "Y" ["MAX_WIDTH"]=> int(0) ["MIN_HEIGHT"]=> int(24) ["MAX_HEIGHT"]=> int(1000) ["BAN_SYM"]=> string(2) ",;" ["REP_SYM"]=> string(1) " " ["OTHER_REP_SYM"]=> string(0) "" ["IBLOCK_MESS"]=> string(1) "N" } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(14) "Контакт" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["AUTHORS"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "24" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:45:07" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Авторы" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "AUTHORS" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "E" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "Y" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "3" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(13) "EAutocomplete" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(9) { ["VIEW"]=> string(1) "E" ["SHOW_ADD"]=> string(1) "Y" ["MAX_WIDTH"]=> int(0) ["MIN_HEIGHT"]=> int(24) ["MAX_HEIGHT"]=> int(1000) ["BAN_SYM"]=> string(2) ",;" ["REP_SYM"]=> string(1) " " ["OTHER_REP_SYM"]=> string(0) "" ["IBLOCK_MESS"]=> string(1) "N" } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> bool(false) ["VALUE"]=> bool(false) ["DESCRIPTION"]=> bool(false) ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> bool(false) ["~DESCRIPTION"]=> bool(false) ["~NAME"]=> string(12) "Авторы" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["AUTHOR_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "25" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Авторы" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28244" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(338) "<p>Богдан О. Щеглов </p> " ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(326) "Богдан О. Щеглов
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Авторы" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["ORGANIZATION_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "26" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(22) "Организации" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28245" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(162) "<p>Школа медицины, Дальневосточный федеральный университет, Владивосток, Россия</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(150) "Школа медицины, Дальневосточный федеральный университет, Владивосток, Россия
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(22) "Организации" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["SUMMARY_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "27" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28249" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(5101) "<p style="text-align: justify;">В ряде исследований была продемонстрирована АТФ-зависимая активность гемопоэтических стволовых клеток из иммуноочищенного меченого маркера элюата RecQL1 на примере человеческого гена RAD54L. Также в браузере генома UCSC представлено множество публикаций, связанных с мутантной активностью гена, что указывает на биомедицинский потенциал изучения этого гена.</p> <h3>Материалы и методы</h3> <p style="text-align: justify;">Данные были собраны и сохранены в геномном браузере UCSC. Для рассматриваемого гена большинство совпадений с мРНК человека были обнаружены в базах данных NCBI RefSeq, UCSC и GENCODE. Соотношение большинства интронов и экзон (только исходные имеют разную длину), их длина соответствует мРНК человека и аннотации экспрессированному тэгу последовательности (EST) человека. При рассмотрении гена RAD54L с различными аннотациями в RefSeq невозможно дать точную оценку сравнения с экспериментальными и прогнозируемыми РНК с концом PolyA (таких РНК нет). Согласно гену RAD54L, при секвенировании в клеточной культуре K562 PolyA+ преобладает множество псевдогенов. Большая часть транскрипта находится в цитозоле и нуклеосоме. Уровень экспрессии для CAGE в большей степени наблюдается в нуклеосоме и цитозоле. </p> <h3>Результаты</h3> <p style="text-align: justify;">Результаты показали, что этот ген в аннотациях был достаточно точно рассчитан и интерпретирован. Для гена RAD54L наблюдается большое количество пептидов, высокий уровень рибосомных сигналов профилирования, которые совпадают со структурой экзона гена, поэтому он является геном, кодирующим белок. По данным базы данных COSMIC, были выявлены множественные мутации, которые соответствуют всем экзонам гена при заболеваниях гемопоэза, эндометрия и опухолей легких. Аденокарцинома, толстая кишка, соматика, лимфома, неходжкинский рак, рак молочной железы, патологии стволовых клеток были обнаружены в базе данных OMIM.</p> <h3>Заключение</h3> <p style="text-align: justify;">Исходя из полученных результатов, можно утверждать, что данный ген RAD54L кодирует белок, который является важным звеном во многих физиологических, функциональных и патологических процессах в организме человека. Мутационная активность этого гена с высокой вероятностью приводит к развитию патологий различного генеза: анализ показал влияние на онкогенный процесс, развитие соматических заболеваний. Он играет большую роль в развитии наследственных заболеваний. Более того, имеется достаточное количество публикаций по исследованиям рассматриваемого гена, что указывает на возможные перспективные исследования биомедицины в части профилактики и лечения соматических и онкогенных заболеваний человека. </p> <h2>Ключевые слова</h2> <p style="text-align: justify;">Биоинформатический анализ, гемопоэтические стволовые клетки, ген RAD54L.</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(4943) "В ряде исследований была продемонстрирована АТФ-зависимая активность гемопоэтических стволовых клеток из иммуноочищенного меченого маркера элюата RecQL1 на примере человеческого гена RAD54L. Также в браузере генома UCSC представлено множество публикаций, связанных с мутантной активностью гена, что указывает на биомедицинский потенциал изучения этого гена.
Материалы и методы
Данные были собраны и сохранены в геномном браузере UCSC. Для рассматриваемого гена большинство совпадений с мРНК человека были обнаружены в базах данных NCBI RefSeq, UCSC и GENCODE. Соотношение большинства интронов и экзон (только исходные имеют разную длину), их длина соответствует мРНК человека и аннотации экспрессированному тэгу последовательности (EST) человека. При рассмотрении гена RAD54L с различными аннотациями в RefSeq невозможно дать точную оценку сравнения с экспериментальными и прогнозируемыми РНК с концом PolyA (таких РНК нет). Согласно гену RAD54L, при секвенировании в клеточной культуре K562 PolyA+ преобладает множество псевдогенов. Большая часть транскрипта находится в цитозоле и нуклеосоме. Уровень экспрессии для CAGE в большей степени наблюдается в нуклеосоме и цитозоле.
Результаты
Результаты показали, что этот ген в аннотациях был достаточно точно рассчитан и интерпретирован. Для гена RAD54L наблюдается большое количество пептидов, высокий уровень рибосомных сигналов профилирования, которые совпадают со структурой экзона гена, поэтому он является геном, кодирующим белок. По данным базы данных COSMIC, были выявлены множественные мутации, которые соответствуют всем экзонам гена при заболеваниях гемопоэза, эндометрия и опухолей легких. Аденокарцинома, толстая кишка, соматика, лимфома, неходжкинский рак, рак молочной железы, патологии стволовых клеток были обнаружены в базе данных OMIM.
Заключение
Исходя из полученных результатов, можно утверждать, что данный ген RAD54L кодирует белок, который является важным звеном во многих физиологических, функциональных и патологических процессах в организме человека. Мутационная активность этого гена с высокой вероятностью приводит к развитию патологий различного генеза: анализ показал влияние на онкогенный процесс, развитие соматических заболеваний. Он играет большую роль в развитии наследственных заболеваний. Более того, имеется достаточное количество публикаций по исследованиям рассматриваемого гена, что указывает на возможные перспективные исследования биомедицины в части профилактики и лечения соматических и онкогенных заболеваний человека.
Ключевые слова
Биоинформатический анализ, гемопоэтические стволовые клетки, ген RAD54L.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["DOI"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "28" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2016-04-06 14:11:12" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(3) "DOI" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(3) "DOI" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28246" ["VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(3) "DOI" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["AUTHOR_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "37" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(6) "Author" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28250" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(416) "<p>Bogdan O. Shcheglov </p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(404) "Bogdan O. Shcheglov
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(6) "Author" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["ORGANIZATION_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "38" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Organization" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28251" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(241) "<p>School of Medicine, Far Eastern Federal University, Vladivostok, Russia</p><br> <p><b>Correspondence:</b><br> Bogdan O. Shcheglov, phone: +7 (914) 718-98-25, e-mail: b.shcheglov@mail.ru</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(193) "School of Medicine, Far Eastern Federal University, Vladivostok, Russia
Correspondence:
Bogdan O. Shcheglov, phone: +7 (914) 718-98-25, e-mail: b.shcheglov@mail.ru
A number of workers demonstrated an ATP-dependent activity of moving hematopoietic stem cells from immunopurified FLAG-labeled RecQL1 eluate using the example of the human gene RAD54L. Also in the UCSC genome browser presented many publications related to mutant gene activity, which indicates the biomedical potential of the study of this gene.
Materials and methods
Data were collected and maintained by the UCSC Genome Browser. For the gene under consideration, most matches with Human mRNA were found in the NCBI RefSeq, UCSC genes, and GENCODE databases. The ratio of most introns and exons (only the initial ones have different lengths), their length corresponds to Human mRNA and the Human expressed sequence tag (EST). When considering the RAD54L gene with different annotations in RefSeq, it is impossible to give an accurate assessment of the comparison with the experimental and predicted RNAs with PolyA end (there are no such RNAs). According to the RAD54L gene, sequencing in the cell culture K562 PolyA + predominates, found many pseudogenes. Most of the transcript located in the cytosol and nucleosome. The expression level for CAGE is most observed in the nucleosome and cytosol.
Results
The study revealed that this gene in the annotations was reasonably correctly calculated and interpreted. A large number of peptides are observed for the RAD54L gene, a high level of ribosomal profiling signals that coincide with the exon structure of the gene, therefore it is a protein-coding gene. According to COSMIC, multiple mutations were identified that correspond to all exons of the gene in hematopoietic, endometrial and lung tumor diseases. Adenocarcinoma, colonic, somatic, Lymphoma, non-Hodgkin, Breast cancer, pathologies of stem cells were found in the OMIM database.
Conclusions
Based on the results obtained, it can be argued that this RAD54L gene encodes a protein, which is an important link in many physiological, functional and pathological processes in the human body. The mutational activity of this gene is highly likely to lead to the development of pathologies of different genesis: the analysis showed an effect on the oncogenic process, the development of somatic diseases. It has a large role in the development of hereditary diseases. In conclusion, there is a sufficient number of publications on the information of this gene, which indicates possible promising studies of biomedicine in terms of prevention and treatment of somatic and oncogenic diseases of humans.
Keywords
Bioinformatics analysis, hematopoietic stem cells, RAD54L gene.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["NAME_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "40" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:49:47" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(4) "Name" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "NAME_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28247" ["VALUE"]=> string(128) "GC-10. Bioinformatic analysis of the RAD54L oncogene for detecting the effect on the occurrence of hematopoietic stem disorders " ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(128) "GC-10. Bioinformatic analysis of the RAD54L oncogene for detecting the effect on the occurrence of hematopoietic stem disorders " ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(4) "Name" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["FULL_TEXT_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "42" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-07 20:29:18" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(23) "Полный текст" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(12) "FULL_TEXT_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(23) "Полный текст" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["PDF_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "43" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-09 16:05:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(7) "PDF RUS" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(6) "PDF_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "F" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(18) "doc, txt, rtf, pdf" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28248" ["VALUE"]=> string(4) "2645" ["DESCRIPTION"]=> NULL ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(4) "2645" ["~DESCRIPTION"]=> NULL ["~NAME"]=> string(7) "PDF RUS" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["PDF_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "44" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-09 16:05:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(7) "PDF ENG" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(6) "PDF_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "F" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(18) "doc, txt, rtf, pdf" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28253" ["VALUE"]=> string(4) "2646" ["DESCRIPTION"]=> NULL ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(4) "2646" ["~DESCRIPTION"]=> NULL ["~NAME"]=> string(7) "PDF ENG" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["NAME_LONG"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "45" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2023-04-13 00:55:00" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(72) "Название (для очень длинных заголовков)" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "NAME_LONG" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TYPE"]=> string(4) "HTML" ["TEXT"]=> string(0) "" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(80) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(72) "Название (для очень длинных заголовков)" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TYPE"]=> string(4) "HTML" ["TEXT"]=> string(0) "" } } } ["DISPLAY_PROPERTIES"]=> array(8) { ["AUTHOR_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "37" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(6) "Author" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28250" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(416) "<p>Bogdan O. Shcheglov </p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(404) "Bogdan O. Shcheglov
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(6) "Author" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(404) "Bogdan O. Shcheglov
" } ["SUMMARY_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "39" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28252" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(2962) "<p style="text-align: justify;">A number of workers demonstrated an ATP-dependent activity of moving hematopoietic stem cells from immunopurified FLAG-labeled RecQL1 eluate using the example of the human gene RAD54L. Also in the UCSC genome browser presented many publications related to mutant gene activity, which indicates the biomedical potential of the study of this gene.</p> <h3>Materials and methods</h3> <p style="text-align: justify;">Data were collected and maintained by the UCSC Genome Browser. For the gene under consideration, most matches with Human mRNA were found in the NCBI RefSeq, UCSC genes, and GENCODE databases. The ratio of most introns and exons (only the initial ones have different lengths), their length corresponds to Human mRNA and the Human expressed sequence tag (EST). When considering the RAD54L gene with different annotations in RefSeq, it is impossible to give an accurate assessment of the comparison with the experimental and predicted RNAs with PolyA end (there are no such RNAs). According to the RAD54L gene, sequencing in the cell culture K562 PolyA + predominates, found many pseudogenes. Most of the transcript located in the cytosol and nucleosome. The expression level for CAGE is most observed in the nucleosome and cytosol.</p> <h3>Results</h3> <p style="text-align: justify;">The study revealed that this gene in the annotations was reasonably correctly calculated and interpreted. A large number of peptides are observed for the RAD54L gene, a high level of ribosomal profiling signals that coincide with the exon structure of the gene, therefore it is a protein-coding gene. According to COSMIC, multiple mutations were identified that correspond to all exons of the gene in hematopoietic, endometrial and lung tumor diseases. Adenocarcinoma, colonic, somatic, Lymphoma, non-Hodgkin, Breast cancer, pathologies of stem cells were found in the OMIM database. </p> <h3>Conclusions</h3> <p style="text-align: justify;">Based on the results obtained, it can be argued that this RAD54L gene encodes a protein, which is an important link in many physiological, functional and pathological processes in the human body. The mutational activity of this gene is highly likely to lead to the development of pathologies of different genesis: the analysis showed an effect on the oncogenic process, the development of somatic diseases. It has a large role in the development of hereditary diseases. In conclusion, there is a sufficient number of publications on the information of this gene, which indicates possible promising studies of biomedicine in terms of prevention and treatment of somatic and oncogenic diseases of humans.</p> <h2>Keywords</h2> <p style="text-align: justify;">Bioinformatics analysis, hematopoietic stem cells, RAD54L gene.</p> " ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(2804) "A number of workers demonstrated an ATP-dependent activity of moving hematopoietic stem cells from immunopurified FLAG-labeled RecQL1 eluate using the example of the human gene RAD54L. Also in the UCSC genome browser presented many publications related to mutant gene activity, which indicates the biomedical potential of the study of this gene.
Materials and methods
Data were collected and maintained by the UCSC Genome Browser. For the gene under consideration, most matches with Human mRNA were found in the NCBI RefSeq, UCSC genes, and GENCODE databases. The ratio of most introns and exons (only the initial ones have different lengths), their length corresponds to Human mRNA and the Human expressed sequence tag (EST). When considering the RAD54L gene with different annotations in RefSeq, it is impossible to give an accurate assessment of the comparison with the experimental and predicted RNAs with PolyA end (there are no such RNAs). According to the RAD54L gene, sequencing in the cell culture K562 PolyA + predominates, found many pseudogenes. Most of the transcript located in the cytosol and nucleosome. The expression level for CAGE is most observed in the nucleosome and cytosol.
Results
The study revealed that this gene in the annotations was reasonably correctly calculated and interpreted. A large number of peptides are observed for the RAD54L gene, a high level of ribosomal profiling signals that coincide with the exon structure of the gene, therefore it is a protein-coding gene. According to COSMIC, multiple mutations were identified that correspond to all exons of the gene in hematopoietic, endometrial and lung tumor diseases. Adenocarcinoma, colonic, somatic, Lymphoma, non-Hodgkin, Breast cancer, pathologies of stem cells were found in the OMIM database.
Conclusions
Based on the results obtained, it can be argued that this RAD54L gene encodes a protein, which is an important link in many physiological, functional and pathological processes in the human body. The mutational activity of this gene is highly likely to lead to the development of pathologies of different genesis: the analysis showed an effect on the oncogenic process, the development of somatic diseases. It has a large role in the development of hereditary diseases. In conclusion, there is a sufficient number of publications on the information of this gene, which indicates possible promising studies of biomedicine in terms of prevention and treatment of somatic and oncogenic diseases of humans.
Keywords
Bioinformatics analysis, hematopoietic stem cells, RAD54L gene.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(2804) "A number of workers demonstrated an ATP-dependent activity of moving hematopoietic stem cells from immunopurified FLAG-labeled RecQL1 eluate using the example of the human gene RAD54L. Also in the UCSC genome browser presented many publications related to mutant gene activity, which indicates the biomedical potential of the study of this gene.
Materials and methods
Data were collected and maintained by the UCSC Genome Browser. For the gene under consideration, most matches with Human mRNA were found in the NCBI RefSeq, UCSC genes, and GENCODE databases. The ratio of most introns and exons (only the initial ones have different lengths), their length corresponds to Human mRNA and the Human expressed sequence tag (EST). When considering the RAD54L gene with different annotations in RefSeq, it is impossible to give an accurate assessment of the comparison with the experimental and predicted RNAs with PolyA end (there are no such RNAs). According to the RAD54L gene, sequencing in the cell culture K562 PolyA + predominates, found many pseudogenes. Most of the transcript located in the cytosol and nucleosome. The expression level for CAGE is most observed in the nucleosome and cytosol.
Results
The study revealed that this gene in the annotations was reasonably correctly calculated and interpreted. A large number of peptides are observed for the RAD54L gene, a high level of ribosomal profiling signals that coincide with the exon structure of the gene, therefore it is a protein-coding gene. According to COSMIC, multiple mutations were identified that correspond to all exons of the gene in hematopoietic, endometrial and lung tumor diseases. Adenocarcinoma, colonic, somatic, Lymphoma, non-Hodgkin, Breast cancer, pathologies of stem cells were found in the OMIM database.
Conclusions
Based on the results obtained, it can be argued that this RAD54L gene encodes a protein, which is an important link in many physiological, functional and pathological processes in the human body. The mutational activity of this gene is highly likely to lead to the development of pathologies of different genesis: the analysis showed an effect on the oncogenic process, the development of somatic diseases. It has a large role in the development of hereditary diseases. In conclusion, there is a sufficient number of publications on the information of this gene, which indicates possible promising studies of biomedicine in terms of prevention and treatment of somatic and oncogenic diseases of humans.
Keywords
Bioinformatics analysis, hematopoietic stem cells, RAD54L gene.
" } ["DOI"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "28" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2016-04-06 14:11:12" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(3) "DOI" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(3) "DOI" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28246" ["VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(3) "DOI" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["DISPLAY_VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" } ["NAME_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "40" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:49:47" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(4) "Name" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "NAME_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28247" ["VALUE"]=> string(128) "GC-10. Bioinformatic analysis of the RAD54L oncogene for detecting the effect on the occurrence of hematopoietic stem disorders " ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(128) "GC-10. Bioinformatic analysis of the RAD54L oncogene for detecting the effect on the occurrence of hematopoietic stem disorders " ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(4) "Name" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["DISPLAY_VALUE"]=> string(128) "GC-10. Bioinformatic analysis of the RAD54L oncogene for detecting the effect on the occurrence of hematopoietic stem disorders " } ["ORGANIZATION_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "38" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Organization" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28251" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(241) "<p>School of Medicine, Far Eastern Federal University, Vladivostok, Russia</p><br> <p><b>Correspondence:</b><br> Bogdan O. Shcheglov, phone: +7 (914) 718-98-25, e-mail: b.shcheglov@mail.ru</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(193) "School of Medicine, Far Eastern Federal University, Vladivostok, Russia
Correspondence:
Bogdan O. Shcheglov, phone: +7 (914) 718-98-25, e-mail: b.shcheglov@mail.ru
School of Medicine, Far Eastern Federal University, Vladivostok, Russia
Correspondence:
Bogdan O. Shcheglov, phone: +7 (914) 718-98-25, e-mail: b.shcheglov@mail.ru
Богдан О. Щеглов
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Авторы" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(326) "Богдан О. Щеглов
" } ["SUMMARY_RU"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "27" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28249" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(5101) "<p style="text-align: justify;">В ряде исследований была продемонстрирована АТФ-зависимая активность гемопоэтических стволовых клеток из иммуноочищенного меченого маркера элюата RecQL1 на примере человеческого гена RAD54L. Также в браузере генома UCSC представлено множество публикаций, связанных с мутантной активностью гена, что указывает на биомедицинский потенциал изучения этого гена.</p> <h3>Материалы и методы</h3> <p style="text-align: justify;">Данные были собраны и сохранены в геномном браузере UCSC. Для рассматриваемого гена большинство совпадений с мРНК человека были обнаружены в базах данных NCBI RefSeq, UCSC и GENCODE. Соотношение большинства интронов и экзон (только исходные имеют разную длину), их длина соответствует мРНК человека и аннотации экспрессированному тэгу последовательности (EST) человека. При рассмотрении гена RAD54L с различными аннотациями в RefSeq невозможно дать точную оценку сравнения с экспериментальными и прогнозируемыми РНК с концом PolyA (таких РНК нет). Согласно гену RAD54L, при секвенировании в клеточной культуре K562 PolyA+ преобладает множество псевдогенов. Большая часть транскрипта находится в цитозоле и нуклеосоме. Уровень экспрессии для CAGE в большей степени наблюдается в нуклеосоме и цитозоле. </p> <h3>Результаты</h3> <p style="text-align: justify;">Результаты показали, что этот ген в аннотациях был достаточно точно рассчитан и интерпретирован. Для гена RAD54L наблюдается большое количество пептидов, высокий уровень рибосомных сигналов профилирования, которые совпадают со структурой экзона гена, поэтому он является геном, кодирующим белок. По данным базы данных COSMIC, были выявлены множественные мутации, которые соответствуют всем экзонам гена при заболеваниях гемопоэза, эндометрия и опухолей легких. Аденокарцинома, толстая кишка, соматика, лимфома, неходжкинский рак, рак молочной железы, патологии стволовых клеток были обнаружены в базе данных OMIM.</p> <h3>Заключение</h3> <p style="text-align: justify;">Исходя из полученных результатов, можно утверждать, что данный ген RAD54L кодирует белок, который является важным звеном во многих физиологических, функциональных и патологических процессах в организме человека. Мутационная активность этого гена с высокой вероятностью приводит к развитию патологий различного генеза: анализ показал влияние на онкогенный процесс, развитие соматических заболеваний. Он играет большую роль в развитии наследственных заболеваний. Более того, имеется достаточное количество публикаций по исследованиям рассматриваемого гена, что указывает на возможные перспективные исследования биомедицины в части профилактики и лечения соматических и онкогенных заболеваний человека. </p> <h2>Ключевые слова</h2> <p style="text-align: justify;">Биоинформатический анализ, гемопоэтические стволовые клетки, ген RAD54L.</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(4943) "В ряде исследований была продемонстрирована АТФ-зависимая активность гемопоэтических стволовых клеток из иммуноочищенного меченого маркера элюата RecQL1 на примере человеческого гена RAD54L. Также в браузере генома UCSC представлено множество публикаций, связанных с мутантной активностью гена, что указывает на биомедицинский потенциал изучения этого гена.
Материалы и методы
Данные были собраны и сохранены в геномном браузере UCSC. Для рассматриваемого гена большинство совпадений с мРНК человека были обнаружены в базах данных NCBI RefSeq, UCSC и GENCODE. Соотношение большинства интронов и экзон (только исходные имеют разную длину), их длина соответствует мРНК человека и аннотации экспрессированному тэгу последовательности (EST) человека. При рассмотрении гена RAD54L с различными аннотациями в RefSeq невозможно дать точную оценку сравнения с экспериментальными и прогнозируемыми РНК с концом PolyA (таких РНК нет). Согласно гену RAD54L, при секвенировании в клеточной культуре K562 PolyA+ преобладает множество псевдогенов. Большая часть транскрипта находится в цитозоле и нуклеосоме. Уровень экспрессии для CAGE в большей степени наблюдается в нуклеосоме и цитозоле.
Результаты
Результаты показали, что этот ген в аннотациях был достаточно точно рассчитан и интерпретирован. Для гена RAD54L наблюдается большое количество пептидов, высокий уровень рибосомных сигналов профилирования, которые совпадают со структурой экзона гена, поэтому он является геном, кодирующим белок. По данным базы данных COSMIC, были выявлены множественные мутации, которые соответствуют всем экзонам гена при заболеваниях гемопоэза, эндометрия и опухолей легких. Аденокарцинома, толстая кишка, соматика, лимфома, неходжкинский рак, рак молочной железы, патологии стволовых клеток были обнаружены в базе данных OMIM.
Заключение
Исходя из полученных результатов, можно утверждать, что данный ген RAD54L кодирует белок, который является важным звеном во многих физиологических, функциональных и патологических процессах в организме человека. Мутационная активность этого гена с высокой вероятностью приводит к развитию патологий различного генеза: анализ показал влияние на онкогенный процесс, развитие соматических заболеваний. Он играет большую роль в развитии наследственных заболеваний. Более того, имеется достаточное количество публикаций по исследованиям рассматриваемого гена, что указывает на возможные перспективные исследования биомедицины в части профилактики и лечения соматических и онкогенных заболеваний человека.
Ключевые слова
Биоинформатический анализ, гемопоэтические стволовые клетки, ген RAD54L.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(4943) "В ряде исследований была продемонстрирована АТФ-зависимая активность гемопоэтических стволовых клеток из иммуноочищенного меченого маркера элюата RecQL1 на примере человеческого гена RAD54L. Также в браузере генома UCSC представлено множество публикаций, связанных с мутантной активностью гена, что указывает на биомедицинский потенциал изучения этого гена.
Материалы и методы
Данные были собраны и сохранены в геномном браузере UCSC. Для рассматриваемого гена большинство совпадений с мРНК человека были обнаружены в базах данных NCBI RefSeq, UCSC и GENCODE. Соотношение большинства интронов и экзон (только исходные имеют разную длину), их длина соответствует мРНК человека и аннотации экспрессированному тэгу последовательности (EST) человека. При рассмотрении гена RAD54L с различными аннотациями в RefSeq невозможно дать точную оценку сравнения с экспериментальными и прогнозируемыми РНК с концом PolyA (таких РНК нет). Согласно гену RAD54L, при секвенировании в клеточной культуре K562 PolyA+ преобладает множество псевдогенов. Большая часть транскрипта находится в цитозоле и нуклеосоме. Уровень экспрессии для CAGE в большей степени наблюдается в нуклеосоме и цитозоле.
Результаты
Результаты показали, что этот ген в аннотациях был достаточно точно рассчитан и интерпретирован. Для гена RAD54L наблюдается большое количество пептидов, высокий уровень рибосомных сигналов профилирования, которые совпадают со структурой экзона гена, поэтому он является геном, кодирующим белок. По данным базы данных COSMIC, были выявлены множественные мутации, которые соответствуют всем экзонам гена при заболеваниях гемопоэза, эндометрия и опухолей легких. Аденокарцинома, толстая кишка, соматика, лимфома, неходжкинский рак, рак молочной железы, патологии стволовых клеток были обнаружены в базе данных OMIM.
Заключение
Исходя из полученных результатов, можно утверждать, что данный ген RAD54L кодирует белок, который является важным звеном во многих физиологических, функциональных и патологических процессах в организме человека. Мутационная активность этого гена с высокой вероятностью приводит к развитию патологий различного генеза: анализ показал влияние на онкогенный процесс, развитие соматических заболеваний. Он играет большую роль в развитии наследственных заболеваний. Более того, имеется достаточное количество публикаций по исследованиям рассматриваемого гена, что указывает на возможные перспективные исследования биомедицины в части профилактики и лечения соматических и онкогенных заболеваний человека.
Ключевые слова
Биоинформатический анализ, гемопоэтические стволовые клетки, ген RAD54L.
" } ["ORGANIZATION_RU"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "26" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(22) "Организации" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28245" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(162) "<p>Школа медицины, Дальневосточный федеральный университет, Владивосток, Россия</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(150) "Школа медицины, Дальневосточный федеральный университет, Владивосток, Россия
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(22) "Организации" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(150) "Школа медицины, Дальневосточный федеральный университет, Владивосток, Россия
" } } } [2]=> array(49) { ["IBLOCK_SECTION_ID"]=> string(3) "196" ["~IBLOCK_SECTION_ID"]=> string(3) "196" ["ID"]=> string(4) "2026" ["~ID"]=> string(4) "2026" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["~IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(382) "GC-12. Комбинируя CAR-T и биспецифические антитела: новый дизайн химерного антигенного рецептора с внеклеточным доменом CD3E для перенаправления противоопухолевой специфичности с помощью биспецифических антител" ["~NAME"]=> string(382) "GC-12. Комбинируя CAR-T и биспецифические антитела: новый дизайн химерного антигенного рецептора с внеклеточным доменом CD3E для перенаправления противоопухолевой специфичности с помощью биспецифических антител" ["ACTIVE_FROM"]=> NULL ["~ACTIVE_FROM"]=> NULL ["TIMESTAMP_X"]=> string(22) "12/21/2021 12:24:44 pm" ["~TIMESTAMP_X"]=> string(22) "12/21/2021 12:24:44 pm" ["DETAIL_PAGE_URL"]=> string(237) "/en/archive/tom-10-nomer-3/tezisy-dokladov-xv-simpoziuma-pamyati-r-m-gorbachevoy-po-razdelam/gennaya-i-kletochnaya-terapiya-gc-01-gc-15/gc-12-kombiniruya-car-t-i-bispetsificheskie-antitela-novyy-dizayn-khimernogo-antigennogo-retseptora-/" ["~DETAIL_PAGE_URL"]=> string(237) "/en/archive/tom-10-nomer-3/tezisy-dokladov-xv-simpoziuma-pamyati-r-m-gorbachevoy-po-razdelam/gennaya-i-kletochnaya-terapiya-gc-01-gc-15/gc-12-kombiniruya-car-t-i-bispetsificheskie-antitela-novyy-dizayn-khimernogo-antigennogo-retseptora-/" ["LIST_PAGE_URL"]=> string(12) "/en/archive/" ["~LIST_PAGE_URL"]=> string(12) "/en/archive/" ["DETAIL_TEXT"]=> string(0) "" ["~DETAIL_TEXT"]=> string(0) "" ["DETAIL_TEXT_TYPE"]=> string(4) "text" ["~DETAIL_TEXT_TYPE"]=> string(4) "text" ["PREVIEW_TEXT"]=> string(0) "" ["~PREVIEW_TEXT"]=> string(0) "" ["PREVIEW_TEXT_TYPE"]=> string(4) "text" ["~PREVIEW_TEXT_TYPE"]=> string(4) "text" ["PREVIEW_PICTURE"]=> NULL ["~PREVIEW_PICTURE"]=> NULL ["LANG_DIR"]=> string(4) "/ru/" ["~LANG_DIR"]=> string(4) "/ru/" ["SORT"]=> string(3) "120" ["~SORT"]=> string(3) "120" ["CODE"]=> string(100) "gc-12-kombiniruya-car-t-i-bispetsificheskie-antitela-novyy-dizayn-khimernogo-antigennogo-retseptora-" ["~CODE"]=> string(100) "gc-12-kombiniruya-car-t-i-bispetsificheskie-antitela-novyy-dizayn-khimernogo-antigennogo-retseptora-" ["EXTERNAL_ID"]=> string(4) "2026" ["~EXTERNAL_ID"]=> string(4) "2026" ["IBLOCK_TYPE_ID"]=> string(7) "journal" ["~IBLOCK_TYPE_ID"]=> string(7) "journal" ["IBLOCK_CODE"]=> string(7) "volumes" ["~IBLOCK_CODE"]=> string(7) "volumes" ["IBLOCK_EXTERNAL_ID"]=> NULL ["~IBLOCK_EXTERNAL_ID"]=> NULL ["LID"]=> string(2) "s2" ["~LID"]=> string(2) "s2" ["EDIT_LINK"]=> NULL ["DELETE_LINK"]=> NULL ["DISPLAY_ACTIVE_FROM"]=> string(0) "" ["IPROPERTY_VALUES"]=> array(18) { ["ELEMENT_META_TITLE"]=> string(382) "GC-12. Комбинируя CAR-T и биспецифические антитела: новый дизайн химерного антигенного рецептора с внеклеточным доменом CD3E для перенаправления противоопухолевой специфичности с помощью биспецифических антител" ["ELEMENT_META_KEYWORDS"]=> string(0) "" ["ELEMENT_META_DESCRIPTION"]=> string(559) "GC-12. Комбинируя CAR-T и биспецифические антитела: новый дизайн химерного антигенного рецептора с внеклеточным доменом CD3E для перенаправления противоопухолевой специфичности с помощью биспецифических антителGC-12. Combining bispecifics and CARs: novel design of chimeric antigen receptor with CD3E extracellular domain for redirecting antitumor specificity with bispecific antibodies " ["ELEMENT_PREVIEW_PICTURE_FILE_ALT"]=> string(7099) "<p style="text-align: justify;">Т-клеточная терапия с использованием рекомбинантного химерного антигенного рецептора (CAR-T) стала выдающийся терапевтической опцией для лечения некоторых В-клеточных злокачественных новообразований. Однако, примерно у половины пациентов наблюдаются рецидивы. Важным механизмом устойчивости к CAR-T терапии являются уменьшение экспрессии антигена и истощение CAR-T продукта. Большинство биспецифических Т-клеточных антител (BsAbs) связывают белок CD3-эпсилон (CD3ε) на Т-клетках вместе с ассоциированным с опухолью антигеном. Использование CD3ε в качестве внеклеточного домена CAR позволяет задействовать данный рецептор в формировании иммунных синапсов как при взаимодейстии BsAbs с Т-клеточным рецептором. CAR-T-терапия обладает непренебрежимой токсичностью – вплоть до фатальных исходов у некоторых пациентов. Наш подход потенциально нацелен на снижение токсического воздействия CAR-T путем контроля путем контроля инфузии BsAbs, а подбор специфичности возможен путем изменения BsAbs. Кроме того, возможность переведения CAR-T клеток в неактивное состояние путем прекращения инфузии BsAbs предположительно устраняет истощение клеточного продукта [1].</p> <h3>Материалы и методы</h3> <p style="text-align: justify;">кДНК внеклеточного домена (ВКД) гена CD3E была получена из мРНК мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC) здорового донора и клонирована в pIRES. Затем кДНК внеклеточный домен CD3E была вставлена в лентивирусную плазмиду pCDH, содержащую FMC63-CD8stalk-41bbz CAR с NGFR в качестве репортерного гена заменяя FMC63 (клон 7). Лентивирусные препараты получали с использованием клеток HEK293T и упаковывающих плазмид pMD2.G и psPAX2. Лентивирусный препарат титровали с использованием линии клеток HEK293. PBMC здорового донора выделяли с помощью центрифугирования в градиенте плотности фиколла. Клетки были посажены в лунку в концентрации 1-2*10<sup>6</sup> клеток/мл и активированы 0,1 мкг/мл anti-CD3 антителами (OKT3) с добавлением 50 ЕД/мл IL-2 в течение 3 дней. На 3-й день клетки были трансдуцированы лентивирусным вектором в течение 2 дней. На 5-8 день после активации с помощью проточной цитометрии клетки оценивали на экспрессию NGFR. На следующий день после определения процента NGFR-положительных клеток проводили тест на цитотоксичность: клеточную линию Raji, окрашенную CFSE, инкубировали с CAR-T-клетками в различных соотношениях в двух повторах с добавлением в различных концентрациях BsAbs (блинатумомаб или глофитамаб). Процент выживших клеток-мишеней (Raji) определяли методом проточной цитометрии через 4 или 24 часа. Цитотоксичность определяли по формуле: 100 – живые клетки/контрольные клетки живые (без эффекторов). </p> <h3>Результаты</h3> <p style="text-align: justify;">Титр лентивируса составил 8×10<sup>4</sup>/µL на клетках HEK293T. Эффективность трансдукции составила 30-90%. Цитотоксичность при инкубации 4 и 24 часа с блинатумомабом в концентрациях 0, 10, 100 и 200 нг/мл при соотношении эффектор:мишень (Э:М) – 0,3:1, 1:1, 3:1, 5:1 статистически значимо не отличалась от контроля. Цитотоксичность глофитамаба тестировали при концентрациях 0, 1, 10 пМ/л с соотношением (Э:М) 0,3: 1, 1: 1, 5: 1 в течение 24 часов. Наибольшая цитотоксичность была в соотношении (Э:М) 5:1, где CAR-T был более эффективным, чем нетрансдуцированные Т-клетки при концентрации глофитамаба 1 пМ/л (59% против 93%) и 10 пМ/л (74% против 96%).</p> <h3>Вывод</h3> <p style="text-align: justify;">Новые CAR с внеклеточным доменом CD3E, перенаправляемые BsAbs (глофитамабом), активны против В-клеточной лимфомы <i>in vitro</i>, но при применении блинатумомаба подобного не замечено, что можно объяснить тем, что фрагмент OKT3, на котором основан блинатумомаб, распознает CD3ε только в качестве димера, но не мономера [2-4]. Следовательно, является оправданным создание CAR с внеклеточными доменами CD3epsilon/CD3gamma и CD3epsilon/CD3delta.</p> <h2>Ключевые слова</h2> <p style="text-align: justify;">CAR-T, химерный антигенный рецептор, клеточная терапия, В-клеточные опухоли, биспецифические антитела.</p>" ["ELEMENT_PREVIEW_PICTURE_FILE_TITLE"]=> string(382) "GC-12. Комбинируя CAR-T и биспецифические антитела: новый дизайн химерного антигенного рецептора с внеклеточным доменом CD3E для перенаправления противоопухолевой специфичности с помощью биспецифических антител" ["ELEMENT_DETAIL_PICTURE_FILE_ALT"]=> string(382) "GC-12. Комбинируя CAR-T и биспецифические антитела: новый дизайн химерного антигенного рецептора с внеклеточным доменом CD3E для перенаправления противоопухолевой специфичности с помощью биспецифических антител" ["ELEMENT_DETAIL_PICTURE_FILE_TITLE"]=> string(382) "GC-12. Комбинируя CAR-T и биспецифические антитела: новый дизайн химерного антигенного рецептора с внеклеточным доменом CD3E для перенаправления противоопухолевой специфичности с помощью биспецифических антител" ["SECTION_META_TITLE"]=> string(382) "GC-12. Комбинируя CAR-T и биспецифические антитела: новый дизайн химерного антигенного рецептора с внеклеточным доменом CD3E для перенаправления противоопухолевой специфичности с помощью биспецифических антител" ["SECTION_META_KEYWORDS"]=> string(382) "GC-12. Комбинируя CAR-T и биспецифические антитела: новый дизайн химерного антигенного рецептора с внеклеточным доменом CD3E для перенаправления противоопухолевой специфичности с помощью биспецифических антител" ["SECTION_META_DESCRIPTION"]=> string(382) "GC-12. Комбинируя CAR-T и биспецифические антитела: новый дизайн химерного антигенного рецептора с внеклеточным доменом CD3E для перенаправления противоопухолевой специфичности с помощью биспецифических антител" ["SECTION_PICTURE_FILE_ALT"]=> string(382) "GC-12. Комбинируя CAR-T и биспецифические антитела: новый дизайн химерного антигенного рецептора с внеклеточным доменом CD3E для перенаправления противоопухолевой специфичности с помощью биспецифических антител" ["SECTION_PICTURE_FILE_TITLE"]=> string(382) "GC-12. Комбинируя CAR-T и биспецифические антитела: новый дизайн химерного антигенного рецептора с внеклеточным доменом CD3E для перенаправления противоопухолевой специфичности с помощью биспецифических антител" ["SECTION_PICTURE_FILE_NAME"]=> string(100) "gc-12-kombiniruya-car-t-i-bispetsificheskie-antitela-novyy-dizayn-khimernogo-antigennogo-retseptora-" ["SECTION_DETAIL_PICTURE_FILE_ALT"]=> string(382) "GC-12. Комбинируя CAR-T и биспецифические антитела: новый дизайн химерного антигенного рецептора с внеклеточным доменом CD3E для перенаправления противоопухолевой специфичности с помощью биспецифических антител" ["SECTION_DETAIL_PICTURE_FILE_TITLE"]=> string(382) "GC-12. Комбинируя CAR-T и биспецифические антитела: новый дизайн химерного антигенного рецептора с внеклеточным доменом CD3E для перенаправления противоопухолевой специфичности с помощью биспецифических антител" ["SECTION_DETAIL_PICTURE_FILE_NAME"]=> string(100) "gc-12-kombiniruya-car-t-i-bispetsificheskie-antitela-novyy-dizayn-khimernogo-antigennogo-retseptora-" ["ELEMENT_PREVIEW_PICTURE_FILE_NAME"]=> string(100) "gc-12-kombiniruya-car-t-i-bispetsificheskie-antitela-novyy-dizayn-khimernogo-antigennogo-retseptora-" ["ELEMENT_DETAIL_PICTURE_FILE_NAME"]=> string(100) "gc-12-kombiniruya-car-t-i-bispetsificheskie-antitela-novyy-dizayn-khimernogo-antigennogo-retseptora-" } ["FIELDS"]=> array(1) { ["IBLOCK_SECTION_ID"]=> string(3) "196" } ["PROPERTIES"]=> array(18) { ["KEYWORDS"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "19" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:46:01" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(27) "Ключевые слова" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(8) "KEYWORDS" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "E" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "Y" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "4" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "Y" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(13) "EAutocomplete" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(9) { ["VIEW"]=> string(1) "E" ["SHOW_ADD"]=> string(1) "Y" ["MAX_WIDTH"]=> int(0) ["MIN_HEIGHT"]=> int(24) ["MAX_HEIGHT"]=> int(1000) ["BAN_SYM"]=> string(2) ",;" ["REP_SYM"]=> string(1) " " ["OTHER_REP_SYM"]=> string(0) "" ["IBLOCK_MESS"]=> string(1) "Y" } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> bool(false) ["VALUE"]=> bool(false) ["DESCRIPTION"]=> bool(false) ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> bool(false) ["~DESCRIPTION"]=> bool(false) ["~NAME"]=> string(27) "Ключевые слова" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["SUBMITTED"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "20" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 17:21:42" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(21) "Дата подачи" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "SUBMITTED" ["DEFAULT_VALUE"]=> NULL ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(8) "DateTime" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(21) "Дата подачи" ["~DEFAULT_VALUE"]=> NULL } ["ACCEPTED"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "21" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 17:21:42" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(25) "Дата принятия" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(8) "ACCEPTED" ["DEFAULT_VALUE"]=> NULL ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(8) "DateTime" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(25) "Дата принятия" ["~DEFAULT_VALUE"]=> NULL } ["PUBLISHED"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "22" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 17:21:42" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(29) "Дата публикации" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "PUBLISHED" ["DEFAULT_VALUE"]=> NULL ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(8) "DateTime" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(29) "Дата публикации" ["~DEFAULT_VALUE"]=> NULL } ["CONTACT"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "23" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 14:43:05" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(14) "Контакт" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "CONTACT" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "E" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "3" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(13) "EAutocomplete" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(9) { ["VIEW"]=> string(1) "E" ["SHOW_ADD"]=> string(1) "Y" ["MAX_WIDTH"]=> int(0) ["MIN_HEIGHT"]=> int(24) ["MAX_HEIGHT"]=> int(1000) ["BAN_SYM"]=> string(2) ",;" ["REP_SYM"]=> string(1) " " ["OTHER_REP_SYM"]=> string(0) "" ["IBLOCK_MESS"]=> string(1) "N" } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(14) "Контакт" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["AUTHORS"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "24" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:45:07" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Авторы" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "AUTHORS" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "E" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "Y" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "3" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(13) "EAutocomplete" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(9) { ["VIEW"]=> string(1) "E" ["SHOW_ADD"]=> string(1) "Y" ["MAX_WIDTH"]=> int(0) ["MIN_HEIGHT"]=> int(24) ["MAX_HEIGHT"]=> int(1000) ["BAN_SYM"]=> string(2) ",;" ["REP_SYM"]=> string(1) " " ["OTHER_REP_SYM"]=> string(0) "" ["IBLOCK_MESS"]=> string(1) "N" } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> bool(false) ["VALUE"]=> bool(false) ["DESCRIPTION"]=> bool(false) ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> bool(false) ["~DESCRIPTION"]=> bool(false) ["~NAME"]=> string(12) "Авторы" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["AUTHOR_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "25" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Авторы" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28264" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(779) "<p>Даниил И. Шмидт<sup>1</sup>, Иван Н. Гапоненко<sup>1</sup>, Никита Д. Ёлшин<sup>2</sup>, Ольга С. Епифановская<sup>1</sup>, Татьяна Н. Беловежец<sup>3</sup>, Андрей А. Горчаков<sup>3</sup>, Сергей В. Кулемзин<sup>3</sup>, Андрей М. Чекалов<sup>1</sup>, Елена В. Бабенко<sup>1</sup>, Альберт Р. Муслимов<sup>1</sup>, Владислав С. Сергеев<sup>1</sup>, Кирилл В. Лепик<sup>1</sup>, Александр Д. Кулагин<sup>1</sup></p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(611) "Даниил И. Шмидт1, Иван Н. Гапоненко1, Никита Д. Ёлшин2, Ольга С. Епифановская1, Татьяна Н. Беловежец3, Андрей А. Горчаков3, Сергей В. Кулемзин3, Андрей М. Чекалов1, Елена В. Бабенко1, Альберт Р. Муслимов1, Владислав С. Сергеев1, Кирилл В. Лепик1, Александр Д. Кулагин1
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Авторы" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["ORGANIZATION_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "26" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(22) "Организации" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28265" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(690) "<p><sup>1</sup> НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р. М. Горбачевой, Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И. П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия<br> <sup>2</sup> НИИ Гриппа им. А.А. Смородинцева, Санкт-Петербург, Россия<br> <sup>3</sup> Институт молекулярной и клеточной биологии, СО РАН, Новосибирск, Россия</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(630) "1 НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р. М. Горбачевой, Первый Санкт-Петербургский
государственный медицинский университет им. И. П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия
2 НИИ Гриппа
им. А.А. Смородинцева, Санкт-Петербург, Россия
3 Институт молекулярной и клеточной биологии, СО РАН,
Новосибирск, Россия
Т-клеточная терапия с использованием рекомбинантного химерного антигенного рецептора (CAR-T) стала выдающийся терапевтической опцией для лечения некоторых В-клеточных злокачественных новообразований. Однако, примерно у половины пациентов наблюдаются рецидивы. Важным механизмом устойчивости к CAR-T терапии являются уменьшение экспрессии антигена и истощение CAR-T продукта. Большинство биспецифических Т-клеточных антител (BsAbs) связывают белок CD3-эпсилон (CD3ε) на Т-клетках вместе с ассоциированным с опухолью антигеном. Использование CD3ε в качестве внеклеточного домена CAR позволяет задействовать данный рецептор в формировании иммунных синапсов как при взаимодейстии BsAbs с Т-клеточным рецептором. CAR-T-терапия обладает непренебрежимой токсичностью – вплоть до фатальных исходов у некоторых пациентов. Наш подход потенциально нацелен на снижение токсического воздействия CAR-T путем контроля путем контроля инфузии BsAbs, а подбор специфичности возможен путем изменения BsAbs. Кроме того, возможность переведения CAR-T клеток в неактивное состояние путем прекращения инфузии BsAbs предположительно устраняет истощение клеточного продукта [1].
Материалы и методы
кДНК внеклеточного домена (ВКД) гена CD3E была получена из мРНК мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC) здорового донора и клонирована в pIRES. Затем кДНК внеклеточный домен CD3E была вставлена в лентивирусную плазмиду pCDH, содержащую FMC63-CD8stalk-41bbz CAR с NGFR в качестве репортерного гена заменяя FMC63 (клон 7). Лентивирусные препараты получали с использованием клеток HEK293T и упаковывающих плазмид pMD2.G и psPAX2. Лентивирусный препарат титровали с использованием линии клеток HEK293. PBMC здорового донора выделяли с помощью центрифугирования в градиенте плотности фиколла. Клетки были посажены в лунку в концентрации 1-2*106 клеток/мл и активированы 0,1 мкг/мл anti-CD3 антителами (OKT3) с добавлением 50 ЕД/мл IL-2 в течение 3 дней. На 3-й день клетки были трансдуцированы лентивирусным вектором в течение 2 дней. На 5-8 день после активации с помощью проточной цитометрии клетки оценивали на экспрессию NGFR. На следующий день после определения процента NGFR-положительных клеток проводили тест на цитотоксичность: клеточную линию Raji, окрашенную CFSE, инкубировали с CAR-T-клетками в различных соотношениях в двух повторах с добавлением в различных концентрациях BsAbs (блинатумомаб или глофитамаб). Процент выживших клеток-мишеней (Raji) определяли методом проточной цитометрии через 4 или 24 часа. Цитотоксичность определяли по формуле: 100 – живые клетки/контрольные клетки живые (без эффекторов).
Результаты
Титр лентивируса составил 8×104/µL на клетках HEK293T. Эффективность трансдукции составила 30-90%. Цитотоксичность при инкубации 4 и 24 часа с блинатумомабом в концентрациях 0, 10, 100 и 200 нг/мл при соотношении эффектор:мишень (Э:М) – 0,3:1, 1:1, 3:1, 5:1 статистически значимо не отличалась от контроля. Цитотоксичность глофитамаба тестировали при концентрациях 0, 1, 10 пМ/л с соотношением (Э:М) 0,3: 1, 1: 1, 5: 1 в течение 24 часов. Наибольшая цитотоксичность была в соотношении (Э:М) 5:1, где CAR-T был более эффективным, чем нетрансдуцированные Т-клетки при концентрации глофитамаба 1 пМ/л (59% против 93%) и 10 пМ/л (74% против 96%).
Вывод
Новые CAR с внеклеточным доменом CD3E, перенаправляемые BsAbs (глофитамабом), активны против В-клеточной лимфомы in vitro, но при применении блинатумомаба подобного не замечено, что можно объяснить тем, что фрагмент OKT3, на котором основан блинатумомаб, распознает CD3ε только в качестве димера, но не мономера [2-4]. Следовательно, является оправданным создание CAR с внеклеточными доменами CD3epsilon/CD3gamma и CD3epsilon/CD3delta.
Ключевые слова
CAR-T, химерный антигенный рецептор, клеточная терапия, В-клеточные опухоли, биспецифические антитела.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["DOI"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "28" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2016-04-06 14:11:12" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(3) "DOI" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(3) "DOI" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28267" ["VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(3) "DOI" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["AUTHOR_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "37" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(6) "Author" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28268" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(594) "<p>Daniil I. Shmidt<sup>1</sup>, Ivan N. Gaponenko<sup>1</sup>, Nikita D. Yolshin<sup>2</sup>, Olga S. Epifanovskaya<sup>1</sup>, Tatyana N. Belovezhets<sup>3</sup>, Andrey A. Gorchakov<sup>3</sup>, Sergey V. Kulemzin<sup>3</sup>, Andrey M. Chekalov<sup>1</sup>, Elena V. Babenko<sup>1</sup>, Albert R. Muslimov<sup>1</sup>, Vladislav S. Sergeev<sup>1</sup>, Kirill V. Lepik<sup>1</sup>, Alexander D. Kulagin<sup>1</sup></p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(426) "Daniil I. Shmidt1, Ivan N. Gaponenko1, Nikita D. Yolshin2, Olga S. Epifanovskaya1, Tatyana N. Belovezhets3, Andrey A. Gorchakov3, Sergey V. Kulemzin3, Andrey M. Chekalov1, Elena V. Babenko1, Albert R. Muslimov1, Vladislav S. Sergeev1, Kirill V. Lepik1, Alexander D. Kulagin1
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(6) "Author" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["ORGANIZATION_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "38" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Organization" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28269" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(480) "<p><sup>1</sup> RM Gorbacheva Research Institute, Pavlov University, St. Petersburg, Russia<br> <sup>2</sup> Smorodintsev Research Institute of Influenza, St. Petersburg, Russia<br> <sup>3</sup> Institute of Molecular and Cellular Biology, SB RAS, Novosibirsk, Russia</p><br> <p><b>Correspondence:</b><br> Dr. Daniil I. Shmidt, e-mail: daniil.shmidt@yahoo.com, lepikkv@gmail.com</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(384) "1 RM Gorbacheva Research Institute, Pavlov University, St. Petersburg, Russia
2 Smorodintsev Research Institute of Influenza,
St. Petersburg, Russia
3 Institute of Molecular and Cellular Biology, SB RAS, Novosibirsk, Russia
Correspondence:
Dr. Daniil I. Shmidt, e-mail: daniil.shmidt@yahoo.com, lepikkv@gmail.com
Chimeric antigen receptor T cells (CAR-T) and bispecific antibody technologies (BsAbs) became a breakthrough in the therapy of relapsed/refractory B-cell malignancies. CAR-T cells possess not negligible toxicity that can be fatal in some patients, while their efficiency may be hampered by mechanisms of resistance, such as antigen escape and CAR-T exhaustion. Most of the BsAbs bind CD3 epsilon (CD3ε) protein on T-cells alongside with tumor-associated antigen, lacking important co-stimulatory signals present in CAR structure, which may limit their potential. Introducing CD3 epsilon as an extracellular portion of CAR allows to engage CAR in immune synapse formation using BsAbs. Our approach addresses limitations of both methods, combining potential for control of toxicity by controlling BsAbs infusion, ability to modify antigen-specificity by changing the BsAbs as well as enabling dual or multi-targeting. Moreover, the possibility of making CAR-T cells “rest” by stopping BsAbs infusion may presumably prevent their exhaustion [1].
Materials and methods
cDNA of extracellular domain (ECD) of CD3E gene was derived from healthy donor peripheral blood mononuclear cells (PBMC) mRNA and cloned to pIRES. Then CD3E ECD was inserted in pCDH lentiviral plasmid containing FMC63-CD8stalk-41bbz CAR with NGFR as reporter gene substituting FMC63 (clone 7). Lentiviral preparations were made using HEK293T cells and pMD2.G and psPAX2 packaging plasmids. Lentiviral preparation was titrated using HEK293 cell line. PBMCs of a healthy donor were separated using Ficoll density gradient centrifugation. Cells were plated at the density of 1-2*106 cells/ml and activated with 0.1 mcg/mL OKT3 antibody with 50 IE/mL of IL-2 for 3 days. On day 3 cells were transduced with lentiviral vector for 2 days. Cells were assessed for NGFR expression on day 5-8 post-activation using flow cytometry. On the next day after determining the percentage of NGFR-positive cells, cytotoxicity test was conducted. For cytotoxicity test Raji cell line stained with CFSE dye were plated with CAR-T cells at different effector:target (E:T) ratio in duplicates; BsAbs – blinatumomab or glofitamab – was added at different concentrations. Percentage of living target cells were determined by flow cytometry after 4 or 24 hours. Cytotoxicity was determined by the formula: 100 – cells alive/control cells alive (no effectors). Results. Lentiviral titer was 8×104/µL using HEK293T cells. Efficiency of T-cell transduction ranged from 30 to 90%. Cytotoxicity tests conducted for 4 and 24 hours with blinatumomab at concentrations 0, 10, 100 and 200 ng/mL at E:T ratio of 0.3:1, 1:1, 3:1, 5:1 did not reveal the difference of cytotoxicity from control T cells. Cytotoxicity with glofitamab was tested at concentrations 0, 1, 10 pM/L with E:T ratio of 0.3:1, 1:1, 5:1 for 24 hours. The most evident difference was seen in 5:1 E:T ratio with increase of cytotoxicity in CAR-T compared to untransduced T-cells at glofitamab concentration 1 pM/L (93% vs 59%) and 10 pM/L (96% vs 74%).
Conclusion
Novel chimeric antigen receptors with extracellular portion of CD3E redirected by bispecific antibody glofitamab, but not blinatumomab may have activity against B-cell lymphoma cells in vitro. These may be explained by the fact that OKT3 antibody fragment, on which blinatumomab is based, can’t recognize CD3E as monomer, only as a dimer [2-4]. Therefore, design of CARs with CD3epsilon/CD3gamma and CD3epsilon/CD3delta extracellular domains is warranted.
References
1. Weber EW, Parker KR, Sotillo E, et al. Transient rest restores functionality in exhausted CAR-T cells through epigenetic remodeling. Science. 2021.
2. Salmerón A, Sánchez-Madrid F, Ursa MA, Fresno M, Alarcón B. A conformational epitope expressed upon association of CD3-epsilon with either CD3-delta or CD3-gamma is the main target for recognition by anti-CD3 monoclonal antibodies. J Immunol. 1991.
3. Law CL, Hayden‐Ledbetter M, Buckwalter S, McNeill L, Nguyen H, Habecker P, Thorne BA, Dua R, Ledbetter JA. Expression and characterization of recombinant soluble human CD3 molecules: presentation of antigenic epitopes defined on the native TCR-CD3 complex. International Immunology, 2002.
4. Trinklein ND, Pham D, Schellenberger U, et al. Efficient tumor killing and minimal cytokine release with novel T-cell agonist bispecific antibodies. MAbs. 2019.
Keywords
CAR-T, chimeric antigen receptor, cell therapy, B-cell malignancies, bispecific antibodies.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["NAME_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "40" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:49:47" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(4) "Name" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "NAME_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28271" ["VALUE"]=> string(177) "GC-12. Combining bispecifics and CARs: novel design of chimeric antigen receptor with CD3E extracellular domain for redirecting antitumor specificity with bispecific antibodies " ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(177) "GC-12. Combining bispecifics and CARs: novel design of chimeric antigen receptor with CD3E extracellular domain for redirecting antitumor specificity with bispecific antibodies " ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(4) "Name" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["FULL_TEXT_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "42" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-07 20:29:18" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(23) "Полный текст" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(12) "FULL_TEXT_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(23) "Полный текст" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["PDF_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "43" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-09 16:05:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(7) "PDF RUS" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(6) "PDF_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "F" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(18) "doc, txt, rtf, pdf" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28272" ["VALUE"]=> string(4) "2649" ["DESCRIPTION"]=> NULL ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(4) "2649" ["~DESCRIPTION"]=> NULL ["~NAME"]=> string(7) "PDF RUS" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["PDF_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "44" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-09 16:05:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(7) "PDF ENG" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(6) "PDF_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "F" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(18) "doc, txt, rtf, pdf" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28273" ["VALUE"]=> string(4) "2650" ["DESCRIPTION"]=> NULL ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(4) "2650" ["~DESCRIPTION"]=> NULL ["~NAME"]=> string(7) "PDF ENG" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["NAME_LONG"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "45" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2023-04-13 00:55:00" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(72) "Название (для очень длинных заголовков)" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "NAME_LONG" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TYPE"]=> string(4) "HTML" ["TEXT"]=> string(0) "" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(80) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(72) "Название (для очень длинных заголовков)" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TYPE"]=> string(4) "HTML" ["TEXT"]=> string(0) "" } } } ["DISPLAY_PROPERTIES"]=> array(8) { ["AUTHOR_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "37" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(6) "Author" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28268" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(594) "<p>Daniil I. Shmidt<sup>1</sup>, Ivan N. Gaponenko<sup>1</sup>, Nikita D. Yolshin<sup>2</sup>, Olga S. Epifanovskaya<sup>1</sup>, Tatyana N. Belovezhets<sup>3</sup>, Andrey A. Gorchakov<sup>3</sup>, Sergey V. Kulemzin<sup>3</sup>, Andrey M. Chekalov<sup>1</sup>, Elena V. Babenko<sup>1</sup>, Albert R. Muslimov<sup>1</sup>, Vladislav S. Sergeev<sup>1</sup>, Kirill V. Lepik<sup>1</sup>, Alexander D. Kulagin<sup>1</sup></p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(426) "Daniil I. Shmidt1, Ivan N. Gaponenko1, Nikita D. Yolshin2, Olga S. Epifanovskaya1, Tatyana N. Belovezhets3, Andrey A. Gorchakov3, Sergey V. Kulemzin3, Andrey M. Chekalov1, Elena V. Babenko1, Albert R. Muslimov1, Vladislav S. Sergeev1, Kirill V. Lepik1, Alexander D. Kulagin1
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(6) "Author" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(426) "Daniil I. Shmidt1, Ivan N. Gaponenko1, Nikita D. Yolshin2, Olga S. Epifanovskaya1, Tatyana N. Belovezhets3, Andrey A. Gorchakov3, Sergey V. Kulemzin3, Andrey M. Chekalov1, Elena V. Babenko1, Albert R. Muslimov1, Vladislav S. Sergeev1, Kirill V. Lepik1, Alexander D. Kulagin1
" } ["SUMMARY_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "39" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28270" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(5174) "<p style="text-align: justify;">Chimeric antigen receptor T cells (CAR-T) and bispecific antibody technologies (BsAbs) became a breakthrough in the therapy of relapsed/refractory B-cell malignancies. CAR-T cells possess not negligible toxicity that can be fatal in some patients, while their efficiency may be hampered by mechanisms of resistance, such as antigen escape and CAR-T exhaustion. Most of the BsAbs bind CD3 epsilon (CD3ε) protein on T-cells alongside with tumor-associated antigen, lacking important co-stimulatory signals present in CAR structure, which may limit their potential. Introducing CD3 epsilon as an extracellular portion of CAR allows to engage CAR in immune synapse formation using BsAbs. Our approach addresses limitations of both methods, combining potential for control of toxicity by controlling BsAbs infusion, ability to modify antigen-specificity by changing the BsAbs as well as enabling dual or multi-targeting. Moreover, the possibility of making CAR-T cells “rest” by stopping BsAbs infusion may presumably prevent their exhaustion [1].</p> <h3>Materials and methods</h3> <p style="text-align: justify;">cDNA of extracellular domain (ECD) of CD3E gene was derived from healthy donor peripheral blood mononuclear cells (PBMC) mRNA and cloned to pIRES. Then CD3E ECD was inserted in pCDH lentiviral plasmid containing FMC63-CD8stalk-41bbz CAR with NGFR as reporter gene substituting FMC63 (clone 7). Lentiviral preparations were made using HEK293T cells and pMD2.G and psPAX2 packaging plasmids. Lentiviral preparation was titrated using HEK293 cell line. PBMCs of a healthy donor were separated using Ficoll density gradient centrifugation. Cells were plated at the density of 1-2*10<sup>6</sup> cells/ml and activated with 0.1 mcg/mL OKT3 antibody with 50 IE/mL of IL-2 for 3 days. On day 3 cells were transduced with lentiviral vector for 2 days. Cells were assessed for NGFR expression on day 5-8 post-activation using flow cytometry. On the next day after determining the percentage of NGFR-positive cells, cytotoxicity test was conducted. For cytotoxicity test Raji cell line stained with CFSE dye were plated with CAR-T cells at different effector:target (E:T) ratio in duplicates; BsAbs – blinatumomab or glofitamab – was added at different concentrations. Percentage of living target cells were determined by flow cytometry after 4 or 24 hours. Cytotoxicity was determined by the formula: 100 – cells alive/control cells alive (no effectors). Results. Lentiviral titer was 8×10<sup>4</sup>/µL using HEK293T cells. Efficiency of T-cell transduction ranged from 30 to 90%. Cytotoxicity tests conducted for 4 and 24 hours with blinatumomab at concentrations 0, 10, 100 and 200 ng/mL at E:T ratio of 0.3:1, 1:1, 3:1, 5:1 did not reveal the difference of cytotoxicity from control T cells. Cytotoxicity with glofitamab was tested at concentrations 0, 1, 10 pM/L with E:T ratio of 0.3:1, 1:1, 5:1 for 24 hours. The most evident difference was seen in 5:1 E:T ratio with increase of cytotoxicity in CAR-T compared to untransduced T-cells at glofitamab concentration 1 pM/L (93% <i>vs</i> 59%) and 10 pM/L (96% <i>vs</i> 74%).</p> <h3>Conclusion</h3> <p style="text-align: justify;">Novel chimeric antigen receptors with extracellular portion of CD3E redirected by bispecific antibody glofitamab, but not blinatumomab may have activity against B-cell lymphoma cells <i>in vitro</i>. These may be explained by the fact that OKT3 antibody fragment, on which blinatumomab is based, can’t recognize CD3E as monomer, only as a dimer [2-4]. Therefore, design of CARs with CD3epsilon/CD3gamma and CD3epsilon/CD3delta extracellular domains is warranted.</p> <h3>References</h3> <p style="text-align: justify;">1. Weber EW, Parker KR, Sotillo E, et al. Transient rest restores functionality in exhausted CAR-T cells through epigenetic remodeling. Science. 2021.</p> <p style="text-align: justify;">2. Salmerón A, Sánchez-Madrid F, Ursa MA, Fresno M, Alarcón B. A conformational epitope expressed upon association of CD3-epsilon with either CD3-delta or CD3-gamma is the main target for recognition by anti-CD3 monoclonal antibodies. J Immunol. 1991.</p> <p style="text-align: justify;">3. Law CL, Hayden‐Ledbetter M, Buckwalter S, McNeill L, Nguyen H, Habecker P, Thorne BA, Dua R, Ledbetter JA. Expression and characterization of recombinant soluble human CD3 molecules: presentation of antigenic epitopes defined on the native TCR-CD3 complex. International Immunology, 2002.</p> <p style="text-align: justify;">4. Trinklein ND, Pham D, Schellenberger U, et al. Efficient tumor killing and minimal cytokine release with novel T-cell agonist bispecific antibodies. MAbs. 2019.</p> <h2>Keywords</h2> <p style="text-align: justify;">CAR-T, chimeric antigen receptor, cell therapy, B-cell malignancies, bispecific antibodies.</p> " ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(4890) "Chimeric antigen receptor T cells (CAR-T) and bispecific antibody technologies (BsAbs) became a breakthrough in the therapy of relapsed/refractory B-cell malignancies. CAR-T cells possess not negligible toxicity that can be fatal in some patients, while their efficiency may be hampered by mechanisms of resistance, such as antigen escape and CAR-T exhaustion. Most of the BsAbs bind CD3 epsilon (CD3ε) protein on T-cells alongside with tumor-associated antigen, lacking important co-stimulatory signals present in CAR structure, which may limit their potential. Introducing CD3 epsilon as an extracellular portion of CAR allows to engage CAR in immune synapse formation using BsAbs. Our approach addresses limitations of both methods, combining potential for control of toxicity by controlling BsAbs infusion, ability to modify antigen-specificity by changing the BsAbs as well as enabling dual or multi-targeting. Moreover, the possibility of making CAR-T cells “rest” by stopping BsAbs infusion may presumably prevent their exhaustion [1].
Materials and methods
cDNA of extracellular domain (ECD) of CD3E gene was derived from healthy donor peripheral blood mononuclear cells (PBMC) mRNA and cloned to pIRES. Then CD3E ECD was inserted in pCDH lentiviral plasmid containing FMC63-CD8stalk-41bbz CAR with NGFR as reporter gene substituting FMC63 (clone 7). Lentiviral preparations were made using HEK293T cells and pMD2.G and psPAX2 packaging plasmids. Lentiviral preparation was titrated using HEK293 cell line. PBMCs of a healthy donor were separated using Ficoll density gradient centrifugation. Cells were plated at the density of 1-2*106 cells/ml and activated with 0.1 mcg/mL OKT3 antibody with 50 IE/mL of IL-2 for 3 days. On day 3 cells were transduced with lentiviral vector for 2 days. Cells were assessed for NGFR expression on day 5-8 post-activation using flow cytometry. On the next day after determining the percentage of NGFR-positive cells, cytotoxicity test was conducted. For cytotoxicity test Raji cell line stained with CFSE dye were plated with CAR-T cells at different effector:target (E:T) ratio in duplicates; BsAbs – blinatumomab or glofitamab – was added at different concentrations. Percentage of living target cells were determined by flow cytometry after 4 or 24 hours. Cytotoxicity was determined by the formula: 100 – cells alive/control cells alive (no effectors). Results. Lentiviral titer was 8×104/µL using HEK293T cells. Efficiency of T-cell transduction ranged from 30 to 90%. Cytotoxicity tests conducted for 4 and 24 hours with blinatumomab at concentrations 0, 10, 100 and 200 ng/mL at E:T ratio of 0.3:1, 1:1, 3:1, 5:1 did not reveal the difference of cytotoxicity from control T cells. Cytotoxicity with glofitamab was tested at concentrations 0, 1, 10 pM/L with E:T ratio of 0.3:1, 1:1, 5:1 for 24 hours. The most evident difference was seen in 5:1 E:T ratio with increase of cytotoxicity in CAR-T compared to untransduced T-cells at glofitamab concentration 1 pM/L (93% vs 59%) and 10 pM/L (96% vs 74%).
Conclusion
Novel chimeric antigen receptors with extracellular portion of CD3E redirected by bispecific antibody glofitamab, but not blinatumomab may have activity against B-cell lymphoma cells in vitro. These may be explained by the fact that OKT3 antibody fragment, on which blinatumomab is based, can’t recognize CD3E as monomer, only as a dimer [2-4]. Therefore, design of CARs with CD3epsilon/CD3gamma and CD3epsilon/CD3delta extracellular domains is warranted.
References
1. Weber EW, Parker KR, Sotillo E, et al. Transient rest restores functionality in exhausted CAR-T cells through epigenetic remodeling. Science. 2021.
2. Salmerón A, Sánchez-Madrid F, Ursa MA, Fresno M, Alarcón B. A conformational epitope expressed upon association of CD3-epsilon with either CD3-delta or CD3-gamma is the main target for recognition by anti-CD3 monoclonal antibodies. J Immunol. 1991.
3. Law CL, Hayden‐Ledbetter M, Buckwalter S, McNeill L, Nguyen H, Habecker P, Thorne BA, Dua R, Ledbetter JA. Expression and characterization of recombinant soluble human CD3 molecules: presentation of antigenic epitopes defined on the native TCR-CD3 complex. International Immunology, 2002.
4. Trinklein ND, Pham D, Schellenberger U, et al. Efficient tumor killing and minimal cytokine release with novel T-cell agonist bispecific antibodies. MAbs. 2019.
Keywords
CAR-T, chimeric antigen receptor, cell therapy, B-cell malignancies, bispecific antibodies.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(4890) "Chimeric antigen receptor T cells (CAR-T) and bispecific antibody technologies (BsAbs) became a breakthrough in the therapy of relapsed/refractory B-cell malignancies. CAR-T cells possess not negligible toxicity that can be fatal in some patients, while their efficiency may be hampered by mechanisms of resistance, such as antigen escape and CAR-T exhaustion. Most of the BsAbs bind CD3 epsilon (CD3ε) protein on T-cells alongside with tumor-associated antigen, lacking important co-stimulatory signals present in CAR structure, which may limit their potential. Introducing CD3 epsilon as an extracellular portion of CAR allows to engage CAR in immune synapse formation using BsAbs. Our approach addresses limitations of both methods, combining potential for control of toxicity by controlling BsAbs infusion, ability to modify antigen-specificity by changing the BsAbs as well as enabling dual or multi-targeting. Moreover, the possibility of making CAR-T cells “rest” by stopping BsAbs infusion may presumably prevent their exhaustion [1].
Materials and methods
cDNA of extracellular domain (ECD) of CD3E gene was derived from healthy donor peripheral blood mononuclear cells (PBMC) mRNA and cloned to pIRES. Then CD3E ECD was inserted in pCDH lentiviral plasmid containing FMC63-CD8stalk-41bbz CAR with NGFR as reporter gene substituting FMC63 (clone 7). Lentiviral preparations were made using HEK293T cells and pMD2.G and psPAX2 packaging plasmids. Lentiviral preparation was titrated using HEK293 cell line. PBMCs of a healthy donor were separated using Ficoll density gradient centrifugation. Cells were plated at the density of 1-2*106 cells/ml and activated with 0.1 mcg/mL OKT3 antibody with 50 IE/mL of IL-2 for 3 days. On day 3 cells were transduced with lentiviral vector for 2 days. Cells were assessed for NGFR expression on day 5-8 post-activation using flow cytometry. On the next day after determining the percentage of NGFR-positive cells, cytotoxicity test was conducted. For cytotoxicity test Raji cell line stained with CFSE dye were plated with CAR-T cells at different effector:target (E:T) ratio in duplicates; BsAbs – blinatumomab or glofitamab – was added at different concentrations. Percentage of living target cells were determined by flow cytometry after 4 or 24 hours. Cytotoxicity was determined by the formula: 100 – cells alive/control cells alive (no effectors). Results. Lentiviral titer was 8×104/µL using HEK293T cells. Efficiency of T-cell transduction ranged from 30 to 90%. Cytotoxicity tests conducted for 4 and 24 hours with blinatumomab at concentrations 0, 10, 100 and 200 ng/mL at E:T ratio of 0.3:1, 1:1, 3:1, 5:1 did not reveal the difference of cytotoxicity from control T cells. Cytotoxicity with glofitamab was tested at concentrations 0, 1, 10 pM/L with E:T ratio of 0.3:1, 1:1, 5:1 for 24 hours. The most evident difference was seen in 5:1 E:T ratio with increase of cytotoxicity in CAR-T compared to untransduced T-cells at glofitamab concentration 1 pM/L (93% vs 59%) and 10 pM/L (96% vs 74%).
Conclusion
Novel chimeric antigen receptors with extracellular portion of CD3E redirected by bispecific antibody glofitamab, but not blinatumomab may have activity against B-cell lymphoma cells in vitro. These may be explained by the fact that OKT3 antibody fragment, on which blinatumomab is based, can’t recognize CD3E as monomer, only as a dimer [2-4]. Therefore, design of CARs with CD3epsilon/CD3gamma and CD3epsilon/CD3delta extracellular domains is warranted.
References
1. Weber EW, Parker KR, Sotillo E, et al. Transient rest restores functionality in exhausted CAR-T cells through epigenetic remodeling. Science. 2021.
2. Salmerón A, Sánchez-Madrid F, Ursa MA, Fresno M, Alarcón B. A conformational epitope expressed upon association of CD3-epsilon with either CD3-delta or CD3-gamma is the main target for recognition by anti-CD3 monoclonal antibodies. J Immunol. 1991.
3. Law CL, Hayden‐Ledbetter M, Buckwalter S, McNeill L, Nguyen H, Habecker P, Thorne BA, Dua R, Ledbetter JA. Expression and characterization of recombinant soluble human CD3 molecules: presentation of antigenic epitopes defined on the native TCR-CD3 complex. International Immunology, 2002.
4. Trinklein ND, Pham D, Schellenberger U, et al. Efficient tumor killing and minimal cytokine release with novel T-cell agonist bispecific antibodies. MAbs. 2019.
Keywords
CAR-T, chimeric antigen receptor, cell therapy, B-cell malignancies, bispecific antibodies.
" } ["DOI"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "28" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2016-04-06 14:11:12" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(3) "DOI" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(3) "DOI" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28267" ["VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(3) "DOI" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["DISPLAY_VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" } ["NAME_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "40" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:49:47" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(4) "Name" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "NAME_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28271" ["VALUE"]=> string(177) "GC-12. Combining bispecifics and CARs: novel design of chimeric antigen receptor with CD3E extracellular domain for redirecting antitumor specificity with bispecific antibodies " ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(177) "GC-12. Combining bispecifics and CARs: novel design of chimeric antigen receptor with CD3E extracellular domain for redirecting antitumor specificity with bispecific antibodies " ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(4) "Name" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["DISPLAY_VALUE"]=> string(177) "GC-12. Combining bispecifics and CARs: novel design of chimeric antigen receptor with CD3E extracellular domain for redirecting antitumor specificity with bispecific antibodies " } ["ORGANIZATION_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "38" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Organization" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28269" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(480) "<p><sup>1</sup> RM Gorbacheva Research Institute, Pavlov University, St. Petersburg, Russia<br> <sup>2</sup> Smorodintsev Research Institute of Influenza, St. Petersburg, Russia<br> <sup>3</sup> Institute of Molecular and Cellular Biology, SB RAS, Novosibirsk, Russia</p><br> <p><b>Correspondence:</b><br> Dr. Daniil I. Shmidt, e-mail: daniil.shmidt@yahoo.com, lepikkv@gmail.com</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(384) "1 RM Gorbacheva Research Institute, Pavlov University, St. Petersburg, Russia
2 Smorodintsev Research Institute of Influenza,
St. Petersburg, Russia
3 Institute of Molecular and Cellular Biology, SB RAS, Novosibirsk, Russia
Correspondence:
Dr. Daniil I. Shmidt, e-mail: daniil.shmidt@yahoo.com, lepikkv@gmail.com
1 RM Gorbacheva Research Institute, Pavlov University, St. Petersburg, Russia
2 Smorodintsev Research Institute of Influenza,
St. Petersburg, Russia
3 Institute of Molecular and Cellular Biology, SB RAS, Novosibirsk, Russia
Correspondence:
Dr. Daniil I. Shmidt, e-mail: daniil.shmidt@yahoo.com, lepikkv@gmail.com
Даниил И. Шмидт1, Иван Н. Гапоненко1, Никита Д. Ёлшин2, Ольга С. Епифановская1, Татьяна Н. Беловежец3, Андрей А. Горчаков3, Сергей В. Кулемзин3, Андрей М. Чекалов1, Елена В. Бабенко1, Альберт Р. Муслимов1, Владислав С. Сергеев1, Кирилл В. Лепик1, Александр Д. Кулагин1
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Авторы" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(611) "Даниил И. Шмидт1, Иван Н. Гапоненко1, Никита Д. Ёлшин2, Ольга С. Епифановская1, Татьяна Н. Беловежец3, Андрей А. Горчаков3, Сергей В. Кулемзин3, Андрей М. Чекалов1, Елена В. Бабенко1, Альберт Р. Муслимов1, Владислав С. Сергеев1, Кирилл В. Лепик1, Александр Д. Кулагин1
" } ["SUMMARY_RU"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "27" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28266" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(7099) "<p style="text-align: justify;">Т-клеточная терапия с использованием рекомбинантного химерного антигенного рецептора (CAR-T) стала выдающийся терапевтической опцией для лечения некоторых В-клеточных злокачественных новообразований. Однако, примерно у половины пациентов наблюдаются рецидивы. Важным механизмом устойчивости к CAR-T терапии являются уменьшение экспрессии антигена и истощение CAR-T продукта. Большинство биспецифических Т-клеточных антител (BsAbs) связывают белок CD3-эпсилон (CD3ε) на Т-клетках вместе с ассоциированным с опухолью антигеном. Использование CD3ε в качестве внеклеточного домена CAR позволяет задействовать данный рецептор в формировании иммунных синапсов как при взаимодейстии BsAbs с Т-клеточным рецептором. CAR-T-терапия обладает непренебрежимой токсичностью – вплоть до фатальных исходов у некоторых пациентов. Наш подход потенциально нацелен на снижение токсического воздействия CAR-T путем контроля путем контроля инфузии BsAbs, а подбор специфичности возможен путем изменения BsAbs. Кроме того, возможность переведения CAR-T клеток в неактивное состояние путем прекращения инфузии BsAbs предположительно устраняет истощение клеточного продукта [1].</p> <h3>Материалы и методы</h3> <p style="text-align: justify;">кДНК внеклеточного домена (ВКД) гена CD3E была получена из мРНК мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC) здорового донора и клонирована в pIRES. Затем кДНК внеклеточный домен CD3E была вставлена в лентивирусную плазмиду pCDH, содержащую FMC63-CD8stalk-41bbz CAR с NGFR в качестве репортерного гена заменяя FMC63 (клон 7). Лентивирусные препараты получали с использованием клеток HEK293T и упаковывающих плазмид pMD2.G и psPAX2. Лентивирусный препарат титровали с использованием линии клеток HEK293. PBMC здорового донора выделяли с помощью центрифугирования в градиенте плотности фиколла. Клетки были посажены в лунку в концентрации 1-2*10<sup>6</sup> клеток/мл и активированы 0,1 мкг/мл anti-CD3 антителами (OKT3) с добавлением 50 ЕД/мл IL-2 в течение 3 дней. На 3-й день клетки были трансдуцированы лентивирусным вектором в течение 2 дней. На 5-8 день после активации с помощью проточной цитометрии клетки оценивали на экспрессию NGFR. На следующий день после определения процента NGFR-положительных клеток проводили тест на цитотоксичность: клеточную линию Raji, окрашенную CFSE, инкубировали с CAR-T-клетками в различных соотношениях в двух повторах с добавлением в различных концентрациях BsAbs (блинатумомаб или глофитамаб). Процент выживших клеток-мишеней (Raji) определяли методом проточной цитометрии через 4 или 24 часа. Цитотоксичность определяли по формуле: 100 – живые клетки/контрольные клетки живые (без эффекторов). </p> <h3>Результаты</h3> <p style="text-align: justify;">Титр лентивируса составил 8×10<sup>4</sup>/µL на клетках HEK293T. Эффективность трансдукции составила 30-90%. Цитотоксичность при инкубации 4 и 24 часа с блинатумомабом в концентрациях 0, 10, 100 и 200 нг/мл при соотношении эффектор:мишень (Э:М) – 0,3:1, 1:1, 3:1, 5:1 статистически значимо не отличалась от контроля. Цитотоксичность глофитамаба тестировали при концентрациях 0, 1, 10 пМ/л с соотношением (Э:М) 0,3: 1, 1: 1, 5: 1 в течение 24 часов. Наибольшая цитотоксичность была в соотношении (Э:М) 5:1, где CAR-T был более эффективным, чем нетрансдуцированные Т-клетки при концентрации глофитамаба 1 пМ/л (59% против 93%) и 10 пМ/л (74% против 96%).</p> <h3>Вывод</h3> <p style="text-align: justify;">Новые CAR с внеклеточным доменом CD3E, перенаправляемые BsAbs (глофитамабом), активны против В-клеточной лимфомы <i>in vitro</i>, но при применении блинатумомаба подобного не замечено, что можно объяснить тем, что фрагмент OKT3, на котором основан блинатумомаб, распознает CD3ε только в качестве димера, но не мономера [2-4]. Следовательно, является оправданным создание CAR с внеклеточными доменами CD3epsilon/CD3gamma и CD3epsilon/CD3delta.</p> <h2>Ключевые слова</h2> <p style="text-align: justify;">CAR-T, химерный антигенный рецептор, клеточная терапия, В-клеточные опухоли, биспецифические антитела.</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(6905) "Т-клеточная терапия с использованием рекомбинантного химерного антигенного рецептора (CAR-T) стала выдающийся терапевтической опцией для лечения некоторых В-клеточных злокачественных новообразований. Однако, примерно у половины пациентов наблюдаются рецидивы. Важным механизмом устойчивости к CAR-T терапии являются уменьшение экспрессии антигена и истощение CAR-T продукта. Большинство биспецифических Т-клеточных антител (BsAbs) связывают белок CD3-эпсилон (CD3ε) на Т-клетках вместе с ассоциированным с опухолью антигеном. Использование CD3ε в качестве внеклеточного домена CAR позволяет задействовать данный рецептор в формировании иммунных синапсов как при взаимодейстии BsAbs с Т-клеточным рецептором. CAR-T-терапия обладает непренебрежимой токсичностью – вплоть до фатальных исходов у некоторых пациентов. Наш подход потенциально нацелен на снижение токсического воздействия CAR-T путем контроля путем контроля инфузии BsAbs, а подбор специфичности возможен путем изменения BsAbs. Кроме того, возможность переведения CAR-T клеток в неактивное состояние путем прекращения инфузии BsAbs предположительно устраняет истощение клеточного продукта [1].
Материалы и методы
кДНК внеклеточного домена (ВКД) гена CD3E была получена из мРНК мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC) здорового донора и клонирована в pIRES. Затем кДНК внеклеточный домен CD3E была вставлена в лентивирусную плазмиду pCDH, содержащую FMC63-CD8stalk-41bbz CAR с NGFR в качестве репортерного гена заменяя FMC63 (клон 7). Лентивирусные препараты получали с использованием клеток HEK293T и упаковывающих плазмид pMD2.G и psPAX2. Лентивирусный препарат титровали с использованием линии клеток HEK293. PBMC здорового донора выделяли с помощью центрифугирования в градиенте плотности фиколла. Клетки были посажены в лунку в концентрации 1-2*106 клеток/мл и активированы 0,1 мкг/мл anti-CD3 антителами (OKT3) с добавлением 50 ЕД/мл IL-2 в течение 3 дней. На 3-й день клетки были трансдуцированы лентивирусным вектором в течение 2 дней. На 5-8 день после активации с помощью проточной цитометрии клетки оценивали на экспрессию NGFR. На следующий день после определения процента NGFR-положительных клеток проводили тест на цитотоксичность: клеточную линию Raji, окрашенную CFSE, инкубировали с CAR-T-клетками в различных соотношениях в двух повторах с добавлением в различных концентрациях BsAbs (блинатумомаб или глофитамаб). Процент выживших клеток-мишеней (Raji) определяли методом проточной цитометрии через 4 или 24 часа. Цитотоксичность определяли по формуле: 100 – живые клетки/контрольные клетки живые (без эффекторов).
Результаты
Титр лентивируса составил 8×104/µL на клетках HEK293T. Эффективность трансдукции составила 30-90%. Цитотоксичность при инкубации 4 и 24 часа с блинатумомабом в концентрациях 0, 10, 100 и 200 нг/мл при соотношении эффектор:мишень (Э:М) – 0,3:1, 1:1, 3:1, 5:1 статистически значимо не отличалась от контроля. Цитотоксичность глофитамаба тестировали при концентрациях 0, 1, 10 пМ/л с соотношением (Э:М) 0,3: 1, 1: 1, 5: 1 в течение 24 часов. Наибольшая цитотоксичность была в соотношении (Э:М) 5:1, где CAR-T был более эффективным, чем нетрансдуцированные Т-клетки при концентрации глофитамаба 1 пМ/л (59% против 93%) и 10 пМ/л (74% против 96%).
Вывод
Новые CAR с внеклеточным доменом CD3E, перенаправляемые BsAbs (глофитамабом), активны против В-клеточной лимфомы in vitro, но при применении блинатумомаба подобного не замечено, что можно объяснить тем, что фрагмент OKT3, на котором основан блинатумомаб, распознает CD3ε только в качестве димера, но не мономера [2-4]. Следовательно, является оправданным создание CAR с внеклеточными доменами CD3epsilon/CD3gamma и CD3epsilon/CD3delta.
Ключевые слова
CAR-T, химерный антигенный рецептор, клеточная терапия, В-клеточные опухоли, биспецифические антитела.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(6905) "Т-клеточная терапия с использованием рекомбинантного химерного антигенного рецептора (CAR-T) стала выдающийся терапевтической опцией для лечения некоторых В-клеточных злокачественных новообразований. Однако, примерно у половины пациентов наблюдаются рецидивы. Важным механизмом устойчивости к CAR-T терапии являются уменьшение экспрессии антигена и истощение CAR-T продукта. Большинство биспецифических Т-клеточных антител (BsAbs) связывают белок CD3-эпсилон (CD3ε) на Т-клетках вместе с ассоциированным с опухолью антигеном. Использование CD3ε в качестве внеклеточного домена CAR позволяет задействовать данный рецептор в формировании иммунных синапсов как при взаимодейстии BsAbs с Т-клеточным рецептором. CAR-T-терапия обладает непренебрежимой токсичностью – вплоть до фатальных исходов у некоторых пациентов. Наш подход потенциально нацелен на снижение токсического воздействия CAR-T путем контроля путем контроля инфузии BsAbs, а подбор специфичности возможен путем изменения BsAbs. Кроме того, возможность переведения CAR-T клеток в неактивное состояние путем прекращения инфузии BsAbs предположительно устраняет истощение клеточного продукта [1].
Материалы и методы
кДНК внеклеточного домена (ВКД) гена CD3E была получена из мРНК мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC) здорового донора и клонирована в pIRES. Затем кДНК внеклеточный домен CD3E была вставлена в лентивирусную плазмиду pCDH, содержащую FMC63-CD8stalk-41bbz CAR с NGFR в качестве репортерного гена заменяя FMC63 (клон 7). Лентивирусные препараты получали с использованием клеток HEK293T и упаковывающих плазмид pMD2.G и psPAX2. Лентивирусный препарат титровали с использованием линии клеток HEK293. PBMC здорового донора выделяли с помощью центрифугирования в градиенте плотности фиколла. Клетки были посажены в лунку в концентрации 1-2*106 клеток/мл и активированы 0,1 мкг/мл anti-CD3 антителами (OKT3) с добавлением 50 ЕД/мл IL-2 в течение 3 дней. На 3-й день клетки были трансдуцированы лентивирусным вектором в течение 2 дней. На 5-8 день после активации с помощью проточной цитометрии клетки оценивали на экспрессию NGFR. На следующий день после определения процента NGFR-положительных клеток проводили тест на цитотоксичность: клеточную линию Raji, окрашенную CFSE, инкубировали с CAR-T-клетками в различных соотношениях в двух повторах с добавлением в различных концентрациях BsAbs (блинатумомаб или глофитамаб). Процент выживших клеток-мишеней (Raji) определяли методом проточной цитометрии через 4 или 24 часа. Цитотоксичность определяли по формуле: 100 – живые клетки/контрольные клетки живые (без эффекторов).
Результаты
Титр лентивируса составил 8×104/µL на клетках HEK293T. Эффективность трансдукции составила 30-90%. Цитотоксичность при инкубации 4 и 24 часа с блинатумомабом в концентрациях 0, 10, 100 и 200 нг/мл при соотношении эффектор:мишень (Э:М) – 0,3:1, 1:1, 3:1, 5:1 статистически значимо не отличалась от контроля. Цитотоксичность глофитамаба тестировали при концентрациях 0, 1, 10 пМ/л с соотношением (Э:М) 0,3: 1, 1: 1, 5: 1 в течение 24 часов. Наибольшая цитотоксичность была в соотношении (Э:М) 5:1, где CAR-T был более эффективным, чем нетрансдуцированные Т-клетки при концентрации глофитамаба 1 пМ/л (59% против 93%) и 10 пМ/л (74% против 96%).
Вывод
Новые CAR с внеклеточным доменом CD3E, перенаправляемые BsAbs (глофитамабом), активны против В-клеточной лимфомы in vitro, но при применении блинатумомаба подобного не замечено, что можно объяснить тем, что фрагмент OKT3, на котором основан блинатумомаб, распознает CD3ε только в качестве димера, но не мономера [2-4]. Следовательно, является оправданным создание CAR с внеклеточными доменами CD3epsilon/CD3gamma и CD3epsilon/CD3delta.
Ключевые слова
CAR-T, химерный антигенный рецептор, клеточная терапия, В-клеточные опухоли, биспецифические антитела.
" } ["ORGANIZATION_RU"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "26" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(22) "Организации" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28265" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(690) "<p><sup>1</sup> НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р. М. Горбачевой, Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И. П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия<br> <sup>2</sup> НИИ Гриппа им. А.А. Смородинцева, Санкт-Петербург, Россия<br> <sup>3</sup> Институт молекулярной и клеточной биологии, СО РАН, Новосибирск, Россия</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(630) "1 НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р. М. Горбачевой, Первый Санкт-Петербургский
государственный медицинский университет им. И. П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия
2 НИИ Гриппа
им. А.А. Смородинцева, Санкт-Петербург, Россия
3 Институт молекулярной и клеточной биологии, СО РАН,
Новосибирск, Россия
1 НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р. М. Горбачевой, Первый Санкт-Петербургский
государственный медицинский университет им. И. П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия
2 НИИ Гриппа
им. А.А. Смородинцева, Санкт-Петербург, Россия
3 Институт молекулярной и клеточной биологии, СО РАН,
Новосибирск, Россия
Ирина А. Сидорова, Кирилл В. Лепик, Альберт Р. Муслимов, М. А. Трофимов, Ольга С. Епифановская, Владислав С. Сергеев, Александр Д. Кулагин
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Авторы" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["ORGANIZATION_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "26" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(22) "Организации" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28275" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(358) "<p>НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р. М. Горбачевой, Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И. П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(346) "НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р. М. Горбачевой, Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И. П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(22) "Организации" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["SUMMARY_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "27" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28276" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(6279) "<p style="text-align: justify;"> Криоконсервация клеточного материала является необходимым этапом при ведении клеточных линий, а так же при создании биомедицинских клеточных продуктов (БМКП). В настоящее время актуальной задачей является устранение компонентов ксеногенного происхождения из сред для криоконсервации клеток, входящих в состав БМКП. Целью данного исследования является сравнение различных параметров криоконсервации культур и влияние их на жизнеспособность и пролиферативную активность клеток. </p> <h3>Материалы и методы</h3> <p style="text-align: justify;"> Исследование проводилось на клеточных линии К 562 и культуре первичных мезенхимальных стромальных клеток мыши (mMSC). В исследование включены 5 групп, различающихся по составу среды для криоконсервации: a) стандартные условия – полная среда (RPMI/®-MEM+10% FBS)+10%DMSO с использованием криоконтейнера (Mr. Frosty, Nalgene, США), б) полная среда+10%DMSO без использования криоконтейнера, в) коммерчески доступная среда CryoStor® CS10 (Stem Cell Technologies, США), г) раствор SSP+ (MacoPharma, Франция) с 10% DMSO, д) негативный контроль полная среда без добавления DMSO. Каждый образец из группы исследовался в трех повторах, подвергался заморозке в течении 7 дней при температуре -80°С, в трех независимых экспериментах. После разморозки производилась оценка жизнеспособности клеток методом проточной цитофлуориметрии с добавлением витального красителя 7AAD. Проведен анализ динамики пролиферативной активности образца клеток числом 1×10^4 в исследуемых группах спектрофотометрическим методом с использованием витального красителя alamar blue через 24, 72 и 168 ч. Статистическое сравнение групп проводилось методом Мана-Уитни. </p> <h3>Результаты</h3> <p style="text-align: justify;"> При оценке жизнеспособности клеточной линии К562 после разморозки, медиана доли 7-AAD+ клеток составила в группе а) 1,5% (1,2-2,1), группе б) 1,6% (1,1-1,8) группе в) 1,4% (1,2-1,9), группе г) 1,4% (1,1-1,8), группе д) 4,5% (2,7-5,6). При сравнении показателей жизнеспособности не было выявлено различий между условиями а, б, в, г. Перечисленные условия обладали статистически значимым преимуществом по сравнению с негативным контролем (д) (p=0,02). При оценке жизнеспособности клеток mMSC медиана доли 7-AAD+ клеток составила в группе а) 43,8% (16-62), б) 46,0% (22-65), в) 30,2% (17-46), г) 19,7% (16-26), д) 90,1% (86-97). При сравнении выявлено статистически значимое преимущество условий а, б, в, г по сравнению с контролем д (p<0,001). Выявлено преимущество среды на основе SSP+ по сравнению с остальными условиями консервации (p<0,05). При оценке пролиферативной активности клеточной линии К562 отмечалось увеличение медианы значения интенсивности флюоресценции резоруфина через 168 ч. по сравнению со значением через 24 часов в группе а) на 39% б) на 61% в) на 67% г) на 44% д) на 23%. Все условия консервации обладали преимуществом по сравнению с группой негативного контроля (p<0,0001). Показатель флюоресценции был значимо выше в группе Cryostor по сравнению со стандартными условиями (полная среда+DMSO). </p> <h3>Вывод</h3> <p style="text-align: justify;"> Проведенный анализ демонстрирует отсутствие преимуществ использования криоконтейнера при заморозке исследованных клеточных типов. Криоконсервация с использованием среды Cryostor CS10 и SSP+ c добавлением DMSO продемонстрировали наибольший потенциал в отношении сохранения жизнеспособности и пролиферативной активности исследованных культур. </p> <h2>Ключевые слова</h2> <p style="text-align: justify;"> Криоконсервация, клеточные культуры, клеточные продукты, ДМСО. </p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(6109) "Криоконсервация клеточного материала является необходимым этапом при ведении клеточных линий, а так же при создании биомедицинских клеточных продуктов (БМКП). В настоящее время актуальной задачей является устранение компонентов ксеногенного происхождения из сред для криоконсервации клеток, входящих в состав БМКП. Целью данного исследования является сравнение различных параметров криоконсервации культур и влияние их на жизнеспособность и пролиферативную активность клеток.
Материалы и методы
Исследование проводилось на клеточных линии К 562 и культуре первичных мезенхимальных стромальных клеток мыши (mMSC). В исследование включены 5 групп, различающихся по составу среды для криоконсервации: a) стандартные условия – полная среда (RPMI/®-MEM+10% FBS)+10%DMSO с использованием криоконтейнера (Mr. Frosty, Nalgene, США), б) полная среда+10%DMSO без использования криоконтейнера, в) коммерчески доступная среда CryoStor® CS10 (Stem Cell Technologies, США), г) раствор SSP+ (MacoPharma, Франция) с 10% DMSO, д) негативный контроль полная среда без добавления DMSO. Каждый образец из группы исследовался в трех повторах, подвергался заморозке в течении 7 дней при температуре -80°С, в трех независимых экспериментах. После разморозки производилась оценка жизнеспособности клеток методом проточной цитофлуориметрии с добавлением витального красителя 7AAD. Проведен анализ динамики пролиферативной активности образца клеток числом 1×10^4 в исследуемых группах спектрофотометрическим методом с использованием витального красителя alamar blue через 24, 72 и 168 ч. Статистическое сравнение групп проводилось методом Мана-Уитни.
Результаты
При оценке жизнеспособности клеточной линии К562 после разморозки, медиана доли 7-AAD+ клеток составила в группе а) 1,5% (1,2-2,1), группе б) 1,6% (1,1-1,8) группе в) 1,4% (1,2-1,9), группе г) 1,4% (1,1-1,8), группе д) 4,5% (2,7-5,6). При сравнении показателей жизнеспособности не было выявлено различий между условиями а, б, в, г. Перечисленные условия обладали статистически значимым преимуществом по сравнению с негативным контролем (д) (p=0,02). При оценке жизнеспособности клеток mMSC медиана доли 7-AAD+ клеток составила в группе а) 43,8% (16-62), б) 46,0% (22-65), в) 30,2% (17-46), г) 19,7% (16-26), д) 90,1% (86-97). При сравнении выявлено статистически значимое преимущество условий а, б, в, г по сравнению с контролем д (p<0,001). Выявлено преимущество среды на основе SSP+ по сравнению с остальными условиями консервации (p<0,05). При оценке пролиферативной активности клеточной линии К562 отмечалось увеличение медианы значения интенсивности флюоресценции резоруфина через 168 ч. по сравнению со значением через 24 часов в группе а) на 39% б) на 61% в) на 67% г) на 44% д) на 23%. Все условия консервации обладали преимуществом по сравнению с группой негативного контроля (p<0,0001). Показатель флюоресценции был значимо выше в группе Cryostor по сравнению со стандартными условиями (полная среда+DMSO).
Вывод
Проведенный анализ демонстрирует отсутствие преимуществ использования криоконтейнера при заморозке исследованных клеточных типов. Криоконсервация с использованием среды Cryostor CS10 и SSP+ c добавлением DMSO продемонстрировали наибольший потенциал в отношении сохранения жизнеспособности и пролиферативной активности исследованных культур.
Ключевые слова
Криоконсервация, клеточные культуры, клеточные продукты, ДМСО.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["DOI"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "28" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2016-04-06 14:11:12" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(3) "DOI" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(3) "DOI" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28277" ["VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(3) "DOI" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["AUTHOR_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "37" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(6) "Author" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28278" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(159) "<p>Irina A. Sidorova, Kirill V. Lepik, Albert R. Muslimov, M. A.Trofimov, Olga S. Epifanovskaya, Vladislav S. Sergeev, Alexander D. Kulagin </p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(147) "Irina A. Sidorova, Kirill V. Lepik, Albert R. Muslimov, M. A.Trofimov, Olga S. Epifanovskaya, Vladislav S. Sergeev, Alexander D. Kulagin
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(6) "Author" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["ORGANIZATION_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "38" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Organization" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28279" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(223) "<p>RM Gorbacheva Research Institute, Pavlov University, St. Petersburg, Russia</p><br> <p><b>Correspondence:</b><br> Dr. Irina A. Sidorova, e-mail: sidorovaia03@gmail.com</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(175) "RM Gorbacheva Research Institute, Pavlov University, St. Petersburg, Russia
Correspondence:
Dr. Irina A. Sidorova, e-mail: sidorovaia03@gmail.com
Cryopreservation is a crucial step in the cell lines culturing, as well as in the production of cellular therapy products (CTP). Currently the elimination of xenogenic components of cryopreservation media is considered as a necessary condition for CTP development. The aim of this study is to compare a set of cryopreservation conditions for cell line and primary cell cultures and their effect on the viability and proliferative activity of cells.
Materials and methods
The study was carried out on the K 562 cell line and primary murine mesenchymal stromal cells (mMSC). The study included 5 groups differing in the composition of the cryopreservation medium: a) standard conditions – complete medium (CM, RPMI/®-MEM+10%FBS)+10%DMSO using a cryo container (Mr. Frosty, Nalgene, USA), b) CM+10%DMSO without use of a cryocontainer, c) commercially available xeno-free medium CryoStor® CS10 (Stem Cell Technologies, USA), d) SSP+ solution (MacoPharma, France) with 10%DMSO, e) negative control CM without DMSO. Each sample from the group was tested in three repeats, subjected to cryopreservation for 7 days at -80°C, in three independent experiments. After thawing, the cell viability was assessed by flow cytometry with the 7AAD vital staining. The dynamics of the proliferative activity of 1×10^4 cells of each of the studied groups was analyzed by the spectrophotometric method using the alamar blue vital dye after 24, 72 and 168 hours. Statistical assesment of the groups was performed with the Man-Whitney U test.
Results
Assessment of K562 cells viability after thawing, demonstrated the median proportion of 7-AAD(+) cells in group a) of 1.5% (1.2-2.1), group b) 1.6% (1.1-1, 8) group c) 1.4% (1.2-1.9), group d) 1.4% (1.1-1.8), group e) 4.5% (2.7-5,6). Comparison of viability showed no differences between conditions a, b, c, d. The listed conditions had a statistically significant advantage over the negative control (e) (p=0.02). When assessing the viability of mMSC cells, the median proportion of 7-AAD + cells in group a) was 43.8% (16-62), b) 46.0% (22-65), c) 30.2% (17-46), d) 19.7% (16-26), e) 90.1% (86-97). The comparison revealed a statistically significant advantage of conditions a, b, c, d compared to control e (p <0.001). The number of 7AAD+ cells after conservation using SSP+ based medium was significantly lower compared to other conditions of conservation (p <0.05). Assessment of K562 cell line proliferative activity, showed an increase in the median value of the fluorescence intensity of resorufin after 168 hours compared to the value after 24 hours in group a) by 39% b) by 61% c) by 67% d) by 44% e) by 23 %. All conditions of conservation had an advantage over the negative control group (p <0.0001). The fluorescence score was significantly higher in the Cryostor group compared to standard conditions (complete medium + DMSO).
Conclusion
The performed analysis demonstrates no advantages of a cryo container use for cryopreservation of the studied cell types. Cryopreservation using Cryostor® CS10 medium and SSP+ based medium demonstrated the greatest potential in terms of maintaining the viability and proliferative activity of the studied cultures.
Keywords
Cryopreservation, cell cultures, cell products, DMSO.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["NAME_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "40" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:49:47" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(4) "Name" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "NAME_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28281" ["VALUE"]=> string(108) "GC-13. Comparative assessment of cryopreservation conditions for K562 and mesenchymal stromal cells cultures" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(108) "GC-13. Comparative assessment of cryopreservation conditions for K562 and mesenchymal stromal cells cultures" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(4) "Name" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["FULL_TEXT_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "42" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-07 20:29:18" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(23) "Полный текст" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(12) "FULL_TEXT_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(23) "Полный текст" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["PDF_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "43" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-09 16:05:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(7) "PDF RUS" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(6) "PDF_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "F" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(18) "doc, txt, rtf, pdf" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28282" ["VALUE"]=> string(4) "2651" ["DESCRIPTION"]=> NULL ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(4) "2651" ["~DESCRIPTION"]=> NULL ["~NAME"]=> string(7) "PDF RUS" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["PDF_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "44" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-09 16:05:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(7) "PDF ENG" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(6) "PDF_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "F" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(18) "doc, txt, rtf, pdf" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28283" ["VALUE"]=> string(4) "2652" ["DESCRIPTION"]=> NULL ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(4) "2652" ["~DESCRIPTION"]=> NULL ["~NAME"]=> string(7) "PDF ENG" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["NAME_LONG"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "45" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2023-04-13 00:55:00" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(72) "Название (для очень длинных заголовков)" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "NAME_LONG" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TYPE"]=> string(4) "HTML" ["TEXT"]=> string(0) "" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(80) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(72) "Название (для очень длинных заголовков)" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TYPE"]=> string(4) "HTML" ["TEXT"]=> string(0) "" } } } ["DISPLAY_PROPERTIES"]=> array(8) { ["AUTHOR_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "37" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(6) "Author" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28278" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(159) "<p>Irina A. Sidorova, Kirill V. Lepik, Albert R. Muslimov, M. A.Trofimov, Olga S. Epifanovskaya, Vladislav S. Sergeev, Alexander D. Kulagin </p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(147) "Irina A. Sidorova, Kirill V. Lepik, Albert R. Muslimov, M. A.Trofimov, Olga S. Epifanovskaya, Vladislav S. Sergeev, Alexander D. Kulagin
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(6) "Author" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(147) "Irina A. Sidorova, Kirill V. Lepik, Albert R. Muslimov, M. A.Trofimov, Olga S. Epifanovskaya, Vladislav S. Sergeev, Alexander D. Kulagin
" } ["SUMMARY_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "39" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28280" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(3661) "<p style="text-align: justify;">Cryopreservation is a crucial step in the cell lines culturing, as well as in the production of cellular therapy products (CTP). Currently the elimination of xenogenic components of cryopreservation media is considered as a necessary condition for CTP development. The aim of this study is to compare a set of cryopreservation conditions for cell line and primary cell cultures and their effect on the viability and proliferative activity of cells.</p> <h3>Materials and methods</h3> <p style="text-align: justify;">The study was carried out on the K 562 cell line and primary murine mesenchymal stromal cells (mMSC). The study included 5 groups differing in the composition of the cryopreservation medium: a) standard conditions – complete medium (CM, RPMI/®-MEM+10%FBS)+10%DMSO using a cryo container (Mr. Frosty, Nalgene, USA), b) CM+10%DMSO without use of a cryocontainer, c) commercially available xeno-free medium CryoStor® CS10 (Stem Cell Technologies, USA), d) SSP+ solution (MacoPharma, France) with 10%DMSO, e) negative control CM without DMSO. Each sample from the group was tested in three repeats, subjected to cryopreservation for 7 days at -80°C, in three independent experiments. After thawing, the cell viability was assessed by flow cytometry with the 7AAD vital staining. The dynamics of the proliferative activity of 1×10^4 cells of each of the studied groups was analyzed by the spectrophotometric method using the alamar blue vital dye after 24, 72 and 168 hours. Statistical assesment of the groups was performed with the Man-Whitney U test.</p> <h3>Results</h3> <p style="text-align: justify;">Assessment of K562 cells viability after thawing, demonstrated the median proportion of 7-AAD(+) cells in group a) of 1.5% (1.2-2.1), group b) 1.6% (1.1-1, 8) group c) 1.4% (1.2-1.9), group d) 1.4% (1.1-1.8), group e) 4.5% (2.7-5,6). Comparison of viability showed no differences between conditions a, b, c, d. The listed conditions had a statistically significant advantage over the negative control (e) (p=0.02). When assessing the viability of mMSC cells, the median proportion of 7-AAD + cells in group a) was 43.8% (16-62), b) 46.0% (22-65), c) 30.2% (17-46), d) 19.7% (16-26), e) 90.1% (86-97). The comparison revealed a statistically significant advantage of conditions a, b, c, d compared to control e (p <0.001). The number of 7AAD+ cells after conservation using SSP+ based medium was significantly lower compared to other conditions of conservation (p <0.05). Assessment of K562 cell line proliferative activity, showed an increase in the median value of the fluorescence intensity of resorufin after 168 hours compared to the value after 24 hours in group a) by 39% b) by 61% c) by 67% d) by 44% e) by 23 %. All conditions of conservation had an advantage over the negative control group (p <0.0001). The fluorescence score was significantly higher in the Cryostor group compared to standard conditions (complete medium + DMSO).</p> <h3>Conclusion</h3> <p style="text-align: justify;">The performed analysis demonstrates no advantages of a cryo container use for cryopreservation of the studied cell types. Cryopreservation using Cryostor® CS10 medium and SSP+ based medium demonstrated the greatest potential in terms of maintaining the viability and proliferative activity of the studied cultures. </p> <h2>Keywords</h2> <p style="text-align: justify;">Cryopreservation, cell cultures, cell products, DMSO.</p> " ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(3494) "Cryopreservation is a crucial step in the cell lines culturing, as well as in the production of cellular therapy products (CTP). Currently the elimination of xenogenic components of cryopreservation media is considered as a necessary condition for CTP development. The aim of this study is to compare a set of cryopreservation conditions for cell line and primary cell cultures and their effect on the viability and proliferative activity of cells.
Materials and methods
The study was carried out on the K 562 cell line and primary murine mesenchymal stromal cells (mMSC). The study included 5 groups differing in the composition of the cryopreservation medium: a) standard conditions – complete medium (CM, RPMI/®-MEM+10%FBS)+10%DMSO using a cryo container (Mr. Frosty, Nalgene, USA), b) CM+10%DMSO without use of a cryocontainer, c) commercially available xeno-free medium CryoStor® CS10 (Stem Cell Technologies, USA), d) SSP+ solution (MacoPharma, France) with 10%DMSO, e) negative control CM without DMSO. Each sample from the group was tested in three repeats, subjected to cryopreservation for 7 days at -80°C, in three independent experiments. After thawing, the cell viability was assessed by flow cytometry with the 7AAD vital staining. The dynamics of the proliferative activity of 1×10^4 cells of each of the studied groups was analyzed by the spectrophotometric method using the alamar blue vital dye after 24, 72 and 168 hours. Statistical assesment of the groups was performed with the Man-Whitney U test.
Results
Assessment of K562 cells viability after thawing, demonstrated the median proportion of 7-AAD(+) cells in group a) of 1.5% (1.2-2.1), group b) 1.6% (1.1-1, 8) group c) 1.4% (1.2-1.9), group d) 1.4% (1.1-1.8), group e) 4.5% (2.7-5,6). Comparison of viability showed no differences between conditions a, b, c, d. The listed conditions had a statistically significant advantage over the negative control (e) (p=0.02). When assessing the viability of mMSC cells, the median proportion of 7-AAD + cells in group a) was 43.8% (16-62), b) 46.0% (22-65), c) 30.2% (17-46), d) 19.7% (16-26), e) 90.1% (86-97). The comparison revealed a statistically significant advantage of conditions a, b, c, d compared to control e (p <0.001). The number of 7AAD+ cells after conservation using SSP+ based medium was significantly lower compared to other conditions of conservation (p <0.05). Assessment of K562 cell line proliferative activity, showed an increase in the median value of the fluorescence intensity of resorufin after 168 hours compared to the value after 24 hours in group a) by 39% b) by 61% c) by 67% d) by 44% e) by 23 %. All conditions of conservation had an advantage over the negative control group (p <0.0001). The fluorescence score was significantly higher in the Cryostor group compared to standard conditions (complete medium + DMSO).
Conclusion
The performed analysis demonstrates no advantages of a cryo container use for cryopreservation of the studied cell types. Cryopreservation using Cryostor® CS10 medium and SSP+ based medium demonstrated the greatest potential in terms of maintaining the viability and proliferative activity of the studied cultures.
Keywords
Cryopreservation, cell cultures, cell products, DMSO.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(3494) "Cryopreservation is a crucial step in the cell lines culturing, as well as in the production of cellular therapy products (CTP). Currently the elimination of xenogenic components of cryopreservation media is considered as a necessary condition for CTP development. The aim of this study is to compare a set of cryopreservation conditions for cell line and primary cell cultures and their effect on the viability and proliferative activity of cells.
Materials and methods
The study was carried out on the K 562 cell line and primary murine mesenchymal stromal cells (mMSC). The study included 5 groups differing in the composition of the cryopreservation medium: a) standard conditions – complete medium (CM, RPMI/®-MEM+10%FBS)+10%DMSO using a cryo container (Mr. Frosty, Nalgene, USA), b) CM+10%DMSO without use of a cryocontainer, c) commercially available xeno-free medium CryoStor® CS10 (Stem Cell Technologies, USA), d) SSP+ solution (MacoPharma, France) with 10%DMSO, e) negative control CM without DMSO. Each sample from the group was tested in three repeats, subjected to cryopreservation for 7 days at -80°C, in three independent experiments. After thawing, the cell viability was assessed by flow cytometry with the 7AAD vital staining. The dynamics of the proliferative activity of 1×10^4 cells of each of the studied groups was analyzed by the spectrophotometric method using the alamar blue vital dye after 24, 72 and 168 hours. Statistical assesment of the groups was performed with the Man-Whitney U test.
Results
Assessment of K562 cells viability after thawing, demonstrated the median proportion of 7-AAD(+) cells in group a) of 1.5% (1.2-2.1), group b) 1.6% (1.1-1, 8) group c) 1.4% (1.2-1.9), group d) 1.4% (1.1-1.8), group e) 4.5% (2.7-5,6). Comparison of viability showed no differences between conditions a, b, c, d. The listed conditions had a statistically significant advantage over the negative control (e) (p=0.02). When assessing the viability of mMSC cells, the median proportion of 7-AAD + cells in group a) was 43.8% (16-62), b) 46.0% (22-65), c) 30.2% (17-46), d) 19.7% (16-26), e) 90.1% (86-97). The comparison revealed a statistically significant advantage of conditions a, b, c, d compared to control e (p <0.001). The number of 7AAD+ cells after conservation using SSP+ based medium was significantly lower compared to other conditions of conservation (p <0.05). Assessment of K562 cell line proliferative activity, showed an increase in the median value of the fluorescence intensity of resorufin after 168 hours compared to the value after 24 hours in group a) by 39% b) by 61% c) by 67% d) by 44% e) by 23 %. All conditions of conservation had an advantage over the negative control group (p <0.0001). The fluorescence score was significantly higher in the Cryostor group compared to standard conditions (complete medium + DMSO).
Conclusion
The performed analysis demonstrates no advantages of a cryo container use for cryopreservation of the studied cell types. Cryopreservation using Cryostor® CS10 medium and SSP+ based medium demonstrated the greatest potential in terms of maintaining the viability and proliferative activity of the studied cultures.
Keywords
Cryopreservation, cell cultures, cell products, DMSO.
" } ["DOI"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "28" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2016-04-06 14:11:12" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(3) "DOI" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(3) "DOI" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28277" ["VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(3) "DOI" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["DISPLAY_VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" } ["NAME_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "40" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:49:47" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(4) "Name" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "NAME_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28281" ["VALUE"]=> string(108) "GC-13. Comparative assessment of cryopreservation conditions for K562 and mesenchymal stromal cells cultures" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(108) "GC-13. Comparative assessment of cryopreservation conditions for K562 and mesenchymal stromal cells cultures" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(4) "Name" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["DISPLAY_VALUE"]=> string(108) "GC-13. Comparative assessment of cryopreservation conditions for K562 and mesenchymal stromal cells cultures" } ["ORGANIZATION_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "38" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Organization" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28279" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(223) "<p>RM Gorbacheva Research Institute, Pavlov University, St. Petersburg, Russia</p><br> <p><b>Correspondence:</b><br> Dr. Irina A. Sidorova, e-mail: sidorovaia03@gmail.com</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(175) "RM Gorbacheva Research Institute, Pavlov University, St. Petersburg, Russia
Correspondence:
Dr. Irina A. Sidorova, e-mail: sidorovaia03@gmail.com
RM Gorbacheva Research Institute, Pavlov University, St. Petersburg, Russia
Correspondence:
Dr. Irina A. Sidorova, e-mail: sidorovaia03@gmail.com
Ирина А. Сидорова, Кирилл В. Лепик, Альберт Р. Муслимов, М. А. Трофимов, Ольга С. Епифановская, Владислав С. Сергеев, Александр Д. Кулагин
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Авторы" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(253) "Ирина А. Сидорова, Кирилл В. Лепик, Альберт Р. Муслимов, М. А. Трофимов, Ольга С. Епифановская, Владислав С. Сергеев, Александр Д. Кулагин
" } ["SUMMARY_RU"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "27" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28276" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(6279) "<p style="text-align: justify;"> Криоконсервация клеточного материала является необходимым этапом при ведении клеточных линий, а так же при создании биомедицинских клеточных продуктов (БМКП). В настоящее время актуальной задачей является устранение компонентов ксеногенного происхождения из сред для криоконсервации клеток, входящих в состав БМКП. Целью данного исследования является сравнение различных параметров криоконсервации культур и влияние их на жизнеспособность и пролиферативную активность клеток. </p> <h3>Материалы и методы</h3> <p style="text-align: justify;"> Исследование проводилось на клеточных линии К 562 и культуре первичных мезенхимальных стромальных клеток мыши (mMSC). В исследование включены 5 групп, различающихся по составу среды для криоконсервации: a) стандартные условия – полная среда (RPMI/®-MEM+10% FBS)+10%DMSO с использованием криоконтейнера (Mr. Frosty, Nalgene, США), б) полная среда+10%DMSO без использования криоконтейнера, в) коммерчески доступная среда CryoStor® CS10 (Stem Cell Technologies, США), г) раствор SSP+ (MacoPharma, Франция) с 10% DMSO, д) негативный контроль полная среда без добавления DMSO. Каждый образец из группы исследовался в трех повторах, подвергался заморозке в течении 7 дней при температуре -80°С, в трех независимых экспериментах. После разморозки производилась оценка жизнеспособности клеток методом проточной цитофлуориметрии с добавлением витального красителя 7AAD. Проведен анализ динамики пролиферативной активности образца клеток числом 1×10^4 в исследуемых группах спектрофотометрическим методом с использованием витального красителя alamar blue через 24, 72 и 168 ч. Статистическое сравнение групп проводилось методом Мана-Уитни. </p> <h3>Результаты</h3> <p style="text-align: justify;"> При оценке жизнеспособности клеточной линии К562 после разморозки, медиана доли 7-AAD+ клеток составила в группе а) 1,5% (1,2-2,1), группе б) 1,6% (1,1-1,8) группе в) 1,4% (1,2-1,9), группе г) 1,4% (1,1-1,8), группе д) 4,5% (2,7-5,6). При сравнении показателей жизнеспособности не было выявлено различий между условиями а, б, в, г. Перечисленные условия обладали статистически значимым преимуществом по сравнению с негативным контролем (д) (p=0,02). При оценке жизнеспособности клеток mMSC медиана доли 7-AAD+ клеток составила в группе а) 43,8% (16-62), б) 46,0% (22-65), в) 30,2% (17-46), г) 19,7% (16-26), д) 90,1% (86-97). При сравнении выявлено статистически значимое преимущество условий а, б, в, г по сравнению с контролем д (p<0,001). Выявлено преимущество среды на основе SSP+ по сравнению с остальными условиями консервации (p<0,05). При оценке пролиферативной активности клеточной линии К562 отмечалось увеличение медианы значения интенсивности флюоресценции резоруфина через 168 ч. по сравнению со значением через 24 часов в группе а) на 39% б) на 61% в) на 67% г) на 44% д) на 23%. Все условия консервации обладали преимуществом по сравнению с группой негативного контроля (p<0,0001). Показатель флюоресценции был значимо выше в группе Cryostor по сравнению со стандартными условиями (полная среда+DMSO). </p> <h3>Вывод</h3> <p style="text-align: justify;"> Проведенный анализ демонстрирует отсутствие преимуществ использования криоконтейнера при заморозке исследованных клеточных типов. Криоконсервация с использованием среды Cryostor CS10 и SSP+ c добавлением DMSO продемонстрировали наибольший потенциал в отношении сохранения жизнеспособности и пролиферативной активности исследованных культур. </p> <h2>Ключевые слова</h2> <p style="text-align: justify;"> Криоконсервация, клеточные культуры, клеточные продукты, ДМСО. </p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(6109) "Криоконсервация клеточного материала является необходимым этапом при ведении клеточных линий, а так же при создании биомедицинских клеточных продуктов (БМКП). В настоящее время актуальной задачей является устранение компонентов ксеногенного происхождения из сред для криоконсервации клеток, входящих в состав БМКП. Целью данного исследования является сравнение различных параметров криоконсервации культур и влияние их на жизнеспособность и пролиферативную активность клеток.
Материалы и методы
Исследование проводилось на клеточных линии К 562 и культуре первичных мезенхимальных стромальных клеток мыши (mMSC). В исследование включены 5 групп, различающихся по составу среды для криоконсервации: a) стандартные условия – полная среда (RPMI/®-MEM+10% FBS)+10%DMSO с использованием криоконтейнера (Mr. Frosty, Nalgene, США), б) полная среда+10%DMSO без использования криоконтейнера, в) коммерчески доступная среда CryoStor® CS10 (Stem Cell Technologies, США), г) раствор SSP+ (MacoPharma, Франция) с 10% DMSO, д) негативный контроль полная среда без добавления DMSO. Каждый образец из группы исследовался в трех повторах, подвергался заморозке в течении 7 дней при температуре -80°С, в трех независимых экспериментах. После разморозки производилась оценка жизнеспособности клеток методом проточной цитофлуориметрии с добавлением витального красителя 7AAD. Проведен анализ динамики пролиферативной активности образца клеток числом 1×10^4 в исследуемых группах спектрофотометрическим методом с использованием витального красителя alamar blue через 24, 72 и 168 ч. Статистическое сравнение групп проводилось методом Мана-Уитни.
Результаты
При оценке жизнеспособности клеточной линии К562 после разморозки, медиана доли 7-AAD+ клеток составила в группе а) 1,5% (1,2-2,1), группе б) 1,6% (1,1-1,8) группе в) 1,4% (1,2-1,9), группе г) 1,4% (1,1-1,8), группе д) 4,5% (2,7-5,6). При сравнении показателей жизнеспособности не было выявлено различий между условиями а, б, в, г. Перечисленные условия обладали статистически значимым преимуществом по сравнению с негативным контролем (д) (p=0,02). При оценке жизнеспособности клеток mMSC медиана доли 7-AAD+ клеток составила в группе а) 43,8% (16-62), б) 46,0% (22-65), в) 30,2% (17-46), г) 19,7% (16-26), д) 90,1% (86-97). При сравнении выявлено статистически значимое преимущество условий а, б, в, г по сравнению с контролем д (p<0,001). Выявлено преимущество среды на основе SSP+ по сравнению с остальными условиями консервации (p<0,05). При оценке пролиферативной активности клеточной линии К562 отмечалось увеличение медианы значения интенсивности флюоресценции резоруфина через 168 ч. по сравнению со значением через 24 часов в группе а) на 39% б) на 61% в) на 67% г) на 44% д) на 23%. Все условия консервации обладали преимуществом по сравнению с группой негативного контроля (p<0,0001). Показатель флюоресценции был значимо выше в группе Cryostor по сравнению со стандартными условиями (полная среда+DMSO).
Вывод
Проведенный анализ демонстрирует отсутствие преимуществ использования криоконтейнера при заморозке исследованных клеточных типов. Криоконсервация с использованием среды Cryostor CS10 и SSP+ c добавлением DMSO продемонстрировали наибольший потенциал в отношении сохранения жизнеспособности и пролиферативной активности исследованных культур.
Ключевые слова
Криоконсервация, клеточные культуры, клеточные продукты, ДМСО.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(6109) "Криоконсервация клеточного материала является необходимым этапом при ведении клеточных линий, а так же при создании биомедицинских клеточных продуктов (БМКП). В настоящее время актуальной задачей является устранение компонентов ксеногенного происхождения из сред для криоконсервации клеток, входящих в состав БМКП. Целью данного исследования является сравнение различных параметров криоконсервации культур и влияние их на жизнеспособность и пролиферативную активность клеток.
Материалы и методы
Исследование проводилось на клеточных линии К 562 и культуре первичных мезенхимальных стромальных клеток мыши (mMSC). В исследование включены 5 групп, различающихся по составу среды для криоконсервации: a) стандартные условия – полная среда (RPMI/®-MEM+10% FBS)+10%DMSO с использованием криоконтейнера (Mr. Frosty, Nalgene, США), б) полная среда+10%DMSO без использования криоконтейнера, в) коммерчески доступная среда CryoStor® CS10 (Stem Cell Technologies, США), г) раствор SSP+ (MacoPharma, Франция) с 10% DMSO, д) негативный контроль полная среда без добавления DMSO. Каждый образец из группы исследовался в трех повторах, подвергался заморозке в течении 7 дней при температуре -80°С, в трех независимых экспериментах. После разморозки производилась оценка жизнеспособности клеток методом проточной цитофлуориметрии с добавлением витального красителя 7AAD. Проведен анализ динамики пролиферативной активности образца клеток числом 1×10^4 в исследуемых группах спектрофотометрическим методом с использованием витального красителя alamar blue через 24, 72 и 168 ч. Статистическое сравнение групп проводилось методом Мана-Уитни.
Результаты
При оценке жизнеспособности клеточной линии К562 после разморозки, медиана доли 7-AAD+ клеток составила в группе а) 1,5% (1,2-2,1), группе б) 1,6% (1,1-1,8) группе в) 1,4% (1,2-1,9), группе г) 1,4% (1,1-1,8), группе д) 4,5% (2,7-5,6). При сравнении показателей жизнеспособности не было выявлено различий между условиями а, б, в, г. Перечисленные условия обладали статистически значимым преимуществом по сравнению с негативным контролем (д) (p=0,02). При оценке жизнеспособности клеток mMSC медиана доли 7-AAD+ клеток составила в группе а) 43,8% (16-62), б) 46,0% (22-65), в) 30,2% (17-46), г) 19,7% (16-26), д) 90,1% (86-97). При сравнении выявлено статистически значимое преимущество условий а, б, в, г по сравнению с контролем д (p<0,001). Выявлено преимущество среды на основе SSP+ по сравнению с остальными условиями консервации (p<0,05). При оценке пролиферативной активности клеточной линии К562 отмечалось увеличение медианы значения интенсивности флюоресценции резоруфина через 168 ч. по сравнению со значением через 24 часов в группе а) на 39% б) на 61% в) на 67% г) на 44% д) на 23%. Все условия консервации обладали преимуществом по сравнению с группой негативного контроля (p<0,0001). Показатель флюоресценции был значимо выше в группе Cryostor по сравнению со стандартными условиями (полная среда+DMSO).
Вывод
Проведенный анализ демонстрирует отсутствие преимуществ использования криоконтейнера при заморозке исследованных клеточных типов. Криоконсервация с использованием среды Cryostor CS10 и SSP+ c добавлением DMSO продемонстрировали наибольший потенциал в отношении сохранения жизнеспособности и пролиферативной активности исследованных культур.
Ключевые слова
Криоконсервация, клеточные культуры, клеточные продукты, ДМСО.
" } ["ORGANIZATION_RU"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "26" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(22) "Организации" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28275" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(358) "<p>НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р. М. Горбачевой, Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И. П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(346) "НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р. М. Горбачевой, Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И. П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(22) "Организации" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(346) "НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р. М. Горбачевой, Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И. П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия
" } } } [4]=> array(49) { ["IBLOCK_SECTION_ID"]=> string(3) "196" ["~IBLOCK_SECTION_ID"]=> string(3) "196" ["ID"]=> string(4) "2029" ["~ID"]=> string(4) "2029" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["~IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(257) "GC-15. Изучение свойств полимерных микрокапсул, синтезированных с помощью метода «мягкой литографии» для запаковки генетических конструкций" ["~NAME"]=> string(257) "GC-15. Изучение свойств полимерных микрокапсул, синтезированных с помощью метода «мягкой литографии» для запаковки генетических конструкций" ["ACTIVE_FROM"]=> NULL ["~ACTIVE_FROM"]=> NULL ["TIMESTAMP_X"]=> string(22) "12/21/2021 12:49:58 pm" ["~TIMESTAMP_X"]=> string(22) "12/21/2021 12:49:58 pm" ["DETAIL_PAGE_URL"]=> string(237) "/en/archive/tom-10-nomer-3/tezisy-dokladov-xv-simpoziuma-pamyati-r-m-gorbachevoy-po-razdelam/gennaya-i-kletochnaya-terapiya-gc-01-gc-15/gc-15-izuchenie-svoystv-polimernykh-mikrokapsul-sintezirovannykh-s-pomoshchyu-metoda-myagkoy-litogra/" ["~DETAIL_PAGE_URL"]=> string(237) "/en/archive/tom-10-nomer-3/tezisy-dokladov-xv-simpoziuma-pamyati-r-m-gorbachevoy-po-razdelam/gennaya-i-kletochnaya-terapiya-gc-01-gc-15/gc-15-izuchenie-svoystv-polimernykh-mikrokapsul-sintezirovannykh-s-pomoshchyu-metoda-myagkoy-litogra/" ["LIST_PAGE_URL"]=> string(12) "/en/archive/" ["~LIST_PAGE_URL"]=> string(12) "/en/archive/" ["DETAIL_TEXT"]=> string(0) "" ["~DETAIL_TEXT"]=> string(0) "" ["DETAIL_TEXT_TYPE"]=> string(4) "text" ["~DETAIL_TEXT_TYPE"]=> string(4) "text" ["PREVIEW_TEXT"]=> string(0) "" ["~PREVIEW_TEXT"]=> string(0) "" ["PREVIEW_TEXT_TYPE"]=> string(4) "text" ["~PREVIEW_TEXT_TYPE"]=> string(4) "text" ["PREVIEW_PICTURE"]=> NULL ["~PREVIEW_PICTURE"]=> NULL ["LANG_DIR"]=> string(4) "/ru/" ["~LANG_DIR"]=> string(4) "/ru/" ["SORT"]=> string(3) "150" ["~SORT"]=> string(3) "150" ["CODE"]=> string(100) "gc-15-izuchenie-svoystv-polimernykh-mikrokapsul-sintezirovannykh-s-pomoshchyu-metoda-myagkoy-litogra" ["~CODE"]=> string(100) "gc-15-izuchenie-svoystv-polimernykh-mikrokapsul-sintezirovannykh-s-pomoshchyu-metoda-myagkoy-litogra" ["EXTERNAL_ID"]=> string(4) "2029" ["~EXTERNAL_ID"]=> string(4) "2029" ["IBLOCK_TYPE_ID"]=> string(7) "journal" ["~IBLOCK_TYPE_ID"]=> string(7) "journal" ["IBLOCK_CODE"]=> string(7) "volumes" ["~IBLOCK_CODE"]=> string(7) "volumes" ["IBLOCK_EXTERNAL_ID"]=> NULL ["~IBLOCK_EXTERNAL_ID"]=> NULL ["LID"]=> string(2) "s2" ["~LID"]=> string(2) "s2" ["EDIT_LINK"]=> NULL ["DELETE_LINK"]=> NULL ["DISPLAY_ACTIVE_FROM"]=> string(0) "" ["IPROPERTY_VALUES"]=> array(18) { ["ELEMENT_META_TITLE"]=> string(257) "GC-15. Изучение свойств полимерных микрокапсул, синтезированных с помощью метода «мягкой литографии» для запаковки генетических конструкций" ["ELEMENT_META_KEYWORDS"]=> string(0) "" ["ELEMENT_META_DESCRIPTION"]=> string(389) "GC-15. Изучение свойств полимерных микрокапсул, синтезированных с помощью метода «мягкой литографии» для запаковки генетических конструкцийGC-15. Investigation of the characteristics of micro-sized carriers, using “soft lithography” for packaging of genetic material " ["ELEMENT_PREVIEW_PICTURE_FILE_ALT"]=> string(4424) "<p style="text-align: justify;">Для эффективной доставки генетического материала в клетки, необходимо обеспечить благоприятные условия проведения трансфекции, защитить его от внутриклеточного микроокружения, pH среды, ферментов. Это реализуемо при запаковке его в микроносители новым методом – «мягкая литография», позволяющая «отпечатывать» на мягкой силиконовой подложке с определенной микроструктурой полимерные микрокапсулы заданной величины и формы. Этот способ минует такие нежелательные стадии производства полиэлектролитных микрокапсул как: образование ядра, нанесение полимеров на поверхность ядра и последующее его удаление. Процесс производства становится более контролируемым и эффективным, при этом запаковка веществ и среды в микрокапсулы не зависит от сродства веществ к ядру, заряда носителя. В процессе исследования были успешно запакованы гидрофобные и гидрофильные структуры от 10 нм до 5 мкм, являющиеся неустойчивыми в условиях окружающей среды. Был проведен синтез стерильных микрокапсул. Цель исследования: оценить стабильность микрокапсул, токсичность для живых сред и способность удерживать материал в течении определенного времени.</p> <h3>Материалы и методы</h3> <p style="text-align: justify;">Использовали силиконовую подложку для синтеза микрокапсул. Стабильность изучалась на конфокальном микроскопе, спектрофлюориметре. Полимеры: полилактид (ПЛА), поликапролактон (ПКЛ), полиметилметакрилат (ПММА). Среды, в которых исследовалась стабильность: вода, натрий-фосфатный буфер, сыворотка крови. Токсичность определялась <i>in vitro</i> на клетках СТ-26.</p> <h3>Результаты</h3> <p style="text-align: justify;">Полимерные микрокапсулы не являются токсичными для клеток. Данные носители продемонстрировали высокую удерживающую способность, сохраняя свойства инкапсулированных биологически активных соединений в течение длительного периода времени (>7 дней).</p> <h3>Выводы</h3> <p style="text-align: justify;">Таким образом, производство микрокапсул методом «мягкой литографии» может быть эффективным для инкапсулирования генетического материала с сохранением его биологической активности.</p> <h3>Благодарность</h3> <p style="text-align: justify;">Работа выполнена при поддержке Российского Научного Фонда (грант № 20-45-01012).</p> <h2>Ключевые слова</h2> <p style="text-align: justify;">Микрокапсулы, доставка, литография, генетический материал, полимеры, носители.</p>" ["ELEMENT_PREVIEW_PICTURE_FILE_TITLE"]=> string(257) "GC-15. Изучение свойств полимерных микрокапсул, синтезированных с помощью метода «мягкой литографии» для запаковки генетических конструкций" ["ELEMENT_DETAIL_PICTURE_FILE_ALT"]=> string(257) "GC-15. Изучение свойств полимерных микрокапсул, синтезированных с помощью метода «мягкой литографии» для запаковки генетических конструкций" ["ELEMENT_DETAIL_PICTURE_FILE_TITLE"]=> string(257) "GC-15. Изучение свойств полимерных микрокапсул, синтезированных с помощью метода «мягкой литографии» для запаковки генетических конструкций" ["SECTION_META_TITLE"]=> string(257) "GC-15. Изучение свойств полимерных микрокапсул, синтезированных с помощью метода «мягкой литографии» для запаковки генетических конструкций" ["SECTION_META_KEYWORDS"]=> string(257) "GC-15. Изучение свойств полимерных микрокапсул, синтезированных с помощью метода «мягкой литографии» для запаковки генетических конструкций" ["SECTION_META_DESCRIPTION"]=> string(257) "GC-15. Изучение свойств полимерных микрокапсул, синтезированных с помощью метода «мягкой литографии» для запаковки генетических конструкций" ["SECTION_PICTURE_FILE_ALT"]=> string(257) "GC-15. Изучение свойств полимерных микрокапсул, синтезированных с помощью метода «мягкой литографии» для запаковки генетических конструкций" ["SECTION_PICTURE_FILE_TITLE"]=> string(257) "GC-15. Изучение свойств полимерных микрокапсул, синтезированных с помощью метода «мягкой литографии» для запаковки генетических конструкций" ["SECTION_PICTURE_FILE_NAME"]=> string(100) "gc-15-izuchenie-svoystv-polimernykh-mikrokapsul-sintezirovannykh-s-pomoshchyu-metoda-myagkoy-litogra" ["SECTION_DETAIL_PICTURE_FILE_ALT"]=> string(257) "GC-15. Изучение свойств полимерных микрокапсул, синтезированных с помощью метода «мягкой литографии» для запаковки генетических конструкций" ["SECTION_DETAIL_PICTURE_FILE_TITLE"]=> string(257) "GC-15. Изучение свойств полимерных микрокапсул, синтезированных с помощью метода «мягкой литографии» для запаковки генетических конструкций" ["SECTION_DETAIL_PICTURE_FILE_NAME"]=> string(100) "gc-15-izuchenie-svoystv-polimernykh-mikrokapsul-sintezirovannykh-s-pomoshchyu-metoda-myagkoy-litogra" ["ELEMENT_PREVIEW_PICTURE_FILE_NAME"]=> string(100) "gc-15-izuchenie-svoystv-polimernykh-mikrokapsul-sintezirovannykh-s-pomoshchyu-metoda-myagkoy-litogra" ["ELEMENT_DETAIL_PICTURE_FILE_NAME"]=> string(100) "gc-15-izuchenie-svoystv-polimernykh-mikrokapsul-sintezirovannykh-s-pomoshchyu-metoda-myagkoy-litogra" } ["FIELDS"]=> array(1) { ["IBLOCK_SECTION_ID"]=> string(3) "196" } ["PROPERTIES"]=> array(18) { ["KEYWORDS"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "19" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:46:01" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(27) "Ключевые слова" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(8) "KEYWORDS" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "E" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "Y" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "4" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "Y" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(13) "EAutocomplete" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(9) { ["VIEW"]=> string(1) "E" ["SHOW_ADD"]=> string(1) "Y" ["MAX_WIDTH"]=> int(0) ["MIN_HEIGHT"]=> int(24) ["MAX_HEIGHT"]=> int(1000) ["BAN_SYM"]=> string(2) ",;" ["REP_SYM"]=> string(1) " " ["OTHER_REP_SYM"]=> string(0) "" ["IBLOCK_MESS"]=> string(1) "Y" } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> bool(false) ["VALUE"]=> bool(false) ["DESCRIPTION"]=> bool(false) ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> bool(false) ["~DESCRIPTION"]=> bool(false) ["~NAME"]=> string(27) "Ключевые слова" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["SUBMITTED"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "20" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 17:21:42" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(21) "Дата подачи" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "SUBMITTED" ["DEFAULT_VALUE"]=> NULL ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(8) "DateTime" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(21) "Дата подачи" ["~DEFAULT_VALUE"]=> NULL } ["ACCEPTED"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "21" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 17:21:42" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(25) "Дата принятия" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(8) "ACCEPTED" ["DEFAULT_VALUE"]=> NULL ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(8) "DateTime" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(25) "Дата принятия" ["~DEFAULT_VALUE"]=> NULL } ["PUBLISHED"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "22" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 17:21:42" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(29) "Дата публикации" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "PUBLISHED" ["DEFAULT_VALUE"]=> NULL ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(8) "DateTime" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(29) "Дата публикации" ["~DEFAULT_VALUE"]=> NULL } ["CONTACT"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "23" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 14:43:05" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(14) "Контакт" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "CONTACT" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "E" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "3" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(13) "EAutocomplete" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(9) { ["VIEW"]=> string(1) "E" ["SHOW_ADD"]=> string(1) "Y" ["MAX_WIDTH"]=> int(0) ["MIN_HEIGHT"]=> int(24) ["MAX_HEIGHT"]=> int(1000) ["BAN_SYM"]=> string(2) ",;" ["REP_SYM"]=> string(1) " " ["OTHER_REP_SYM"]=> string(0) "" ["IBLOCK_MESS"]=> string(1) "N" } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(14) "Контакт" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["AUTHORS"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "24" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:45:07" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Авторы" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "AUTHORS" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "E" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "Y" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "3" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(13) "EAutocomplete" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(9) { ["VIEW"]=> string(1) "E" ["SHOW_ADD"]=> string(1) "Y" ["MAX_WIDTH"]=> int(0) ["MIN_HEIGHT"]=> int(24) ["MAX_HEIGHT"]=> int(1000) ["BAN_SYM"]=> string(2) ",;" ["REP_SYM"]=> string(1) " " ["OTHER_REP_SYM"]=> string(0) "" ["IBLOCK_MESS"]=> string(1) "N" } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> bool(false) ["VALUE"]=> bool(false) ["DESCRIPTION"]=> bool(false) ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> bool(false) ["~DESCRIPTION"]=> bool(false) ["~NAME"]=> string(12) "Авторы" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["AUTHOR_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "25" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Авторы" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28294" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(314) "<p>Анастасия А. Якубова<sup>1,2</sup>, Павел М. Тальянов<sup>3</sup>, Михаил В. Зюзин<sup>3</sup>, Альберт Р. Муслимов<sup>1,2</sup>, Александр С. Тимин<sup>1</sup></p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(242) "Анастасия А. Якубова1,2, Павел М. Тальянов3, Михаил В. Зюзин3, Альберт Р. Муслимов1,2, Александр С. Тимин1
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Авторы" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["ORGANIZATION_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "26" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(22) "Организации" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28295" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(804) "<p><sup>1</sup> Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого, Санкт-Петербург, Россия<br> <sup>2</sup> Санкт-Петербургский национальный исследовательский Академический университет имени Ж. И. Алферова Российской академии наук, Санкт-Петербург, Россия<br> <sup>3</sup> Санкт-Петербургский национальный исследовательский университет информационных технологий, механики и оптики, Санкт-Петербург, Россия</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(744) "1 Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого, Санкт-Петербург, Россия
2 Санкт-Петербургский национальный исследовательский Академический университет имени Ж. И. Алферова Российской академии наук, Санкт-Петербург, Россия
3 Санкт-Петербургский национальный исследовательский университет информационных технологий, механики и оптики, Санкт-Петербург, Россия
Для эффективной доставки генетического материала в клетки, необходимо обеспечить благоприятные условия проведения трансфекции, защитить его от внутриклеточного микроокружения, pH среды, ферментов. Это реализуемо при запаковке его в микроносители новым методом – «мягкая литография», позволяющая «отпечатывать» на мягкой силиконовой подложке с определенной микроструктурой полимерные микрокапсулы заданной величины и формы. Этот способ минует такие нежелательные стадии производства полиэлектролитных микрокапсул как: образование ядра, нанесение полимеров на поверхность ядра и последующее его удаление. Процесс производства становится более контролируемым и эффективным, при этом запаковка веществ и среды в микрокапсулы не зависит от сродства веществ к ядру, заряда носителя. В процессе исследования были успешно запакованы гидрофобные и гидрофильные структуры от 10 нм до 5 мкм, являющиеся неустойчивыми в условиях окружающей среды. Был проведен синтез стерильных микрокапсул. Цель исследования: оценить стабильность микрокапсул, токсичность для живых сред и способность удерживать материал в течении определенного времени.
Материалы и методы
Использовали силиконовую подложку для синтеза микрокапсул. Стабильность изучалась на конфокальном микроскопе, спектрофлюориметре. Полимеры: полилактид (ПЛА), поликапролактон (ПКЛ), полиметилметакрилат (ПММА). Среды, в которых исследовалась стабильность: вода, натрий-фосфатный буфер, сыворотка крови. Токсичность определялась in vitro на клетках СТ-26.
Результаты
Полимерные микрокапсулы не являются токсичными для клеток. Данные носители продемонстрировали высокую удерживающую способность, сохраняя свойства инкапсулированных биологически активных соединений в течение длительного периода времени (>7 дней).
Выводы
Таким образом, производство микрокапсул методом «мягкой литографии» может быть эффективным для инкапсулирования генетического материала с сохранением его биологической активности.
Благодарность
Работа выполнена при поддержке Российского Научного Фонда (грант № 20-45-01012).
Ключевые слова
Микрокапсулы, доставка, литография, генетический материал, полимеры, носители.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["DOI"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "28" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2016-04-06 14:11:12" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(3) "DOI" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(3) "DOI" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28297" ["VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(3) "DOI" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["AUTHOR_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "37" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(6) "Author" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28298" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(243) "<p>Anastasia A. Yakubova<sup>1,2</sup>, Pavel M. Talianov<sup>3</sup>, Mikhail V. Zyuzin<sup>3</sup>, Albert R. Muslimov<sup>1,2</sup>, Alexander S. Timin<sup>1</sup> </p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(171) "Anastasia A. Yakubova1,2, Pavel M. Talianov3, Mikhail V. Zyuzin3, Albert R. Muslimov1,2, Alexander S. Timin1
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(6) "Author" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["ORGANIZATION_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "38" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Organization" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28299" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(587) "<p><sup>1</sup> Peter The Great St. Petersburg Polytechnic University, St. Petersburg, Russia<br> <sup>2</sup> Alferov Institution of Higher Education and Science Saint Petersburg National Research Academic University of the Russian Academy of Sciences, St. Petersburg, Russia<br> <sup>3</sup> School of Physics and Engineering, ITMO University, St. Petersburg, Russia</p><br> <p><b>Correspondence:</b><br> Anastasia A. Yakubova, phone: +7 (981) 795-72-41, e-mail: yakubova.nastya@bk.ru</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(491) "1 Peter The Great St. Petersburg Polytechnic University, St. Petersburg, Russia
2 Alferov Institution of Higher Education and Science Saint Petersburg National Research Academic University of the Russian Academy of Sciences, St. Petersburg, Russia
3 School of Physics and Engineering, ITMO University, St. Petersburg, Russia
Correspondence:
Anastasia A. Yakubova, phone: +7 (981) 795-72-41, e-mail: yakubova.nastya@bk.ru
For the effective delivering of genetic material to target cells, it’s necessary to provide sustainable conditions of transfection and protect it from intracellular microenvironment, pH, enzymes. It’s possible with a method of creating micro-sized carriers by new method of “soft lithography”, allowing to stamp polymer carriers with precise size and shape. This way passes undesirable stage of fabrication of polyelectrolyte carriers, such as synthesis of template, application of polymers on this template, deletion of the template. The process is becoming more controlled and effective, packing the cargo and the medium does not depend on affinity of the cargo to the template, charge of the polymers. In the research process hydrophobic and hydrophilic structures from 10nm to 5µm were packed, which tend to be unstable in external environment. Also sterile carriers were fabricated. The purpose of the study is to assess stability of the micro-carriers, toxicity for living system and ability to save the cargo over definite time.
Materials and methods
Silicon PDMS mold for micro-carriers fabrication was used. Stability was assessed with a confocal microscope and specrofluorometry. The following polymers were tested: polylactid PLA, Polycaprolaction PCL, polymethylmethacrylate PMMA. We used several test mediums: water, phosphate-buffered saline, human serum. Toxicity was determined with CT-26 cell line.
Results
Experimental results showed that polymer micro-carriers are not toxic for cells. Micro-carriers were able to 10 nm structures, while maintaining their medium.
Conclusions
Fabrication of micro-sized carriers by “soft lythograpy” is possibly effective for packing and saving of genetic material with its microenvironment.
Keywords
Microcarriers, micro-sized carriers, microcapsules, delivery, lythography, genetic material, polymer.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["NAME_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "40" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:49:47" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(4) "Name" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "NAME_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28301" ["VALUE"]=> string(132) "GC-15. Investigation of the characteristics of micro-sized carriers, using “soft lithography” for packaging of genetic material " ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(132) "GC-15. Investigation of the characteristics of micro-sized carriers, using “soft lithography” for packaging of genetic material " ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(4) "Name" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["FULL_TEXT_RU"]=> &array(36) { ["ID"]=> string(2) "42" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-07 20:29:18" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(23) "Полный текст" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(12) "FULL_TEXT_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(23) "Полный текст" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["PDF_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "43" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-09 16:05:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(7) "PDF RUS" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(6) "PDF_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "F" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(18) "doc, txt, rtf, pdf" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28302" ["VALUE"]=> string(4) "2656" ["DESCRIPTION"]=> NULL ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(4) "2656" ["~DESCRIPTION"]=> NULL ["~NAME"]=> string(7) "PDF RUS" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["PDF_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "44" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-09 16:05:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(7) "PDF ENG" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(6) "PDF_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "F" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(18) "doc, txt, rtf, pdf" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28303" ["VALUE"]=> string(4) "2657" ["DESCRIPTION"]=> NULL ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(4) "2657" ["~DESCRIPTION"]=> NULL ["~NAME"]=> string(7) "PDF ENG" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["NAME_LONG"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "45" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2023-04-13 00:55:00" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(72) "Название (для очень длинных заголовков)" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "NAME_LONG" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TYPE"]=> string(4) "HTML" ["TEXT"]=> string(0) "" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(80) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(72) "Название (для очень длинных заголовков)" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TYPE"]=> string(4) "HTML" ["TEXT"]=> string(0) "" } } } ["DISPLAY_PROPERTIES"]=> array(8) { ["AUTHOR_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "37" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(6) "Author" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28298" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(243) "<p>Anastasia A. Yakubova<sup>1,2</sup>, Pavel M. Talianov<sup>3</sup>, Mikhail V. Zyuzin<sup>3</sup>, Albert R. Muslimov<sup>1,2</sup>, Alexander S. Timin<sup>1</sup> </p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(171) "Anastasia A. Yakubova1,2, Pavel M. Talianov3, Mikhail V. Zyuzin3, Albert R. Muslimov1,2, Alexander S. Timin1
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(6) "Author" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(171) "Anastasia A. Yakubova1,2, Pavel M. Talianov3, Mikhail V. Zyuzin3, Albert R. Muslimov1,2, Alexander S. Timin1
" } ["SUMMARY_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "39" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28300" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(2252) "<p style="text-align: justify;">For the effective delivering of genetic material to target cells, it’s necessary to provide sustainable conditions of transfection and protect it from intracellular microenvironment, pH, enzymes. It’s possible with a method of creating micro-sized carriers by new method of “soft lithography”, allowing to stamp polymer carriers with precise size and shape. This way passes undesirable stage of fabrication of polyelectrolyte carriers, such as synthesis of template, application of polymers on this template, deletion of the template. The process is becoming more controlled and effective, packing the cargo and the medium does not depend on affinity of the cargo to the template, charge of the polymers. In the research process hydrophobic and hydrophilic structures from 10nm to 5µm were packed, which tend to be unstable in external environment. Also sterile carriers were fabricated. The purpose of the study is to assess stability of the micro-carriers, toxicity for living system and ability to save the cargo over definite time.</p> <h3>Materials and methods</h3> <p style="text-align: justify;">Silicon PDMS mold for micro-carriers fabrication was used. Stability was assessed with a confocal microscope and specrofluorometry. The following polymers were tested: polylactid PLA, Polycaprolaction PCL, polymethylmethacrylate PMMA. We used several test mediums: water, phosphate-buffered saline, human serum. Toxicity was determined with CT-26 cell line.</p> <h3>Results</h3> <p style="text-align: justify;">Experimental results showed that polymer micro-carriers are not toxic for cells. Micro-carriers were able to 10 nm structures, while maintaining their medium.</p> <h3>Conclusions</h3> <p style="text-align: justify;">Fabrication of micro-sized carriers by “soft lythograpy” is possibly effective for packing and saving of genetic material with its microenvironment.</p> <h2>Keywords</h2> <p style="text-align: justify;">Microcarriers, micro-sized carriers, microcapsules, delivery, lythography, genetic material, polymer.</p> " ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(2094) "For the effective delivering of genetic material to target cells, it’s necessary to provide sustainable conditions of transfection and protect it from intracellular microenvironment, pH, enzymes. It’s possible with a method of creating micro-sized carriers by new method of “soft lithography”, allowing to stamp polymer carriers with precise size and shape. This way passes undesirable stage of fabrication of polyelectrolyte carriers, such as synthesis of template, application of polymers on this template, deletion of the template. The process is becoming more controlled and effective, packing the cargo and the medium does not depend on affinity of the cargo to the template, charge of the polymers. In the research process hydrophobic and hydrophilic structures from 10nm to 5µm were packed, which tend to be unstable in external environment. Also sterile carriers were fabricated. The purpose of the study is to assess stability of the micro-carriers, toxicity for living system and ability to save the cargo over definite time.
Materials and methods
Silicon PDMS mold for micro-carriers fabrication was used. Stability was assessed with a confocal microscope and specrofluorometry. The following polymers were tested: polylactid PLA, Polycaprolaction PCL, polymethylmethacrylate PMMA. We used several test mediums: water, phosphate-buffered saline, human serum. Toxicity was determined with CT-26 cell line.
Results
Experimental results showed that polymer micro-carriers are not toxic for cells. Micro-carriers were able to 10 nm structures, while maintaining their medium.
Conclusions
Fabrication of micro-sized carriers by “soft lythograpy” is possibly effective for packing and saving of genetic material with its microenvironment.
Keywords
Microcarriers, micro-sized carriers, microcapsules, delivery, lythography, genetic material, polymer.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(2094) "For the effective delivering of genetic material to target cells, it’s necessary to provide sustainable conditions of transfection and protect it from intracellular microenvironment, pH, enzymes. It’s possible with a method of creating micro-sized carriers by new method of “soft lithography”, allowing to stamp polymer carriers with precise size and shape. This way passes undesirable stage of fabrication of polyelectrolyte carriers, such as synthesis of template, application of polymers on this template, deletion of the template. The process is becoming more controlled and effective, packing the cargo and the medium does not depend on affinity of the cargo to the template, charge of the polymers. In the research process hydrophobic and hydrophilic structures from 10nm to 5µm were packed, which tend to be unstable in external environment. Also sterile carriers were fabricated. The purpose of the study is to assess stability of the micro-carriers, toxicity for living system and ability to save the cargo over definite time.
Materials and methods
Silicon PDMS mold for micro-carriers fabrication was used. Stability was assessed with a confocal microscope and specrofluorometry. The following polymers were tested: polylactid PLA, Polycaprolaction PCL, polymethylmethacrylate PMMA. We used several test mediums: water, phosphate-buffered saline, human serum. Toxicity was determined with CT-26 cell line.
Results
Experimental results showed that polymer micro-carriers are not toxic for cells. Micro-carriers were able to 10 nm structures, while maintaining their medium.
Conclusions
Fabrication of micro-sized carriers by “soft lythograpy” is possibly effective for packing and saving of genetic material with its microenvironment.
Keywords
Microcarriers, micro-sized carriers, microcapsules, delivery, lythography, genetic material, polymer.
" } ["DOI"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "28" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2016-04-06 14:11:12" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(3) "DOI" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(3) "DOI" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28297" ["VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(3) "DOI" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["DISPLAY_VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" } ["NAME_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "40" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:49:47" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(4) "Name" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "NAME_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28301" ["VALUE"]=> string(132) "GC-15. Investigation of the characteristics of micro-sized carriers, using “soft lithography” for packaging of genetic material " ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(132) "GC-15. Investigation of the characteristics of micro-sized carriers, using “soft lithography” for packaging of genetic material " ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(4) "Name" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["DISPLAY_VALUE"]=> string(132) "GC-15. Investigation of the characteristics of micro-sized carriers, using “soft lithography” for packaging of genetic material " } ["ORGANIZATION_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "38" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Organization" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28299" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(587) "<p><sup>1</sup> Peter The Great St. Petersburg Polytechnic University, St. Petersburg, Russia<br> <sup>2</sup> Alferov Institution of Higher Education and Science Saint Petersburg National Research Academic University of the Russian Academy of Sciences, St. Petersburg, Russia<br> <sup>3</sup> School of Physics and Engineering, ITMO University, St. Petersburg, Russia</p><br> <p><b>Correspondence:</b><br> Anastasia A. Yakubova, phone: +7 (981) 795-72-41, e-mail: yakubova.nastya@bk.ru</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(491) "1 Peter The Great St. Petersburg Polytechnic University, St. Petersburg, Russia
2 Alferov Institution of Higher Education and Science Saint Petersburg National Research Academic University of the Russian Academy of Sciences, St. Petersburg, Russia
3 School of Physics and Engineering, ITMO University, St. Petersburg, Russia
Correspondence:
Anastasia A. Yakubova, phone: +7 (981) 795-72-41, e-mail: yakubova.nastya@bk.ru
1 Peter The Great St. Petersburg Polytechnic University, St. Petersburg, Russia
2 Alferov Institution of Higher Education and Science Saint Petersburg National Research Academic University of the Russian Academy of Sciences, St. Petersburg, Russia
3 School of Physics and Engineering, ITMO University, St. Petersburg, Russia
Correspondence:
Anastasia A. Yakubova, phone: +7 (981) 795-72-41, e-mail: yakubova.nastya@bk.ru
Анастасия А. Якубова1,2, Павел М. Тальянов3, Михаил В. Зюзин3, Альберт Р. Муслимов1,2, Александр С. Тимин1
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Авторы" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(242) "Анастасия А. Якубова1,2, Павел М. Тальянов3, Михаил В. Зюзин3, Альберт Р. Муслимов1,2, Александр С. Тимин1
" } ["SUMMARY_RU"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "27" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28296" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(4424) "<p style="text-align: justify;">Для эффективной доставки генетического материала в клетки, необходимо обеспечить благоприятные условия проведения трансфекции, защитить его от внутриклеточного микроокружения, pH среды, ферментов. Это реализуемо при запаковке его в микроносители новым методом – «мягкая литография», позволяющая «отпечатывать» на мягкой силиконовой подложке с определенной микроструктурой полимерные микрокапсулы заданной величины и формы. Этот способ минует такие нежелательные стадии производства полиэлектролитных микрокапсул как: образование ядра, нанесение полимеров на поверхность ядра и последующее его удаление. Процесс производства становится более контролируемым и эффективным, при этом запаковка веществ и среды в микрокапсулы не зависит от сродства веществ к ядру, заряда носителя. В процессе исследования были успешно запакованы гидрофобные и гидрофильные структуры от 10 нм до 5 мкм, являющиеся неустойчивыми в условиях окружающей среды. Был проведен синтез стерильных микрокапсул. Цель исследования: оценить стабильность микрокапсул, токсичность для живых сред и способность удерживать материал в течении определенного времени.</p> <h3>Материалы и методы</h3> <p style="text-align: justify;">Использовали силиконовую подложку для синтеза микрокапсул. Стабильность изучалась на конфокальном микроскопе, спектрофлюориметре. Полимеры: полилактид (ПЛА), поликапролактон (ПКЛ), полиметилметакрилат (ПММА). Среды, в которых исследовалась стабильность: вода, натрий-фосфатный буфер, сыворотка крови. Токсичность определялась <i>in vitro</i> на клетках СТ-26.</p> <h3>Результаты</h3> <p style="text-align: justify;">Полимерные микрокапсулы не являются токсичными для клеток. Данные носители продемонстрировали высокую удерживающую способность, сохраняя свойства инкапсулированных биологически активных соединений в течение длительного периода времени (>7 дней).</p> <h3>Выводы</h3> <p style="text-align: justify;">Таким образом, производство микрокапсул методом «мягкой литографии» может быть эффективным для инкапсулирования генетического материала с сохранением его биологической активности.</p> <h3>Благодарность</h3> <p style="text-align: justify;">Работа выполнена при поддержке Российского Научного Фонда (грант № 20-45-01012).</p> <h2>Ключевые слова</h2> <p style="text-align: justify;">Микрокапсулы, доставка, литография, генетический материал, полимеры, носители.</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(4217) "Для эффективной доставки генетического материала в клетки, необходимо обеспечить благоприятные условия проведения трансфекции, защитить его от внутриклеточного микроокружения, pH среды, ферментов. Это реализуемо при запаковке его в микроносители новым методом – «мягкая литография», позволяющая «отпечатывать» на мягкой силиконовой подложке с определенной микроструктурой полимерные микрокапсулы заданной величины и формы. Этот способ минует такие нежелательные стадии производства полиэлектролитных микрокапсул как: образование ядра, нанесение полимеров на поверхность ядра и последующее его удаление. Процесс производства становится более контролируемым и эффективным, при этом запаковка веществ и среды в микрокапсулы не зависит от сродства веществ к ядру, заряда носителя. В процессе исследования были успешно запакованы гидрофобные и гидрофильные структуры от 10 нм до 5 мкм, являющиеся неустойчивыми в условиях окружающей среды. Был проведен синтез стерильных микрокапсул. Цель исследования: оценить стабильность микрокапсул, токсичность для живых сред и способность удерживать материал в течении определенного времени.
Материалы и методы
Использовали силиконовую подложку для синтеза микрокапсул. Стабильность изучалась на конфокальном микроскопе, спектрофлюориметре. Полимеры: полилактид (ПЛА), поликапролактон (ПКЛ), полиметилметакрилат (ПММА). Среды, в которых исследовалась стабильность: вода, натрий-фосфатный буфер, сыворотка крови. Токсичность определялась in vitro на клетках СТ-26.
Результаты
Полимерные микрокапсулы не являются токсичными для клеток. Данные носители продемонстрировали высокую удерживающую способность, сохраняя свойства инкапсулированных биологически активных соединений в течение длительного периода времени (>7 дней).
Выводы
Таким образом, производство микрокапсул методом «мягкой литографии» может быть эффективным для инкапсулирования генетического материала с сохранением его биологической активности.
Благодарность
Работа выполнена при поддержке Российского Научного Фонда (грант № 20-45-01012).
Ключевые слова
Микрокапсулы, доставка, литография, генетический материал, полимеры, носители.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(4217) "Для эффективной доставки генетического материала в клетки, необходимо обеспечить благоприятные условия проведения трансфекции, защитить его от внутриклеточного микроокружения, pH среды, ферментов. Это реализуемо при запаковке его в микроносители новым методом – «мягкая литография», позволяющая «отпечатывать» на мягкой силиконовой подложке с определенной микроструктурой полимерные микрокапсулы заданной величины и формы. Этот способ минует такие нежелательные стадии производства полиэлектролитных микрокапсул как: образование ядра, нанесение полимеров на поверхность ядра и последующее его удаление. Процесс производства становится более контролируемым и эффективным, при этом запаковка веществ и среды в микрокапсулы не зависит от сродства веществ к ядру, заряда носителя. В процессе исследования были успешно запакованы гидрофобные и гидрофильные структуры от 10 нм до 5 мкм, являющиеся неустойчивыми в условиях окружающей среды. Был проведен синтез стерильных микрокапсул. Цель исследования: оценить стабильность микрокапсул, токсичность для живых сред и способность удерживать материал в течении определенного времени.
Материалы и методы
Использовали силиконовую подложку для синтеза микрокапсул. Стабильность изучалась на конфокальном микроскопе, спектрофлюориметре. Полимеры: полилактид (ПЛА), поликапролактон (ПКЛ), полиметилметакрилат (ПММА). Среды, в которых исследовалась стабильность: вода, натрий-фосфатный буфер, сыворотка крови. Токсичность определялась in vitro на клетках СТ-26.
Результаты
Полимерные микрокапсулы не являются токсичными для клеток. Данные носители продемонстрировали высокую удерживающую способность, сохраняя свойства инкапсулированных биологически активных соединений в течение длительного периода времени (>7 дней).
Выводы
Таким образом, производство микрокапсул методом «мягкой литографии» может быть эффективным для инкапсулирования генетического материала с сохранением его биологической активности.
Благодарность
Работа выполнена при поддержке Российского Научного Фонда (грант № 20-45-01012).
Ключевые слова
Микрокапсулы, доставка, литография, генетический материал, полимеры, носители.
" } ["ORGANIZATION_RU"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "26" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(22) "Организации" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28295" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(804) "<p><sup>1</sup> Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого, Санкт-Петербург, Россия<br> <sup>2</sup> Санкт-Петербургский национальный исследовательский Академический университет имени Ж. И. Алферова Российской академии наук, Санкт-Петербург, Россия<br> <sup>3</sup> Санкт-Петербургский национальный исследовательский университет информационных технологий, механики и оптики, Санкт-Петербург, Россия</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(744) "1 Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого, Санкт-Петербург, Россия
2 Санкт-Петербургский национальный исследовательский Академический университет имени Ж. И. Алферова Российской академии наук, Санкт-Петербург, Россия
3 Санкт-Петербургский национальный исследовательский университет информационных технологий, механики и оптики, Санкт-Петербург, Россия
1 Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого, Санкт-Петербург, Россия
2 Санкт-Петербургский национальный исследовательский Академический университет имени Ж. И. Алферова Российской академии наук, Санкт-Петербург, Россия
3 Санкт-Петербургский национальный исследовательский университет информационных технологий, механики и оптики, Санкт-Петербург, Россия
Наталья Н. Сударева1,2, Ольга М. Суворова1, Дмитрий Н. Суслов3, Олег В. Галибин2, Александр Д. Вилесов1,2
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Авторы" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["ORGANIZATION_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "26" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(22) "Организации" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28285" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(783) "<p><sup>1</sup> Институт высокомолекулярных соединений РАН, Санкт-Петербург, Россия<br> <sup>2</sup> НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р. М. Горбачевой, Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И. П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия<br> <sup>3</sup> Российский научный центр радиологии и хирургических технологий им. акад. А. М. Гранова, Санкт-Петербург, Россия</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(723) "1 Институт высокомолекулярных соединений РАН, Санкт-Петербург, Россия
2 НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р. М. Горбачевой, Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И. П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия
3 Российский научный центр радиологии и хирургических технологий
им. акад. А. М. Гранова, Санкт-Петербург, Россия
Доксорубицин (ДОХ) – водорастворимый антрациклиновый антибиотик, обладающий высокой противораковой эффективностью. Уменьшения концентрации ДОХ в крови ниже кардиотоксического уровня в процессе терапии можно добиться, формируя депо, содержащее системы доставки ДОХ с пролонгированным высвобождением лекарства. Для этих целей использовали кальций карбонатные пористые ватериты, допированные полианионом декстран сульфатом (ДекС). Субмикронные размеры носителей не позволяют свободно включаться им в кровеносное русло. Распространяется токсическое лекарство по организму только после попадания в кровь в результате высвобождения из систем доставки (СД). Внутрибрюшинное введение крысам с перевитой гепатомой Зайделя ДОХ-содержащих систем доставки позволило оценить эффективную концентрацию ДОХ, тормозящую рост опухоли и уменьшающую объем асцитной жидкости.
Методы и результаты
Динамику поступления ДОХ в кровь здоровых крыс после внутрибрюшинного введения ДОХ в СД состоящих из пористых СаСО3 ядер, покрытых ДекС, определяли при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Реакцию экспериментальных крыс с перевитой гепатомой Зайделя контролировали на основании результатов физикального осмотра и аутопсии крыс в течение 21 дня после введения СД. Показано, что внутрибрюшное введение в крыс с привитой гепатомой Зайделя 2 мг ДОХ в системе доставки на базе допированных декстрансульфатом пористых кальций карбонатных ядер увеличивает в 1,75 раз продолжительность жизни и вдвое уменьшает объем асцита у экспериментальных животных. Более эффективного подавления опухоли можно ожидать, увеличивая дозу ДОХ до 4 мг на животное. Динамику появления ДОХ в плазме крови после внутрибрюшинного введения здоровым крысам лекарства в СД сравнивали с динамикой свободного ДОХ, который через 2 дня после введения крысам исчезает из плазмы крови. Как видно из рис. 1, использование СД позволяет продлевать присутствие лекарства в крови. Пористые карбонатные ядра, покрытые декстрансульфатом, высвобождают ДОХ в течение 2 недель в концентрациях, ниже кардиотоксичной.
Выводы
При использовании систем доставки ДОХ на базе кальций карбонатных пористых ядер, покрытых декстрансульфатом, негативных реакций у крыс не обнаружено, что подтверждено поведением и физическим состоянием подопытных животных, а также результатами аутопсии. Следовательно, исследованные системы доставки могут быть использованы для пролонгированной регионарной доставки противоопухолевого препарата ДОХ.
Ключевые слова
Доксорубицин, системы доставки лекарств, СаСО3, декстрансульфат, гепатома Зайделя.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["DOI"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "28" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2016-04-06 14:11:12" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(3) "DOI" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(3) "DOI" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28287" ["VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(3) "DOI" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["AUTHOR_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "37" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(6) "Author" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28288" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(237) "<p>Natalia N. Sudareva<sup>1,2</sup>, Olga M. Suvorova<sup>1</sup>, Dmitry N. Suslov<sup>3</sup>, Oleg V. Galibin<sup>2</sup>, Alexander D. Vilesov<sup>1,2</sup></p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(165) "Natalia N. Sudareva1,2, Olga M. Suvorova1, Dmitry N. Suslov3, Oleg V. Galibin2, Alexander D. Vilesov1,2
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(6) "Author" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["ORGANIZATION_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "38" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Organization" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28289" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(530) "<p><sup>1</sup> Institute of Macromolecular Compounds, Russian Academy of Sciences, St. Petersburg, Russia<br> <sup>2</sup> RM Gorbacheva Research Institute, Pavlov University, St. Petersburg, Russia<br> <sup>3</sup> A. M. Granov Russian Research Center of Radiology and Surgical Technologies, St. Petersburg, Russia </p><br> <p><b>Correspondence:</b><br> Dr. Natalia N. Sudareva, phone:+7 (921) 921-35-65, e-mail: nnsas@mail.ru</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(434) "1 Institute of Macromolecular Compounds, Russian Academy of Sciences, St. Petersburg, Russia
2 RM Gorbacheva Research
Institute, Pavlov University, St. Petersburg, Russia
3 A. M. Granov Russian Research Center of Radiology and Surgical Technologies, St. Petersburg, Russia
Correspondence:
Dr. Natalia N. Sudareva, phone:+7 (921) 921-35-65, e-mail: nnsas@mail.ru
Doxorubicin (DOX) is a water-soluble anthracycline antibiotic with high anti-cancer efficacy. Reducing the concentration of DOX in the blood below the cardiotoxic level during therapy can be achieved by forming a depot containing DOX delivery systems with prolonged drug release. For these purposes, calcium carbonate porous vaterites coated with polyanion dextran sulfate (DexS) were used. The submicron size of the carriers does not allow them to be freely included in the bloodstream. The toxic drug spreads through the body only after it enters the blood as a result of release from the delivery systems (DS). Intraperitoneal administration of DOX-containing DS to rats with transplanted Seidel’s hepatoma allowed us to evaluate the effective concentration of DOX, which inhibits tumor growth and reduces the volume of ascitic fluid.
Methods and results
The dynamics of DOX intake into the blood of healthy rats after intraperitoneal administration of DOX in DS based on submicron DexS-coated porous CaCO3 cores was determined by HPLC. The reaction of experimental rats with Seidel’s hepatoma inoculated within 21 days after DS administration was controlled on the basis of physical examination results, as well as autopsy of rats.
Results
It was shown that intraperitoneal administration of 2 mg of DOX in a DS in rats increases the life expectancy by 1.75 times and reduces the volume of ascites in experimental animals by half. A more effective suppression of the tumor can be expected by increasing the dose of DOX to 4 mg per animal. The dynamics of the appearance of DOX in blood plasma after intraperitoneal administration of the drug in DS to healthy rats was compared with free DOX dynamics. 2 days after the administration of free DOX to rats, it disappears from the blood plasma. As can be seen from Figure 1, the use of DS allows us to prolong the presence of the drug in the blood. Porous carbonate cores coated with dextran sulfate showed DOX release at theconcentrations below cardiotoxic within two weeks.
Figure 1. DOX concentrations in rats’ plasma after intraperitoneal administration. 1 – free DOX; 2 – CaCO3+DexS+DOX
Conclusion
No negative reactions were detected in rats using DS, which was confirmed by the behavior and physical condition of the experimental animals, as well as the results of autopsy. Therefore, the studied DS based on CaCO3 carbonate cores coated by DexS can be used for prolonged regional delivery of the DOX antitumor drug.
Keywords
Doxorubicin, drug delivery system, CaCO3, dextran sulfate, Seidel’s hepatoma.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["NAME_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "40" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:49:47" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(4) "Name" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "NAME_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28291" ["VALUE"]=> string(97) "GC-14. CaCO3 dextran sulfate-coated vaterites as a system for regional doxorubicin administration" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(97) "GC-14. CaCO3 dextran sulfate-coated vaterites as a system for regional doxorubicin administration" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(4) "Name" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["FULL_TEXT_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "42" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-07 20:29:18" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(23) "Полный текст" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(12) "FULL_TEXT_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(23) "Полный текст" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["PDF_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "43" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-09 16:05:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(7) "PDF RUS" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(6) "PDF_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "F" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(18) "doc, txt, rtf, pdf" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28292" ["VALUE"]=> string(4) "2653" ["DESCRIPTION"]=> NULL ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(4) "2653" ["~DESCRIPTION"]=> NULL ["~NAME"]=> string(7) "PDF RUS" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["PDF_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "44" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-09 16:05:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(7) "PDF ENG" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(6) "PDF_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "F" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(18) "doc, txt, rtf, pdf" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28293" ["VALUE"]=> string(4) "2654" ["DESCRIPTION"]=> NULL ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(4) "2654" ["~DESCRIPTION"]=> NULL ["~NAME"]=> string(7) "PDF ENG" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["NAME_LONG"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "45" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2023-04-13 00:55:00" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(72) "Название (для очень длинных заголовков)" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "NAME_LONG" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TYPE"]=> string(4) "HTML" ["TEXT"]=> string(0) "" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(80) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(72) "Название (для очень длинных заголовков)" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TYPE"]=> string(4) "HTML" ["TEXT"]=> string(0) "" } } } ["DISPLAY_PROPERTIES"]=> array(8) { ["AUTHOR_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "37" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(6) "Author" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28288" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(237) "<p>Natalia N. Sudareva<sup>1,2</sup>, Olga M. Suvorova<sup>1</sup>, Dmitry N. Suslov<sup>3</sup>, Oleg V. Galibin<sup>2</sup>, Alexander D. Vilesov<sup>1,2</sup></p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(165) "
Natalia N. Sudareva1,2, Olga M. Suvorova1, Dmitry N. Suslov3, Oleg V. Galibin2, Alexander D. Vilesov1,2
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(6) "Author" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(165) "Natalia N. Sudareva1,2, Olga M. Suvorova1, Dmitry N. Suslov3, Oleg V. Galibin2, Alexander D. Vilesov1,2
" } ["SUMMARY_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "39" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28290" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(3289) "<p style="text-align: justify;"> Doxorubicin (DOX) is a water-soluble anthracycline antibiotic with high anti-cancer efficacy. Reducing the concentration of DOX in the blood below the cardiotoxic level during therapy can be achieved by forming a depot containing DOX delivery systems with prolonged drug release. For these purposes, calcium carbonate porous vaterites coated with polyanion dextran sulfate (DexS) were used. The submicron size of the carriers does not allow them to be freely included in the bloodstream. The toxic drug spreads through the body only after it enters the blood as a result of release from the delivery systems (DS). Intraperitoneal administration of DOX-containing DS to rats with transplanted Seidel’s hepatoma allowed us to evaluate the effective concentration of DOX, which inhibits tumor growth and reduces the volume of ascitic fluid. </p> <h3>Methods and results</h3> <p style="text-align: justify;"> The dynamics of DOX intake into the blood of healthy rats after intraperitoneal administration of DOX in DS based on submicron DexS-coated porous CaCO<sub>3</sub> cores was determined by HPLC. The reaction of experimental rats with Seidel’s hepatoma inoculated within 21 days after DS administration was controlled on the basis of physical examination results, as well as autopsy of rats. </p> <h3>Results</h3> <p style="text-align: justify;"> It was shown that intraperitoneal administration of 2 mg of DOX in a DS in rats increases the life expectancy by 1.75 times and reduces the volume of ascites in experimental animals by half. A more effective suppression of the tumor can be expected by increasing the dose of DOX to 4 mg per animal. The dynamics of the appearance of DOX in blood plasma after intraperitoneal administration of the drug in DS to healthy rats was compared with free DOX dynamics. 2 days after the administration of free DOX to rats, it disappears from the blood plasma. As can be seen from Figure 1, the use of DS allows us to prolong the presence of the drug in the blood. Porous carbonate cores coated with dextran sulfate showed DOX release at theconcentrations below cardiotoxic within two weeks. </p> <img alt="Sudareva-fig01.jpg" src="/upload/medialibrary/381/sudareva_fig01.jpg" title="Sudareva-fig01.jpg"> <p class="Table_sign"> Figure 1. DOX concentrations in rats’ plasma after intraperitoneal administration. 1 – free DOX; 2 – CaCO<sub>3</sub>+DexS+DOX </p> <h3>Conclusion</h3> <p style="text-align: justify;"> No negative reactions were detected in rats using DS, which was confirmed by the behavior and physical condition of the experimental animals, as well as the results of autopsy. Therefore, the studied DS based on CaCO<sub>3</sub> carbonate cores coated by DexS can be used for prolonged regional delivery of the DOX antitumor drug. </p> <h2>Keywords</h2> <p style="text-align: justify;"> Doxorubicin, drug delivery system, CaCO<sub>3</sub>, dextran sulfate, Seidel’s hepatoma. </p> <br>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(3019) "Doxorubicin (DOX) is a water-soluble anthracycline antibiotic with high anti-cancer efficacy. Reducing the concentration of DOX in the blood below the cardiotoxic level during therapy can be achieved by forming a depot containing DOX delivery systems with prolonged drug release. For these purposes, calcium carbonate porous vaterites coated with polyanion dextran sulfate (DexS) were used. The submicron size of the carriers does not allow them to be freely included in the bloodstream. The toxic drug spreads through the body only after it enters the blood as a result of release from the delivery systems (DS). Intraperitoneal administration of DOX-containing DS to rats with transplanted Seidel’s hepatoma allowed us to evaluate the effective concentration of DOX, which inhibits tumor growth and reduces the volume of ascitic fluid.
Methods and results
The dynamics of DOX intake into the blood of healthy rats after intraperitoneal administration of DOX in DS based on submicron DexS-coated porous CaCO3 cores was determined by HPLC. The reaction of experimental rats with Seidel’s hepatoma inoculated within 21 days after DS administration was controlled on the basis of physical examination results, as well as autopsy of rats.
Results
It was shown that intraperitoneal administration of 2 mg of DOX in a DS in rats increases the life expectancy by 1.75 times and reduces the volume of ascites in experimental animals by half. A more effective suppression of the tumor can be expected by increasing the dose of DOX to 4 mg per animal. The dynamics of the appearance of DOX in blood plasma after intraperitoneal administration of the drug in DS to healthy rats was compared with free DOX dynamics. 2 days after the administration of free DOX to rats, it disappears from the blood plasma. As can be seen from Figure 1, the use of DS allows us to prolong the presence of the drug in the blood. Porous carbonate cores coated with dextran sulfate showed DOX release at theconcentrations below cardiotoxic within two weeks.
Figure 1. DOX concentrations in rats’ plasma after intraperitoneal administration. 1 – free DOX; 2 – CaCO3+DexS+DOX
Conclusion
No negative reactions were detected in rats using DS, which was confirmed by the behavior and physical condition of the experimental animals, as well as the results of autopsy. Therefore, the studied DS based on CaCO3 carbonate cores coated by DexS can be used for prolonged regional delivery of the DOX antitumor drug.
Keywords
Doxorubicin, drug delivery system, CaCO3, dextran sulfate, Seidel’s hepatoma.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(3019) "
Doxorubicin (DOX) is a water-soluble anthracycline antibiotic with high anti-cancer efficacy. Reducing the concentration of DOX in the blood below the cardiotoxic level during therapy can be achieved by forming a depot containing DOX delivery systems with prolonged drug release. For these purposes, calcium carbonate porous vaterites coated with polyanion dextran sulfate (DexS) were used. The submicron size of the carriers does not allow them to be freely included in the bloodstream. The toxic drug spreads through the body only after it enters the blood as a result of release from the delivery systems (DS). Intraperitoneal administration of DOX-containing DS to rats with transplanted Seidel’s hepatoma allowed us to evaluate the effective concentration of DOX, which inhibits tumor growth and reduces the volume of ascitic fluid.
Methods and results
The dynamics of DOX intake into the blood of healthy rats after intraperitoneal administration of DOX in DS based on submicron DexS-coated porous CaCO3 cores was determined by HPLC. The reaction of experimental rats with Seidel’s hepatoma inoculated within 21 days after DS administration was controlled on the basis of physical examination results, as well as autopsy of rats.
Results
It was shown that intraperitoneal administration of 2 mg of DOX in a DS in rats increases the life expectancy by 1.75 times and reduces the volume of ascites in experimental animals by half. A more effective suppression of the tumor can be expected by increasing the dose of DOX to 4 mg per animal. The dynamics of the appearance of DOX in blood plasma after intraperitoneal administration of the drug in DS to healthy rats was compared with free DOX dynamics. 2 days after the administration of free DOX to rats, it disappears from the blood plasma. As can be seen from Figure 1, the use of DS allows us to prolong the presence of the drug in the blood. Porous carbonate cores coated with dextran sulfate showed DOX release at theconcentrations below cardiotoxic within two weeks.
Figure 1. DOX concentrations in rats’ plasma after intraperitoneal administration. 1 – free DOX; 2 – CaCO3+DexS+DOX
Conclusion
No negative reactions were detected in rats using DS, which was confirmed by the behavior and physical condition of the experimental animals, as well as the results of autopsy. Therefore, the studied DS based on CaCO3 carbonate cores coated by DexS can be used for prolonged regional delivery of the DOX antitumor drug.
Keywords
Doxorubicin, drug delivery system, CaCO3, dextran sulfate, Seidel’s hepatoma.
" } ["DOI"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "28" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2016-04-06 14:11:12" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(3) "DOI" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(3) "DOI" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28287" ["VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(3) "DOI" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["DISPLAY_VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" } ["NAME_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "40" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:49:47" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(4) "Name" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "NAME_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28291" ["VALUE"]=> string(97) "GC-14. CaCO3 dextran sulfate-coated vaterites as a system for regional doxorubicin administration" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(97) "GC-14. CaCO3 dextran sulfate-coated vaterites as a system for regional doxorubicin administration" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(4) "Name" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["DISPLAY_VALUE"]=> string(97) "GC-14. CaCO3 dextran sulfate-coated vaterites as a system for regional doxorubicin administration" } ["ORGANIZATION_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "38" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Organization" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28289" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(530) "<p><sup>1</sup> Institute of Macromolecular Compounds, Russian Academy of Sciences, St. Petersburg, Russia<br> <sup>2</sup> RM Gorbacheva Research Institute, Pavlov University, St. Petersburg, Russia<br> <sup>3</sup> A. M. Granov Russian Research Center of Radiology and Surgical Technologies, St. Petersburg, Russia </p><br> <p><b>Correspondence:</b><br> Dr. Natalia N. Sudareva, phone:+7 (921) 921-35-65, e-mail: nnsas@mail.ru</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(434) "
1 Institute of Macromolecular Compounds, Russian Academy of Sciences, St. Petersburg, Russia
2 RM Gorbacheva Research
Institute, Pavlov University, St. Petersburg, Russia
3 A. M. Granov Russian Research Center of Radiology and Surgical Technologies, St. Petersburg, Russia
Correspondence:
Dr. Natalia N. Sudareva, phone:+7 (921) 921-35-65, e-mail: nnsas@mail.ru
1 Institute of Macromolecular Compounds, Russian Academy of Sciences, St. Petersburg, Russia
2 RM Gorbacheva Research
Institute, Pavlov University, St. Petersburg, Russia
3 A. M. Granov Russian Research Center of Radiology and Surgical Technologies, St. Petersburg, Russia
Correspondence:
Dr. Natalia N. Sudareva, phone:+7 (921) 921-35-65, e-mail: nnsas@mail.ru
Наталья Н. Сударева1,2, Ольга М. Суворова1, Дмитрий Н. Суслов3, Олег В. Галибин2, Александр Д. Вилесов1,2
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Авторы" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(241) "Наталья Н. Сударева1,2, Ольга М. Суворова1, Дмитрий Н. Суслов3, Олег В. Галибин2, Александр Д. Вилесов1,2
" } ["SUMMARY_RU"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "27" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28286" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(5106) "<p style="text-align: justify;">Доксорубицин (ДОХ) – водорастворимый антрациклиновый антибиотик, обладающий высокой противораковой эффективностью. Уменьшения концентрации ДОХ в крови ниже кардиотоксического уровня в процессе терапии можно добиться, формируя депо, содержащее системы доставки ДОХ с пролонгированным высвобождением лекарства. Для этих целей использовали кальций карбонатные пористые ватериты, допированные полианионом декстран сульфатом (ДекС). Субмикронные размеры носителей не позволяют свободно включаться им в кровеносное русло. Распространяется токсическое лекарство по организму только после попадания в кровь в результате высвобождения из систем доставки (СД). Внутрибрюшинное введение крысам с перевитой гепатомой Зайделя ДОХ-содержащих систем доставки позволило оценить эффективную концентрацию ДОХ, тормозящую рост опухоли и уменьшающую объем асцитной жидкости.</p> <h3>Методы и результаты</h3> <p style="text-align: justify;">Динамику поступления ДОХ в кровь здоровых крыс после внутрибрюшинного введения ДОХ в СД состоящих из пористых СаСО<sub>3</sub> ядер, покрытых ДекС, определяли при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Реакцию экспериментальных крыс с перевитой гепатомой Зайделя контролировали на основании результатов физикального осмотра и аутопсии крыс в течение 21 дня после введения СД. Показано, что внутрибрюшное введение в крыс с привитой гепатомой Зайделя 2 мг ДОХ в системе доставки на базе допированных декстрансульфатом пористых кальций карбонатных ядер увеличивает в 1,75 раз продолжительность жизни и вдвое уменьшает объем асцита у экспериментальных животных. Более эффективного подавления опухоли можно ожидать, увеличивая дозу ДОХ до 4 мг на животное. Динамику появления ДОХ в плазме крови после внутрибрюшинного введения здоровым крысам лекарства в СД сравнивали с динамикой свободного ДОХ, который через 2 дня после введения крысам исчезает из плазмы крови. Как видно из рис. 1, использование СД позволяет продлевать присутствие лекарства в крови. Пористые карбонатные ядра, покрытые декстрансульфатом, высвобождают ДОХ в течение 2 недель в концентрациях, ниже кардиотоксичной. </p> <h3>Выводы</h3> <p style="text-align: justify;">При использовании систем доставки ДОХ на базе кальций карбонатных пористых ядер, покрытых декстрансульфатом, негативных реакций у крыс не обнаружено, что подтверждено поведением и физическим состоянием подопытных животных, а также результатами аутопсии. Следовательно, исследованные системы доставки могут быть использованы для пролонгированной регионарной доставки противоопухолевого препарата ДОХ.</p> <h2>Ключевые слова</h2> <p style="text-align: justify;">Доксорубицин, системы доставки лекарств, СаСО<sub>3</sub>, декстрансульфат, гепатома Зайделя.</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(4958) "Доксорубицин (ДОХ) – водорастворимый антрациклиновый антибиотик, обладающий высокой противораковой эффективностью. Уменьшения концентрации ДОХ в крови ниже кардиотоксического уровня в процессе терапии можно добиться, формируя депо, содержащее системы доставки ДОХ с пролонгированным высвобождением лекарства. Для этих целей использовали кальций карбонатные пористые ватериты, допированные полианионом декстран сульфатом (ДекС). Субмикронные размеры носителей не позволяют свободно включаться им в кровеносное русло. Распространяется токсическое лекарство по организму только после попадания в кровь в результате высвобождения из систем доставки (СД). Внутрибрюшинное введение крысам с перевитой гепатомой Зайделя ДОХ-содержащих систем доставки позволило оценить эффективную концентрацию ДОХ, тормозящую рост опухоли и уменьшающую объем асцитной жидкости.
Методы и результаты
Динамику поступления ДОХ в кровь здоровых крыс после внутрибрюшинного введения ДОХ в СД состоящих из пористых СаСО3 ядер, покрытых ДекС, определяли при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Реакцию экспериментальных крыс с перевитой гепатомой Зайделя контролировали на основании результатов физикального осмотра и аутопсии крыс в течение 21 дня после введения СД. Показано, что внутрибрюшное введение в крыс с привитой гепатомой Зайделя 2 мг ДОХ в системе доставки на базе допированных декстрансульфатом пористых кальций карбонатных ядер увеличивает в 1,75 раз продолжительность жизни и вдвое уменьшает объем асцита у экспериментальных животных. Более эффективного подавления опухоли можно ожидать, увеличивая дозу ДОХ до 4 мг на животное. Динамику появления ДОХ в плазме крови после внутрибрюшинного введения здоровым крысам лекарства в СД сравнивали с динамикой свободного ДОХ, который через 2 дня после введения крысам исчезает из плазмы крови. Как видно из рис. 1, использование СД позволяет продлевать присутствие лекарства в крови. Пористые карбонатные ядра, покрытые декстрансульфатом, высвобождают ДОХ в течение 2 недель в концентрациях, ниже кардиотоксичной.
Выводы
При использовании систем доставки ДОХ на базе кальций карбонатных пористых ядер, покрытых декстрансульфатом, негативных реакций у крыс не обнаружено, что подтверждено поведением и физическим состоянием подопытных животных, а также результатами аутопсии. Следовательно, исследованные системы доставки могут быть использованы для пролонгированной регионарной доставки противоопухолевого препарата ДОХ.
Ключевые слова
Доксорубицин, системы доставки лекарств, СаСО3, декстрансульфат, гепатома Зайделя.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(4958) "Доксорубицин (ДОХ) – водорастворимый антрациклиновый антибиотик, обладающий высокой противораковой эффективностью. Уменьшения концентрации ДОХ в крови ниже кардиотоксического уровня в процессе терапии можно добиться, формируя депо, содержащее системы доставки ДОХ с пролонгированным высвобождением лекарства. Для этих целей использовали кальций карбонатные пористые ватериты, допированные полианионом декстран сульфатом (ДекС). Субмикронные размеры носителей не позволяют свободно включаться им в кровеносное русло. Распространяется токсическое лекарство по организму только после попадания в кровь в результате высвобождения из систем доставки (СД). Внутрибрюшинное введение крысам с перевитой гепатомой Зайделя ДОХ-содержащих систем доставки позволило оценить эффективную концентрацию ДОХ, тормозящую рост опухоли и уменьшающую объем асцитной жидкости.
Методы и результаты
Динамику поступления ДОХ в кровь здоровых крыс после внутрибрюшинного введения ДОХ в СД состоящих из пористых СаСО3 ядер, покрытых ДекС, определяли при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Реакцию экспериментальных крыс с перевитой гепатомой Зайделя контролировали на основании результатов физикального осмотра и аутопсии крыс в течение 21 дня после введения СД. Показано, что внутрибрюшное введение в крыс с привитой гепатомой Зайделя 2 мг ДОХ в системе доставки на базе допированных декстрансульфатом пористых кальций карбонатных ядер увеличивает в 1,75 раз продолжительность жизни и вдвое уменьшает объем асцита у экспериментальных животных. Более эффективного подавления опухоли можно ожидать, увеличивая дозу ДОХ до 4 мг на животное. Динамику появления ДОХ в плазме крови после внутрибрюшинного введения здоровым крысам лекарства в СД сравнивали с динамикой свободного ДОХ, который через 2 дня после введения крысам исчезает из плазмы крови. Как видно из рис. 1, использование СД позволяет продлевать присутствие лекарства в крови. Пористые карбонатные ядра, покрытые декстрансульфатом, высвобождают ДОХ в течение 2 недель в концентрациях, ниже кардиотоксичной.
Выводы
При использовании систем доставки ДОХ на базе кальций карбонатных пористых ядер, покрытых декстрансульфатом, негативных реакций у крыс не обнаружено, что подтверждено поведением и физическим состоянием подопытных животных, а также результатами аутопсии. Следовательно, исследованные системы доставки могут быть использованы для пролонгированной регионарной доставки противоопухолевого препарата ДОХ.
Ключевые слова
Доксорубицин, системы доставки лекарств, СаСО3, декстрансульфат, гепатома Зайделя.
" } ["ORGANIZATION_RU"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "26" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(22) "Организации" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28285" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(783) "<p><sup>1</sup> Институт высокомолекулярных соединений РАН, Санкт-Петербург, Россия<br> <sup>2</sup> НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р. М. Горбачевой, Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И. П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия<br> <sup>3</sup> Российский научный центр радиологии и хирургических технологий им. акад. А. М. Гранова, Санкт-Петербург, Россия</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(723) "1 Институт высокомолекулярных соединений РАН, Санкт-Петербург, Россия
2 НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р. М. Горбачевой, Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И. П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия
3 Российский научный центр радиологии и хирургических технологий
им. акад. А. М. Гранова, Санкт-Петербург, Россия
1 Институт высокомолекулярных соединений РАН, Санкт-Петербург, Россия
2 НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р. М. Горбачевой, Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И. П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия
3 Российский научный центр радиологии и хирургических технологий
им. акад. А. М. Гранова, Санкт-Петербург, Россия
Алена И. Шакирова1, Кирилл В. Лепик1, Альберт Р. Муслимов1, Владислав С. Сергеев1, Т. Р. Карпов1, К. И. Аношкин2, Марина О. Попова1, Борис Фезе1,3, Александр Д. Кулагин1
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Авторы" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["ORGANIZATION_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "26" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(22) "Организации" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28235" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(855) "<p><sup>1</sup> НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р. М. Горбачевой, Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И. П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия<br> <sup>2</sup> Медико-генетический научный Центр им. Н. П. Бочкова, Москва, Россия<br> <sup>3</sup> Отдел клеточной и генной терапии, Департамент трансплантации стволовых клеток, Университетский медицинский центр Гамбург-Эппендорф, Гамбург, Германия </p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(795) "1 НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р. М. Горбачевой, Первый Санкт-Петербургский
государственный медицинский университет им. И. П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия
2 Медико-генетический научный Центр им. Н. П. Бочкова, Москва, Россия
3 Отдел клеточной и генной терапии, Департамент трансплантации стволовых клеток, Университетский медицинский центр Гамбург-Эппендорф, Гамбург, Германия
Таргетные инсерции в геном гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) участков белок-кодирующих последовательностей с последующей аутологичной трансплантацией таких клеток является показанием для генной терапии целого ряда моногенных заболеваний человека. Беспрецендентной точностью в этом плане обладает генная терапия с использованием современных инструментов редактирования генома (RNA-guided инженерные нуклеазы, TALEN, ZFN). При их применении процесс протекает за счет так называемого гомологичной репарации (ГР) концов двуцепочечного разрыва (ДР) ДНК, образуемого нуклеазой. Повышение эффективности ГР является актуальной задачей, решение которой позволит с большей эффективностью производить вставки крупных участков ДНК в геном ГСК при доставке донорской репарационной матрицы как вирусными, так и невирусными носителями. Механизмы врожденного иммунного ответа, вызванного повреждением ДНК, представляют собой важный фактор, влияющий на результаты образования ДР, индуцированных инженерными нуклеазами. Целью данной работы является оценка влияния добавления низкомолекулярных ингибиторов TLR9/AIM2/cGAS, STING и антагонистов каспаз A151, H151 и Z-VAD-FMK к культурам первичных ГСК человека на частоту ГР в локусе CCR5 после трансфекции мРНК CCR5-Uco-TALEN.
Материалы и методы
Синтез предварительно кодон-опимизированной посредством деплеции уридина мРНК CCR5-Uco-TALEN был осуществлен компанией Trilink (США). Магнитную селекцию CD34+ ГСК из костного мозга здоровых доноров проводили с помощью набора CD34 MicroBead kit (Miltenyi Biotec). Далее, после активирующей фазы культивирования, осуществляли трансфекцию ГСК мРНК CCR5-Uco-TALEN на приборе Gene Pulser Xcell (BioRad). После трансфекции ГСК в течение суток культивировали при 32°С в среде StemMACS HSC Expansion Media XF (Miltenyi Biotech). Низкомолекулярные ингибиторы A151, H151 и FMK добавляли в концентрациях 4 мкг/мл, 0,5 мкг/мл, и 25 мкг/мл соответственно за 3 часа до электропорации. Долю событий негомологичного (НГР) сшивания концов разрыва в локусе CCR5 оценивали методом цифровой капельной ПЦР по описанному ранее протоколу (Mock et al., 2015) на приборе Bio-Rad QX200. Для оценки аллельной нагрузки репарированных на основе гомологии разрывов дополнительно методом мультиплексной цифровой капельной ПЦР оценивали количество копий референсного гена EPOR и копий гена CCR5 дикого типа (Schwarze et al., 2021). Разницу между количеством копий референсного гена и суммой аллелей НГР и дикого типа считали долей аллелей, репарированных ГР.
Результаты
Согласно полученным результатам суммарная средняя эффективность нокаута гена CCR5, рассчитанная как сумма репарированных НГР и ГР аллелей, составляла от 9 до 53,5%. Добавление в культуру ГСК малой молекулы FMK значительно отразилось на общей эффективности нокаута гена CCR5, которая в этом образце была максимальной и составляла 53,5%, причем увеличилась частота как НГР (27,2%), так и ГР (26,3%) событий по сравнению с контролем. Добавление Н151 на общей эффективности нокаута гена CCR5 не отразилось (33,5%), причем это касалось также соотношения НГР (18,3%) и ГР (15,2%) аллелей в образцах. В образцах ДНК, выделенной из клеток, культивируемых в присутствии A151, эффективность нокаута гена CCR5 была значительно снижена и составила 9%, причем 95,6% нокаутированных аллелей были результатом НГР в локусах разрывов, формируемых CCR5-Uco-TALEN.
Заключение
Выполнено тестирование эффективности добавления малых молекул в плане стимуляции ГР в первичных гемопоэтических стволовых клетках человека при трансфекции мРНК CCR5-Uco-TALEN. FMK представляется наиболее перспективной из них в плане разработки генной терапии на основе комбинации донорской матрицы и инструментов редактирования генома.
Благодарности
Лепик К.В. благодарит за поддержку Российский фонд фундаментальных исследований, грант No. 19-29-04025mk.
Ключевые слова
TALEN, гомологичная репарация, ингибиторы STING, гемопоэтические стволовые клетки.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["DOI"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "28" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2016-04-06 14:11:12" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(3) "DOI" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(3) "DOI" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28237" ["VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(3) "DOI" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["AUTHOR_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "37" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(6) "Author" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28238" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(403) "<p>Alyona I. Shakirova<sup>1</sup>, Kirill V. Lepik<sup>1</sup>, Albert A. Muslimov<sup>1</sup>, Vladislav S. Sergeev<sup>1</sup>, T. R. Karpov<sup>1</sup>, K. I. Anoshkin<sup>2</sup>, Marina O. Popova<sup>1</sup>, Boris Fehse<sup>1,3</sup>, Alexander D. Kulagin<sup>1</sup></p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(283) "Alyona I. Shakirova1, Kirill V. Lepik1, Albert A. Muslimov1, Vladislav S. Sergeev1, T. R. Karpov1, K. I. Anoshkin2, Marina O. Popova1, Boris Fehse1,3, Alexander D. Kulagin1
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(6) "Author" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["ORGANIZATION_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "38" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Organization" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28239" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(510) "<p><sup>1</sup> RM Gorbacheva Research Institute, Pavlov University, St. Petersburg, Russia<br> <sup>2</sup> Research Center for Medical Genetics, Moscow, Russia<br> <sup>3</sup> Research Department of Cell and Gene Therapy, University Medical Center Hamburg-Eppendorf, Hamburg, Germany</p><br> <p><b>Correspondence:</b><br> Dr. Alena Shakirova, phone: +7 (911) 733-51-48, e-mail: alyona.i.shakirova@gmail.com</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(414) "1 RM Gorbacheva Research Institute, Pavlov University, St. Petersburg, Russia
2 Research Center for Medical Genetics, Moscow, Russia
3 Research Department of Cell and Gene Therapy, University Medical Center Hamburg-Eppendorf, Hamburg, Germany
Correspondence:
Dr. Alena Shakirova, phone: +7 (911) 733-51-48, e-mail: alyona.i.shakirova@gmail.com
Targeted insertion of protein-coding sequences regions into the genome of hematopoietic stem cells (HSCs) mediated by engineered nucleases represents a promising platform for gene therapy of monogenic diseases. Homologous recombination (HR) represents the key mechanism for the introduction of genetic material into the double-stranded breaks (DSBs) generated by the targeted nuclease. Increasing the HR efficiency may enable the insertion of large DNA fragments into the HSC genome more efficiently upon delivery of donor repair templates by both viral and non-viral carriers. The mechanisms of DNA damage-induced innate immune response represent an important factor influencing the outcomes of DSB formation induced by engineered nucleases. The aim of this work is to evaluate the effects of adding small-molecule inhibitors of TLR9/AIM2/cGAS, STING and caspase antagonists A151, H151, and Z-VAD-FMK to cultures of primary human HSCs on the HR rate at the CCR5 locus after CCR5-Uco-TALEN mRNA transfection.
Materials and methods
Uridine-depleted CCR5-Uco-TALEN mRNA was synthesized by Trilink. Magnetic selection of CD34 + HSCs from the bone marrow of healthy donors was performed using the CD34 MicroBead kit (Miltenyi Biotec). After the activation phase of cultivation, HSCs were transfected with 25 µg/ml CCR5-Uco-TALEN mRNA using Gene Pulser Xcell (BioRad) device. After transfection, HSCs were cultured for 24 hours at 32°C in a StemMACS HSC Expansion Media XF (Miltenyi Biotech) medium. Small molecule inhibitors A151, H151 and FMK were added at concentrations 4 mkg/ml, 0.5 mkg/ml, and 25 mkg/ml respectively at 3 hours before the electroporation. The proportion of non-homologous end joining (NHEJ) events at the CCR5 locus was estimated by digital droplet PCR (ddPCR) on a QX200 System (Bio-Rad) according to the previously described protocol (Mock et al., 2015). In order to count the burden of HR-repaired CCR5 alleles the copy number of the reference gene EPOR was additionally estimated by the method of multiplex ddPCR (Schwarze et al., 2021). The difference between the copy number of the reference gene and the sum of HR-repaired and wild-type alleles was considered the proportion of alleles repaired by HR.
Results
The total average efficiency of the CCR5 gene knockout, calculated as the sum of the NHEJ- and HR-repaired alleles, ranged from 9 to 53.5%. The addition of a FMK small molecule to the HSCs culture significantly affected not only the CCR5 gene knockout overall efficiency (53.5%), but the frequency of both NHEJ (27.2%) and HR (26.3%) as well. The addition of H151 did not affect the overall efficiency of the CCR5 gene knockout (33.5%), as well as the ratio of NHEJ (18.3%) and HR (15.2%) events in the samples. In the presence of A151 small molecule, the CCR5 knockout efficiency was significantly reduced (9%), and 95.6% of knockout alleles were the result of NHEJ events at DSB formed by CCR5-Uco-TALEN.
Conclusion
The small molecules contribution to the stimulation of HR-mediated DSB repair after the CCR5-Uco-TALEN mRNA transfection of primary hematopoietic stem cells was studied. Z-VAD-FMK seems to be the most promising.
Acknowledgments
K.V. Lepik thanks the Russian Foundation for Basic Research for the support, grant No. 19-29-04025mk.
Keywords
TALEN, homology directed repair, STING inhibitors, HSC.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["NAME_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "40" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:49:47" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(4) "Name" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "NAME_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28241" ["VALUE"]=> string(178) "GC-09. Testing of small molecules for homology-directed repair stimulation at CCR5 locus during the transfection of primary human hematopoietic stem cells by CCR5-Uco-TALEN mRNA " ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(178) "GC-09. Testing of small molecules for homology-directed repair stimulation at CCR5 locus during the transfection of primary human hematopoietic stem cells by CCR5-Uco-TALEN mRNA " ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(4) "Name" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["FULL_TEXT_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "42" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-07 20:29:18" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(23) "Полный текст" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(12) "FULL_TEXT_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(23) "Полный текст" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["PDF_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "43" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-09 16:05:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(7) "PDF RUS" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(6) "PDF_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "F" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(18) "doc, txt, rtf, pdf" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28242" ["VALUE"]=> string(4) "2643" ["DESCRIPTION"]=> NULL ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(4) "2643" ["~DESCRIPTION"]=> NULL ["~NAME"]=> string(7) "PDF RUS" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["PDF_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "44" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-09 16:05:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(7) "PDF ENG" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(6) "PDF_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "F" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(18) "doc, txt, rtf, pdf" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28243" ["VALUE"]=> string(4) "2644" ["DESCRIPTION"]=> NULL ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(4) "2644" ["~DESCRIPTION"]=> NULL ["~NAME"]=> string(7) "PDF ENG" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["NAME_LONG"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "45" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2023-04-13 00:55:00" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(72) "Название (для очень длинных заголовков)" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "NAME_LONG" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TYPE"]=> string(4) "HTML" ["TEXT"]=> string(0) "" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(80) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(72) "Название (для очень длинных заголовков)" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TYPE"]=> string(4) "HTML" ["TEXT"]=> string(0) "" } } } ["DISPLAY_PROPERTIES"]=> array(8) { ["AUTHOR_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "37" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(6) "Author" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28238" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(403) "<p>Alyona I. Shakirova<sup>1</sup>, Kirill V. Lepik<sup>1</sup>, Albert A. Muslimov<sup>1</sup>, Vladislav S. Sergeev<sup>1</sup>, T. R. Karpov<sup>1</sup>, K. I. Anoshkin<sup>2</sup>, Marina O. Popova<sup>1</sup>, Boris Fehse<sup>1,3</sup>, Alexander D. Kulagin<sup>1</sup></p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(283) "
Alyona I. Shakirova1, Kirill V. Lepik1, Albert A. Muslimov1, Vladislav S. Sergeev1, T. R. Karpov1, K. I. Anoshkin2, Marina O. Popova1, Boris Fehse1,3, Alexander D. Kulagin1
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(6) "Author" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(283) "Alyona I. Shakirova1, Kirill V. Lepik1, Albert A. Muslimov1, Vladislav S. Sergeev1, T. R. Karpov1, K. I. Anoshkin2, Marina O. Popova1, Boris Fehse1,3, Alexander D. Kulagin1
" } ["SUMMARY_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "39" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28240" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(3988) "<p style="text-align: justify;"> Targeted insertion of protein-coding sequences regions into the genome of hematopoietic stem cells (HSCs) mediated by engineered nucleases represents a promising platform for gene therapy of monogenic diseases. Homologous recombination (HR) represents the key mechanism for the introduction of genetic material into the double-stranded breaks (DSBs) generated by the targeted nuclease. Increasing the HR efficiency may enable the insertion of large DNA fragments into the HSC genome more efficiently upon delivery of donor repair templates by both viral and non-viral carriers. The mechanisms of DNA damage-induced innate immune response represent an important factor influencing the outcomes of DSB formation induced by engineered nucleases. The aim of this work is to evaluate the effects of adding small-molecule inhibitors of TLR9/AIM2/cGAS, STING and caspase antagonists A151, H151, and Z-VAD-FMK to cultures of primary human HSCs on the HR rate at the <i>CCR5</i> locus after CCR5-Uco-TALEN mRNA transfection. </p> <h3>Materials and methods</h3> <p style="text-align: justify;"> Uridine-depleted CCR5-Uco-TALEN mRNA was synthesized by Trilink. Magnetic selection of CD34 + HSCs from the bone marrow of healthy donors was performed using the CD34 MicroBead kit (Miltenyi Biotec). After the activation phase of cultivation, HSCs were transfected with 25 µg/ml CCR5-Uco-TALEN mRNA using Gene Pulser Xcell (BioRad) device. After transfection, HSCs were cultured for 24 hours at 32°C in a StemMACS HSC Expansion Media XF (Miltenyi Biotech) medium. Small molecule inhibitors A151, H151 and FMK were added at concentrations 4 mkg/ml, 0.5 mkg/ml, and 25 mkg/ml respectively at 3 hours before the electroporation. The proportion of non-homologous end joining (NHEJ) events at the <i>CCR5</i> locus was estimated by digital droplet PCR (ddPCR) on a QX200 System (Bio-Rad) according to the previously described protocol (Mock et al., 2015). In order to count the burden of HR-repaired <i>CCR5</i> alleles the copy number of the reference gene EPOR was additionally estimated by the method of multiplex ddPCR (Schwarze et al., 2021). The difference between the copy number of the reference gene and the sum of HR-repaired and wild-type alleles was considered the proportion of alleles repaired by HR. </p> <h3>Results</h3> <p style="text-align: justify;"> The total average efficiency of the <i>CCR5</i> gene knockout, calculated as the sum of the NHEJ- and HR-repaired alleles, ranged from 9 to 53.5%. The addition of a FMK small molecule to the HSCs culture significantly affected not only the <i>CCR5</i> gene knockout overall efficiency (53.5%), but the frequency of both NHEJ (27.2%) and HR (26.3%) as well. The addition of H151 did not affect the overall efficiency of the <i>CCR5</i> gene knockout (33.5%), as well as the ratio of NHEJ (18.3%) and HR (15.2%) events in the samples. In the presence of A151 small molecule, the <i>CCR5</i> knockout efficiency was significantly reduced (9%), and 95.6% of knockout alleles were the result of NHEJ events at DSB formed by CCR5-Uco-TALEN. </p> <h3>Conclusion</h3> <p style="text-align: justify;"> The small molecules contribution to the stimulation of HR-mediated DSB repair after the CCR5-Uco-TALEN mRNA transfection of primary hematopoietic stem cells was studied. Z-VAD-FMK seems to be the most promising. </p> <h3>Acknowledgments</h3> <p style="text-align: justify;"> K.V. Lepik thanks the Russian Foundation for Basic Research for the support, grant No. 19-29-04025mk. </p> <h2>Keywords</h2> <p style="text-align: justify;"> TALEN, homology directed repair, STING inhibitors, HSC. </p> <br>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(3706) "Targeted insertion of protein-coding sequences regions into the genome of hematopoietic stem cells (HSCs) mediated by engineered nucleases represents a promising platform for gene therapy of monogenic diseases. Homologous recombination (HR) represents the key mechanism for the introduction of genetic material into the double-stranded breaks (DSBs) generated by the targeted nuclease. Increasing the HR efficiency may enable the insertion of large DNA fragments into the HSC genome more efficiently upon delivery of donor repair templates by both viral and non-viral carriers. The mechanisms of DNA damage-induced innate immune response represent an important factor influencing the outcomes of DSB formation induced by engineered nucleases. The aim of this work is to evaluate the effects of adding small-molecule inhibitors of TLR9/AIM2/cGAS, STING and caspase antagonists A151, H151, and Z-VAD-FMK to cultures of primary human HSCs on the HR rate at the CCR5 locus after CCR5-Uco-TALEN mRNA transfection.
Materials and methods
Uridine-depleted CCR5-Uco-TALEN mRNA was synthesized by Trilink. Magnetic selection of CD34 + HSCs from the bone marrow of healthy donors was performed using the CD34 MicroBead kit (Miltenyi Biotec). After the activation phase of cultivation, HSCs were transfected with 25 µg/ml CCR5-Uco-TALEN mRNA using Gene Pulser Xcell (BioRad) device. After transfection, HSCs were cultured for 24 hours at 32°C in a StemMACS HSC Expansion Media XF (Miltenyi Biotech) medium. Small molecule inhibitors A151, H151 and FMK were added at concentrations 4 mkg/ml, 0.5 mkg/ml, and 25 mkg/ml respectively at 3 hours before the electroporation. The proportion of non-homologous end joining (NHEJ) events at the CCR5 locus was estimated by digital droplet PCR (ddPCR) on a QX200 System (Bio-Rad) according to the previously described protocol (Mock et al., 2015). In order to count the burden of HR-repaired CCR5 alleles the copy number of the reference gene EPOR was additionally estimated by the method of multiplex ddPCR (Schwarze et al., 2021). The difference between the copy number of the reference gene and the sum of HR-repaired and wild-type alleles was considered the proportion of alleles repaired by HR.
Results
The total average efficiency of the CCR5 gene knockout, calculated as the sum of the NHEJ- and HR-repaired alleles, ranged from 9 to 53.5%. The addition of a FMK small molecule to the HSCs culture significantly affected not only the CCR5 gene knockout overall efficiency (53.5%), but the frequency of both NHEJ (27.2%) and HR (26.3%) as well. The addition of H151 did not affect the overall efficiency of the CCR5 gene knockout (33.5%), as well as the ratio of NHEJ (18.3%) and HR (15.2%) events in the samples. In the presence of A151 small molecule, the CCR5 knockout efficiency was significantly reduced (9%), and 95.6% of knockout alleles were the result of NHEJ events at DSB formed by CCR5-Uco-TALEN.
Conclusion
The small molecules contribution to the stimulation of HR-mediated DSB repair after the CCR5-Uco-TALEN mRNA transfection of primary hematopoietic stem cells was studied. Z-VAD-FMK seems to be the most promising.
Acknowledgments
K.V. Lepik thanks the Russian Foundation for Basic Research for the support, grant No. 19-29-04025mk.
Keywords
TALEN, homology directed repair, STING inhibitors, HSC.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(3706) "
Targeted insertion of protein-coding sequences regions into the genome of hematopoietic stem cells (HSCs) mediated by engineered nucleases represents a promising platform for gene therapy of monogenic diseases. Homologous recombination (HR) represents the key mechanism for the introduction of genetic material into the double-stranded breaks (DSBs) generated by the targeted nuclease. Increasing the HR efficiency may enable the insertion of large DNA fragments into the HSC genome more efficiently upon delivery of donor repair templates by both viral and non-viral carriers. The mechanisms of DNA damage-induced innate immune response represent an important factor influencing the outcomes of DSB formation induced by engineered nucleases. The aim of this work is to evaluate the effects of adding small-molecule inhibitors of TLR9/AIM2/cGAS, STING and caspase antagonists A151, H151, and Z-VAD-FMK to cultures of primary human HSCs on the HR rate at the CCR5 locus after CCR5-Uco-TALEN mRNA transfection.
Materials and methods
Uridine-depleted CCR5-Uco-TALEN mRNA was synthesized by Trilink. Magnetic selection of CD34 + HSCs from the bone marrow of healthy donors was performed using the CD34 MicroBead kit (Miltenyi Biotec). After the activation phase of cultivation, HSCs were transfected with 25 µg/ml CCR5-Uco-TALEN mRNA using Gene Pulser Xcell (BioRad) device. After transfection, HSCs were cultured for 24 hours at 32°C in a StemMACS HSC Expansion Media XF (Miltenyi Biotech) medium. Small molecule inhibitors A151, H151 and FMK were added at concentrations 4 mkg/ml, 0.5 mkg/ml, and 25 mkg/ml respectively at 3 hours before the electroporation. The proportion of non-homologous end joining (NHEJ) events at the CCR5 locus was estimated by digital droplet PCR (ddPCR) on a QX200 System (Bio-Rad) according to the previously described protocol (Mock et al., 2015). In order to count the burden of HR-repaired CCR5 alleles the copy number of the reference gene EPOR was additionally estimated by the method of multiplex ddPCR (Schwarze et al., 2021). The difference between the copy number of the reference gene and the sum of HR-repaired and wild-type alleles was considered the proportion of alleles repaired by HR.
Results
The total average efficiency of the CCR5 gene knockout, calculated as the sum of the NHEJ- and HR-repaired alleles, ranged from 9 to 53.5%. The addition of a FMK small molecule to the HSCs culture significantly affected not only the CCR5 gene knockout overall efficiency (53.5%), but the frequency of both NHEJ (27.2%) and HR (26.3%) as well. The addition of H151 did not affect the overall efficiency of the CCR5 gene knockout (33.5%), as well as the ratio of NHEJ (18.3%) and HR (15.2%) events in the samples. In the presence of A151 small molecule, the CCR5 knockout efficiency was significantly reduced (9%), and 95.6% of knockout alleles were the result of NHEJ events at DSB formed by CCR5-Uco-TALEN.
Conclusion
The small molecules contribution to the stimulation of HR-mediated DSB repair after the CCR5-Uco-TALEN mRNA transfection of primary hematopoietic stem cells was studied. Z-VAD-FMK seems to be the most promising.
Acknowledgments
K.V. Lepik thanks the Russian Foundation for Basic Research for the support, grant No. 19-29-04025mk.
Keywords
TALEN, homology directed repair, STING inhibitors, HSC.
" } ["DOI"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "28" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2016-04-06 14:11:12" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(3) "DOI" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(3) "DOI" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28237" ["VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(3) "DOI" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["DISPLAY_VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" } ["NAME_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "40" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:49:47" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(4) "Name" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "NAME_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28241" ["VALUE"]=> string(178) "GC-09. Testing of small molecules for homology-directed repair stimulation at CCR5 locus during the transfection of primary human hematopoietic stem cells by CCR5-Uco-TALEN mRNA " ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(178) "GC-09. Testing of small molecules for homology-directed repair stimulation at CCR5 locus during the transfection of primary human hematopoietic stem cells by CCR5-Uco-TALEN mRNA " ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(4) "Name" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["DISPLAY_VALUE"]=> string(178) "GC-09. Testing of small molecules for homology-directed repair stimulation at CCR5 locus during the transfection of primary human hematopoietic stem cells by CCR5-Uco-TALEN mRNA " } ["ORGANIZATION_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "38" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Organization" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28239" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(510) "<p><sup>1</sup> RM Gorbacheva Research Institute, Pavlov University, St. Petersburg, Russia<br> <sup>2</sup> Research Center for Medical Genetics, Moscow, Russia<br> <sup>3</sup> Research Department of Cell and Gene Therapy, University Medical Center Hamburg-Eppendorf, Hamburg, Germany</p><br> <p><b>Correspondence:</b><br> Dr. Alena Shakirova, phone: +7 (911) 733-51-48, e-mail: alyona.i.shakirova@gmail.com</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(414) "
1 RM Gorbacheva Research Institute, Pavlov University, St. Petersburg, Russia
2 Research Center for Medical Genetics, Moscow, Russia
3 Research Department of Cell and Gene Therapy, University Medical Center Hamburg-Eppendorf, Hamburg, Germany
Correspondence:
Dr. Alena Shakirova, phone: +7 (911) 733-51-48, e-mail: alyona.i.shakirova@gmail.com
1 RM Gorbacheva Research Institute, Pavlov University, St. Petersburg, Russia
2 Research Center for Medical Genetics, Moscow, Russia
3 Research Department of Cell and Gene Therapy, University Medical Center Hamburg-Eppendorf, Hamburg, Germany
Correspondence:
Dr. Alena Shakirova, phone: +7 (911) 733-51-48, e-mail: alyona.i.shakirova@gmail.com
Алена И. Шакирова1, Кирилл В. Лепик1, Альберт Р. Муслимов1, Владислав С. Сергеев1, Т. Р. Карпов1, К. И. Аношкин2, Марина О. Попова1, Борис Фезе1,3, Александр Д. Кулагин1
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Авторы" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(395) "Алена И. Шакирова1, Кирилл В. Лепик1, Альберт Р. Муслимов1, Владислав С. Сергеев1, Т. Р. Карпов1, К. И. Аношкин2, Марина О. Попова1, Борис Фезе1,3, Александр Д. Кулагин1
" } ["SUMMARY_RU"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "27" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28236" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(7487) "<p style="text-align: justify;"> Таргетные инсерции в геном гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) участков белок-кодирующих последовательностей с последующей аутологичной трансплантацией таких клеток является показанием для генной терапии целого ряда моногенных заболеваний человека. Беспрецендентной точностью в этом плане обладает генная терапия с использованием современных инструментов редактирования генома (RNA-guided инженерные нуклеазы, TALEN, ZFN). При их применении процесс протекает за счет так называемого гомологичной репарации (ГР) концов двуцепочечного разрыва (ДР) ДНК, образуемого нуклеазой. Повышение эффективности ГР является актуальной задачей, решение которой позволит с большей эффективностью производить вставки крупных участков ДНК в геном ГСК при доставке донорской репарационной матрицы как вирусными, так и невирусными носителями. Механизмы врожденного иммунного ответа, вызванного повреждением ДНК, представляют собой важный фактор, влияющий на результаты образования ДР, индуцированных инженерными нуклеазами. Целью данной работы является оценка влияния добавления низкомолекулярных ингибиторов TLR9/AIM2/cGAS, STING и антагонистов каспаз A151, H151 и Z-VAD-FMK к культурам первичных ГСК человека на частоту ГР в локусе <i>CCR5</i> после трансфекции мРНК CCR5-Uco-TALEN. </p> <h3>Материалы и методы</h3> <p style="text-align: justify;"> Синтез предварительно кодон-опимизированной посредством деплеции уридина мРНК CCR5-Uco-TALEN был осуществлен компанией Trilink (США). Магнитную селекцию CD34+ ГСК из костного мозга здоровых доноров проводили с помощью набора CD34 MicroBead kit (Miltenyi Biotec). Далее, после активирующей фазы культивирования, осуществляли трансфекцию ГСК мРНК CCR5-Uco-TALEN на приборе Gene Pulser Xcell (BioRad). После трансфекции ГСК в течение суток культивировали при 32°С в среде StemMACS HSC Expansion Media XF (Miltenyi Biotech). Низкомолекулярные ингибиторы A151, H151 и FMK добавляли в концентрациях 4 мкг/мл, 0,5 мкг/мл, и 25 мкг/мл соответственно за 3 часа до электропорации. Долю событий негомологичного (НГР) сшивания концов разрыва в локусе <i>CCR5</i> оценивали методом цифровой капельной ПЦР по описанному ранее протоколу (Mock et al., 2015) на приборе Bio-Rad QX200. Для оценки аллельной нагрузки репарированных на основе гомологии разрывов дополнительно методом мультиплексной цифровой капельной ПЦР оценивали количество копий референсного гена EPOR и копий гена <i>CCR5</i> дикого типа (Schwarze et al., 2021). Разницу между количеством копий референсного гена и суммой аллелей НГР и дикого типа считали долей аллелей, репарированных ГР. </p> <h3>Результаты</h3> <p style="text-align: justify;"> Согласно полученным результатам суммарная средняя эффективность нокаута гена <i>CCR5</i>, рассчитанная как сумма репарированных НГР и ГР аллелей, составляла от 9 до 53,5%. Добавление в культуру ГСК малой молекулы FMK значительно отразилось на общей эффективности нокаута гена <i>CCR5</i>, которая в этом образце была максимальной и составляла 53,5%, причем увеличилась частота как НГР (27,2%), так и ГР (26,3%) событий по сравнению с контролем. Добавление Н151 на общей эффективности нокаута гена <i>CCR5</i> не отразилось (33,5%), причем это касалось также соотношения НГР (18,3%) и ГР (15,2%) аллелей в образцах. В образцах ДНК, выделенной из клеток, культивируемых в присутствии A151, эффективность нокаута гена <i>CCR5</i> была значительно снижена и составила 9%, причем 95,6% нокаутированных аллелей были результатом НГР в локусах разрывов, формируемых CCR5-Uco-TALEN. </p> <h3>Заключение</h3> <p style="text-align: justify;"> Выполнено тестирование эффективности добавления малых молекул в плане стимуляции ГР в первичных гемопоэтических стволовых клетках человека при трансфекции мРНК CCR5-Uco-TALEN. FMK представляется наиболее перспективной из них в плане разработки генной терапии на основе комбинации донорской матрицы и инструментов редактирования генома. </p> <h3>Благодарности</h3> <p style="text-align: justify;"> Лепик К.В. благодарит за поддержку Российский фонд фундаментальных исследований, грант No. 19-29-04025mk. </p> <h2>Ключевые слова</h2> <p style="text-align: justify;"> TALEN, гомологичная репарация, ингибиторы STING, гемопоэтические стволовые клетки. </p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(7211) "Таргетные инсерции в геном гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) участков белок-кодирующих последовательностей с последующей аутологичной трансплантацией таких клеток является показанием для генной терапии целого ряда моногенных заболеваний человека. Беспрецендентной точностью в этом плане обладает генная терапия с использованием современных инструментов редактирования генома (RNA-guided инженерные нуклеазы, TALEN, ZFN). При их применении процесс протекает за счет так называемого гомологичной репарации (ГР) концов двуцепочечного разрыва (ДР) ДНК, образуемого нуклеазой. Повышение эффективности ГР является актуальной задачей, решение которой позволит с большей эффективностью производить вставки крупных участков ДНК в геном ГСК при доставке донорской репарационной матрицы как вирусными, так и невирусными носителями. Механизмы врожденного иммунного ответа, вызванного повреждением ДНК, представляют собой важный фактор, влияющий на результаты образования ДР, индуцированных инженерными нуклеазами. Целью данной работы является оценка влияния добавления низкомолекулярных ингибиторов TLR9/AIM2/cGAS, STING и антагонистов каспаз A151, H151 и Z-VAD-FMK к культурам первичных ГСК человека на частоту ГР в локусе CCR5 после трансфекции мРНК CCR5-Uco-TALEN.
Материалы и методы
Синтез предварительно кодон-опимизированной посредством деплеции уридина мРНК CCR5-Uco-TALEN был осуществлен компанией Trilink (США). Магнитную селекцию CD34+ ГСК из костного мозга здоровых доноров проводили с помощью набора CD34 MicroBead kit (Miltenyi Biotec). Далее, после активирующей фазы культивирования, осуществляли трансфекцию ГСК мРНК CCR5-Uco-TALEN на приборе Gene Pulser Xcell (BioRad). После трансфекции ГСК в течение суток культивировали при 32°С в среде StemMACS HSC Expansion Media XF (Miltenyi Biotech). Низкомолекулярные ингибиторы A151, H151 и FMK добавляли в концентрациях 4 мкг/мл, 0,5 мкг/мл, и 25 мкг/мл соответственно за 3 часа до электропорации. Долю событий негомологичного (НГР) сшивания концов разрыва в локусе CCR5 оценивали методом цифровой капельной ПЦР по описанному ранее протоколу (Mock et al., 2015) на приборе Bio-Rad QX200. Для оценки аллельной нагрузки репарированных на основе гомологии разрывов дополнительно методом мультиплексной цифровой капельной ПЦР оценивали количество копий референсного гена EPOR и копий гена CCR5 дикого типа (Schwarze et al., 2021). Разницу между количеством копий референсного гена и суммой аллелей НГР и дикого типа считали долей аллелей, репарированных ГР.
Результаты
Согласно полученным результатам суммарная средняя эффективность нокаута гена CCR5, рассчитанная как сумма репарированных НГР и ГР аллелей, составляла от 9 до 53,5%. Добавление в культуру ГСК малой молекулы FMK значительно отразилось на общей эффективности нокаута гена CCR5, которая в этом образце была максимальной и составляла 53,5%, причем увеличилась частота как НГР (27,2%), так и ГР (26,3%) событий по сравнению с контролем. Добавление Н151 на общей эффективности нокаута гена CCR5 не отразилось (33,5%), причем это касалось также соотношения НГР (18,3%) и ГР (15,2%) аллелей в образцах. В образцах ДНК, выделенной из клеток, культивируемых в присутствии A151, эффективность нокаута гена CCR5 была значительно снижена и составила 9%, причем 95,6% нокаутированных аллелей были результатом НГР в локусах разрывов, формируемых CCR5-Uco-TALEN.
Заключение
Выполнено тестирование эффективности добавления малых молекул в плане стимуляции ГР в первичных гемопоэтических стволовых клетках человека при трансфекции мРНК CCR5-Uco-TALEN. FMK представляется наиболее перспективной из них в плане разработки генной терапии на основе комбинации донорской матрицы и инструментов редактирования генома.
Благодарности
Лепик К.В. благодарит за поддержку Российский фонд фундаментальных исследований, грант No. 19-29-04025mk.
Ключевые слова
TALEN, гомологичная репарация, ингибиторы STING, гемопоэтические стволовые клетки.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(7211) "Таргетные инсерции в геном гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) участков белок-кодирующих последовательностей с последующей аутологичной трансплантацией таких клеток является показанием для генной терапии целого ряда моногенных заболеваний человека. Беспрецендентной точностью в этом плане обладает генная терапия с использованием современных инструментов редактирования генома (RNA-guided инженерные нуклеазы, TALEN, ZFN). При их применении процесс протекает за счет так называемого гомологичной репарации (ГР) концов двуцепочечного разрыва (ДР) ДНК, образуемого нуклеазой. Повышение эффективности ГР является актуальной задачей, решение которой позволит с большей эффективностью производить вставки крупных участков ДНК в геном ГСК при доставке донорской репарационной матрицы как вирусными, так и невирусными носителями. Механизмы врожденного иммунного ответа, вызванного повреждением ДНК, представляют собой важный фактор, влияющий на результаты образования ДР, индуцированных инженерными нуклеазами. Целью данной работы является оценка влияния добавления низкомолекулярных ингибиторов TLR9/AIM2/cGAS, STING и антагонистов каспаз A151, H151 и Z-VAD-FMK к культурам первичных ГСК человека на частоту ГР в локусе CCR5 после трансфекции мРНК CCR5-Uco-TALEN.
Материалы и методы
Синтез предварительно кодон-опимизированной посредством деплеции уридина мРНК CCR5-Uco-TALEN был осуществлен компанией Trilink (США). Магнитную селекцию CD34+ ГСК из костного мозга здоровых доноров проводили с помощью набора CD34 MicroBead kit (Miltenyi Biotec). Далее, после активирующей фазы культивирования, осуществляли трансфекцию ГСК мРНК CCR5-Uco-TALEN на приборе Gene Pulser Xcell (BioRad). После трансфекции ГСК в течение суток культивировали при 32°С в среде StemMACS HSC Expansion Media XF (Miltenyi Biotech). Низкомолекулярные ингибиторы A151, H151 и FMK добавляли в концентрациях 4 мкг/мл, 0,5 мкг/мл, и 25 мкг/мл соответственно за 3 часа до электропорации. Долю событий негомологичного (НГР) сшивания концов разрыва в локусе CCR5 оценивали методом цифровой капельной ПЦР по описанному ранее протоколу (Mock et al., 2015) на приборе Bio-Rad QX200. Для оценки аллельной нагрузки репарированных на основе гомологии разрывов дополнительно методом мультиплексной цифровой капельной ПЦР оценивали количество копий референсного гена EPOR и копий гена CCR5 дикого типа (Schwarze et al., 2021). Разницу между количеством копий референсного гена и суммой аллелей НГР и дикого типа считали долей аллелей, репарированных ГР.
Результаты
Согласно полученным результатам суммарная средняя эффективность нокаута гена CCR5, рассчитанная как сумма репарированных НГР и ГР аллелей, составляла от 9 до 53,5%. Добавление в культуру ГСК малой молекулы FMK значительно отразилось на общей эффективности нокаута гена CCR5, которая в этом образце была максимальной и составляла 53,5%, причем увеличилась частота как НГР (27,2%), так и ГР (26,3%) событий по сравнению с контролем. Добавление Н151 на общей эффективности нокаута гена CCR5 не отразилось (33,5%), причем это касалось также соотношения НГР (18,3%) и ГР (15,2%) аллелей в образцах. В образцах ДНК, выделенной из клеток, культивируемых в присутствии A151, эффективность нокаута гена CCR5 была значительно снижена и составила 9%, причем 95,6% нокаутированных аллелей были результатом НГР в локусах разрывов, формируемых CCR5-Uco-TALEN.
Заключение
Выполнено тестирование эффективности добавления малых молекул в плане стимуляции ГР в первичных гемопоэтических стволовых клетках человека при трансфекции мРНК CCR5-Uco-TALEN. FMK представляется наиболее перспективной из них в плане разработки генной терапии на основе комбинации донорской матрицы и инструментов редактирования генома.
Благодарности
Лепик К.В. благодарит за поддержку Российский фонд фундаментальных исследований, грант No. 19-29-04025mk.
Ключевые слова
TALEN, гомологичная репарация, ингибиторы STING, гемопоэтические стволовые клетки.
" } ["ORGANIZATION_RU"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "26" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(22) "Организации" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28235" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(855) "<p><sup>1</sup> НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р. М. Горбачевой, Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И. П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия<br> <sup>2</sup> Медико-генетический научный Центр им. Н. П. Бочкова, Москва, Россия<br> <sup>3</sup> Отдел клеточной и генной терапии, Департамент трансплантации стволовых клеток, Университетский медицинский центр Гамбург-Эппендорф, Гамбург, Германия </p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(795) "1 НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р. М. Горбачевой, Первый Санкт-Петербургский
государственный медицинский университет им. И. П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия
2 Медико-генетический научный Центр им. Н. П. Бочкова, Москва, Россия
3 Отдел клеточной и генной терапии, Департамент трансплантации стволовых клеток, Университетский медицинский центр Гамбург-Эппендорф, Гамбург, Германия
1 НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р. М. Горбачевой, Первый Санкт-Петербургский
государственный медицинский университет им. И. П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия
2 Медико-генетический научный Центр им. Н. П. Бочкова, Москва, Россия
3 Отдел клеточной и генной терапии, Департамент трансплантации стволовых клеток, Университетский медицинский центр Гамбург-Эппендорф, Гамбург, Германия
Анна С. Рогова1, Анастасия С. Букреева1, Алиса С. Постовалова1, Дарья Р. Ахметова1, Александр С. Тимин1,2, Альберт Р. Муслимов1,2
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Авторы" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["ORGANIZATION_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "26" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(22) "Организации" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28225" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(446) "<p><sup>1</sup> Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого, Санкт-Петербург, Россия<br> <sup>2</sup> Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И. П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия </p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(404) "1 Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого, Санкт-Петербург, Россия
2 Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И. П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия
Различные методы генной терапии имеют большие перспективы при лечении различных наследственных, инфекционных и онкологических заболеваний. Тем не менее, в настоящее время эффективность их применения ограничена отсутствием действенных и безопасных методов доставки генетического материала в клетки. Для решения этой проблемы может быть использован следующий метод, заключающийся в доставке генетического материала с использованием полимерных частиц. Одним из важных преимуществ данного метода является структура капсулы, позволяющая обеспечить защиту содержимого ее полости от агрессивного воздействия биологических сред организма. Однако для дальнейшего использования данных носителей в клинической практике необходимо детально изучить их биораспределение после введения в организм. Цель исследования: изучение биораспределения полимерных частиц в организме мыши различными методами, а также гистопатологический анализ тканей после введения носителей.
Материалы и методы
В данной работе использовались полимерные частицы, полученные путем нанесения полиаргинина и сульфата декстрана (PARG/DEXS) по технологии Layer-by-Layer на ядра из карбоната кальция. Ядра были получены путем соосаждения водных растворов солей: карбоната натрия и хлорида кальция с добавлением флуоресцентных красителей FITC и Cy5, а также частиц магнетита. Синтезированные носители были оценены методами световой и конфокальной микроскопии, а также динамического светорассеяния. Далее частицы вводились мышам в хвостовую вену, после чего на 2, 5, 7, 10 и 15 день анализировались их органы (сердце, легкие, печень, селезенка и почки) на приборе для in vivo визуализации флуоресценции – IVIS Spectrum CT. Также были получены данные гистологических срезов с помощью методов визуализации на конфокальном лазерном сканирующем микроскопе (КЛСМ) и световом микроскопе.
Результаты
В данной работе результаты, полученные методами КЛСМ (частицы, меченные FITC), световой микроскопии (меченные магнетитом) и биолюминографе IVIS (меченные Cy5) коррелируют между собой, однако оценка биораспределение с помощью частиц, меченных магнетитом, не является оптимальной из-за особенностей ткани печени и селезенки. После введения частицы обнаруживаются в большом количестве в легких, предположительно из-за малого размера капилляров и в печени. Далее замечается общее снижение количества частиц в органах. В легких на 10 день количество частиц становится минимальным, в то время как в печени регистрируется достаточное количество. Также, на 10 и 15 день частицы были зарегистрированы в селезенке. Общая картина иллюстрирует отсутствие патологических изменений при использовании полимерных микронных частиц. Наблюдается значительное накопление частиц в тканях с высокоразвитой ретикулоэндотелиальной системой (печень, селезенка, а также легкие).
Заключение
Представленные данные позволяют лучше понять распределение частиц в организме животного в течение длительного времени и предоставить информацию о том, в какие органы потенциально можно доставлять терапевтические агенты с помощью данной системы доставки. В дальнейшем запланированы проведение экспериментов по доставке клинически релевантного генетического материала in vivo.
Благодарность
Работа выполнена при поддержке проекта Российского Научного Фонда «19-75-10010».
Ключевые слова
Полимерные носители, доставка генетического материала, биораспределение, гистологическое исследование, визуализация in vivo.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["DOI"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "28" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2016-04-06 14:11:12" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(3) "DOI" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(3) "DOI" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28227" ["VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(3) "DOI" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["AUTHOR_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "37" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(6) "Author" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28228" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(287) "<p>Anna S. Rogova<sup>1</sup>, Anastasia S. Bukreeva<sup>1</sup>, Alisa S. Postovalova<sup>1</sup>, Darya R. Akhmetova<sup>1</sup>, Alexander S. Timin<sup>1,2</sup>, Albert R. Muslimov<sup>1,2</sup></p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(203) "Anna S. Rogova1, Anastasia S. Bukreeva1, Alisa S. Postovalova1, Darya R. Akhmetova1, Alexander S. Timin1,2, Albert R. Muslimov1,2
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(6) "Author" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["ORGANIZATION_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "38" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Organization" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28229" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(343) "<p><sup>1</sup> Peter The Great St. Petersburg Polytechnic University, St. Petersburg, Russia<br> <sup>2</sup> Pavlov University, St. Petersburg, Russia </p><br> <p><b>Correspondence:</b><br> Anna S. Rogova, phone: +7 (904) 601-79-55, e-mail: anna.aroo@mail.ru</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(265) "1 Peter The Great St. Petersburg Polytechnic University, St. Petersburg, Russia
2 Pavlov University, St. Petersburg, Russia
Correspondence:
Anna S. Rogova, phone: +7 (904) 601-79-55, e-mail: anna.aroo@mail.ru
Various methods of gene therapy demonstrate great prospects in the treatment of various hereditary, infectious and oncological diseases. However, now, the effectiveness of their use is limited by the lack of effective and safe methods of delivering genetic material to cells. To solve this problem, a method consisting in the delivery of genetic material using polymer particles can be used. One of the important advantages of this method is the structure of the capsule, which allows it to protect the contents from the aggressive effects of biological environments of the body. However, for further use of these carriers in clinical practice, it is necessary to study in detail their bio-distribution after introduction into the body. The purpose of this work is to study the bio-distribution of polymer particles on mouse model by various methods, as well as histopathological analysis of tissues after the introduction of carriers.
Materials and methods
In this work, polymer particles obtained by applying polyarginine and dextran sulfate (PARG/DEXS) using Layer-by-Layer technology to calcium carbonate nuclei were used. The nuclei were obtained by co-precipitation of aqueous solutions of salts: sodium carbonate and calcium chloride with the addition of fluorescent dyes FITC and Cy5, as well as magnetite particles. The synthesized carriers were evaluated by light and confocal microscopy, as well as dynamic light scattering. Then the particles were injected into the tail vein of the mice, after which their organs (heart, lungs, liver, spleen and kidneys) were analyzed on the IVIS Spectrum CT device for in vivo fluorescence imaging on days 2, 5, 7, 10 and 15. The data of histological sections were also obtained using imaging methods on a confocal laser scanning microscope (CLSM) and a light microscope.
Results
The results obtained by the methods of CLSM (particles labeled with FITC), light microscopy (labeled with magnetite) and IVIS bioluminograph (labeled with Cy5) correlate with each other, but the assessment of biodistribution using particles labeled with magnetite is not optimal due to the characteristics of the liver and spleen tissue. After administration, the particles are found in large quantities in the lungs, presumably due to the small size of the capillaries and in the liver. Then there is a general decrease in the number of particles in the organs. On day 10, the number of particles in the lungs becomes minimal, while a sufficient amount is recorded in the liver. Also, on days 10 and 15, particles were registered in the spleen. Histopathological analysis illustrates the absence of pathological changes when using polymer micron particles. There is a significant accumulation of particles in tissues with a highly developed reticuloendothelial system (liver, spleen and lungs).
Conclusion
The presented data allow us to better understand the distribution of particles in the animal’s body over a long time and provide information about which organs can potentially be delivered therapeutic agents using this delivery system. In the future, it is planned to conduct experiments on the delivery of clinically relevant genetic material in vivo.
Acknowledgments
The work was carried out with the support of the project of the Russian Science Foundation “19-75-10010”.
Keywords
Polymer carriers, delivery of genetic material, bio-distribution, histological examination, in vivo visualization.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["NAME_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "40" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:49:47" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(4) "Name" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "NAME_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28231" ["VALUE"]=> string(87) "GC-08. Study of the biodistribution of polymer carriers for further use in gene therapy" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(87) "GC-08. Study of the biodistribution of polymer carriers for further use in gene therapy" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(4) "Name" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["FULL_TEXT_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "42" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-07 20:29:18" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(23) "Полный текст" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(12) "FULL_TEXT_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(23) "Полный текст" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["PDF_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "43" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-09 16:05:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(7) "PDF RUS" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(6) "PDF_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "F" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(18) "doc, txt, rtf, pdf" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28232" ["VALUE"]=> string(4) "2641" ["DESCRIPTION"]=> NULL ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(4) "2641" ["~DESCRIPTION"]=> NULL ["~NAME"]=> string(7) "PDF RUS" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["PDF_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "44" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-09 16:05:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(7) "PDF ENG" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(6) "PDF_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "F" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(18) "doc, txt, rtf, pdf" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28233" ["VALUE"]=> string(4) "2642" ["DESCRIPTION"]=> NULL ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(4) "2642" ["~DESCRIPTION"]=> NULL ["~NAME"]=> string(7) "PDF ENG" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["NAME_LONG"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "45" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2023-04-13 00:55:00" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(72) "Название (для очень длинных заголовков)" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "NAME_LONG" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TYPE"]=> string(4) "HTML" ["TEXT"]=> string(0) "" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(80) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(72) "Название (для очень длинных заголовков)" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TYPE"]=> string(4) "HTML" ["TEXT"]=> string(0) "" } } } ["DISPLAY_PROPERTIES"]=> array(8) { ["AUTHOR_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "37" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(6) "Author" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28228" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(287) "<p>Anna S. Rogova<sup>1</sup>, Anastasia S. Bukreeva<sup>1</sup>, Alisa S. Postovalova<sup>1</sup>, Darya R. Akhmetova<sup>1</sup>, Alexander S. Timin<sup>1,2</sup>, Albert R. Muslimov<sup>1,2</sup></p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(203) "Anna S. Rogova1, Anastasia S. Bukreeva1, Alisa S. Postovalova1, Darya R. Akhmetova1, Alexander S. Timin1,2, Albert R. Muslimov1,2
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(6) "Author" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(203) "Anna S. Rogova1, Anastasia S. Bukreeva1, Alisa S. Postovalova1, Darya R. Akhmetova1, Alexander S. Timin1,2, Albert R. Muslimov1,2
" } ["SUMMARY_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "39" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28230" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(3962) "<p style="text-align: justify;">Various methods of gene therapy demonstrate great prospects in the treatment of various hereditary, infectious and oncological diseases. However, now, the effectiveness of their use is limited by the lack of effective and safe methods of delivering genetic material to cells. To solve this problem, a method consisting in the delivery of genetic material using polymer particles can be used. One of the important advantages of this method is the structure of the capsule, which allows it to protect the contents from the aggressive effects of biological environments of the body. However, for further use of these carriers in clinical practice, it is necessary to study in detail their bio-distribution after introduction into the body. The purpose of this work is to study the bio-distribution of polymer particles on mouse model by various methods, as well as histopathological analysis of tissues after the introduction of carriers.</p> <h3>Materials and methods</h3> <p style="text-align: justify;">In this work, polymer particles obtained by applying polyarginine and dextran sulfate (PARG/DEXS) using Layer-by-Layer technology to calcium carbonate nuclei were used. The nuclei were obtained by co-precipitation of aqueous solutions of salts: sodium carbonate and calcium chloride with the addition of fluorescent dyes FITC and Cy5, as well as magnetite particles. The synthesized carriers were evaluated by light and confocal microscopy, as well as dynamic light scattering. Then the particles were injected into the tail vein of the mice, after which their organs (heart, lungs, liver, spleen and kidneys) were analyzed on the IVIS Spectrum CT device for <i>in vivo</i> fluorescence imaging on days 2, 5, 7, 10 and 15. The data of histological sections were also obtained using imaging methods on a confocal laser scanning microscope (CLSM) and a light microscope.</p> <h3>Results</h3> <p style="text-align: justify;">The results obtained by the methods of CLSM (particles labeled with FITC), light microscopy (labeled with magnetite) and IVIS bioluminograph (labeled with Cy5) correlate with each other, but the assessment of biodistribution using particles labeled with magnetite is not optimal due to the characteristics of the liver and spleen tissue. After administration, the particles are found in large quantities in the lungs, presumably due to the small size of the capillaries and in the liver. Then there is a general decrease in the number of particles in the organs. On day 10, the number of particles in the lungs becomes minimal, while a sufficient amount is recorded in the liver. Also, on days 10 and 15, particles were registered in the spleen. Histopathological analysis illustrates the absence of pathological changes when using polymer micron particles. There is a significant accumulation of particles in tissues with a highly developed reticuloendothelial system (liver, spleen and lungs).</p> <h3>Conclusion</h3> <p style="text-align: justify;">The presented data allow us to better understand the distribution of particles in the animal’s body over a long time and provide information about which organs can potentially be delivered therapeutic agents using this delivery system. In the future, it is planned to conduct experiments on the delivery of clinically relevant genetic material <i>in vivo</i>.</p> <h3>Acknowledgments</h3> <p style="text-align: justify;">The work was carried out with the support of the project of the Russian Science Foundation “19-75-10010”.</p> <h2>Keywords</h2> <p style="text-align: justify;">Polymer carriers, delivery of genetic material, bio-distribution, histological examination, <i>in vivo</i> visualization.</p> " ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(3734) "Various methods of gene therapy demonstrate great prospects in the treatment of various hereditary, infectious and oncological diseases. However, now, the effectiveness of their use is limited by the lack of effective and safe methods of delivering genetic material to cells. To solve this problem, a method consisting in the delivery of genetic material using polymer particles can be used. One of the important advantages of this method is the structure of the capsule, which allows it to protect the contents from the aggressive effects of biological environments of the body. However, for further use of these carriers in clinical practice, it is necessary to study in detail their bio-distribution after introduction into the body. The purpose of this work is to study the bio-distribution of polymer particles on mouse model by various methods, as well as histopathological analysis of tissues after the introduction of carriers.
Materials and methods
In this work, polymer particles obtained by applying polyarginine and dextran sulfate (PARG/DEXS) using Layer-by-Layer technology to calcium carbonate nuclei were used. The nuclei were obtained by co-precipitation of aqueous solutions of salts: sodium carbonate and calcium chloride with the addition of fluorescent dyes FITC and Cy5, as well as magnetite particles. The synthesized carriers were evaluated by light and confocal microscopy, as well as dynamic light scattering. Then the particles were injected into the tail vein of the mice, after which their organs (heart, lungs, liver, spleen and kidneys) were analyzed on the IVIS Spectrum CT device for in vivo fluorescence imaging on days 2, 5, 7, 10 and 15. The data of histological sections were also obtained using imaging methods on a confocal laser scanning microscope (CLSM) and a light microscope.
Results
The results obtained by the methods of CLSM (particles labeled with FITC), light microscopy (labeled with magnetite) and IVIS bioluminograph (labeled with Cy5) correlate with each other, but the assessment of biodistribution using particles labeled with magnetite is not optimal due to the characteristics of the liver and spleen tissue. After administration, the particles are found in large quantities in the lungs, presumably due to the small size of the capillaries and in the liver. Then there is a general decrease in the number of particles in the organs. On day 10, the number of particles in the lungs becomes minimal, while a sufficient amount is recorded in the liver. Also, on days 10 and 15, particles were registered in the spleen. Histopathological analysis illustrates the absence of pathological changes when using polymer micron particles. There is a significant accumulation of particles in tissues with a highly developed reticuloendothelial system (liver, spleen and lungs).
Conclusion
The presented data allow us to better understand the distribution of particles in the animal’s body over a long time and provide information about which organs can potentially be delivered therapeutic agents using this delivery system. In the future, it is planned to conduct experiments on the delivery of clinically relevant genetic material in vivo.
Acknowledgments
The work was carried out with the support of the project of the Russian Science Foundation “19-75-10010”.
Keywords
Polymer carriers, delivery of genetic material, bio-distribution, histological examination, in vivo visualization.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(3734) "Various methods of gene therapy demonstrate great prospects in the treatment of various hereditary, infectious and oncological diseases. However, now, the effectiveness of their use is limited by the lack of effective and safe methods of delivering genetic material to cells. To solve this problem, a method consisting in the delivery of genetic material using polymer particles can be used. One of the important advantages of this method is the structure of the capsule, which allows it to protect the contents from the aggressive effects of biological environments of the body. However, for further use of these carriers in clinical practice, it is necessary to study in detail their bio-distribution after introduction into the body. The purpose of this work is to study the bio-distribution of polymer particles on mouse model by various methods, as well as histopathological analysis of tissues after the introduction of carriers.
Materials and methods
In this work, polymer particles obtained by applying polyarginine and dextran sulfate (PARG/DEXS) using Layer-by-Layer technology to calcium carbonate nuclei were used. The nuclei were obtained by co-precipitation of aqueous solutions of salts: sodium carbonate and calcium chloride with the addition of fluorescent dyes FITC and Cy5, as well as magnetite particles. The synthesized carriers were evaluated by light and confocal microscopy, as well as dynamic light scattering. Then the particles were injected into the tail vein of the mice, after which their organs (heart, lungs, liver, spleen and kidneys) were analyzed on the IVIS Spectrum CT device for in vivo fluorescence imaging on days 2, 5, 7, 10 and 15. The data of histological sections were also obtained using imaging methods on a confocal laser scanning microscope (CLSM) and a light microscope.
Results
The results obtained by the methods of CLSM (particles labeled with FITC), light microscopy (labeled with magnetite) and IVIS bioluminograph (labeled with Cy5) correlate with each other, but the assessment of biodistribution using particles labeled with magnetite is not optimal due to the characteristics of the liver and spleen tissue. After administration, the particles are found in large quantities in the lungs, presumably due to the small size of the capillaries and in the liver. Then there is a general decrease in the number of particles in the organs. On day 10, the number of particles in the lungs becomes minimal, while a sufficient amount is recorded in the liver. Also, on days 10 and 15, particles were registered in the spleen. Histopathological analysis illustrates the absence of pathological changes when using polymer micron particles. There is a significant accumulation of particles in tissues with a highly developed reticuloendothelial system (liver, spleen and lungs).
Conclusion
The presented data allow us to better understand the distribution of particles in the animal’s body over a long time and provide information about which organs can potentially be delivered therapeutic agents using this delivery system. In the future, it is planned to conduct experiments on the delivery of clinically relevant genetic material in vivo.
Acknowledgments
The work was carried out with the support of the project of the Russian Science Foundation “19-75-10010”.
Keywords
Polymer carriers, delivery of genetic material, bio-distribution, histological examination, in vivo visualization.
" } ["DOI"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "28" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2016-04-06 14:11:12" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(3) "DOI" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(3) "DOI" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28227" ["VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(3) "DOI" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["DISPLAY_VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" } ["NAME_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "40" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:49:47" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(4) "Name" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "NAME_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28231" ["VALUE"]=> string(87) "GC-08. Study of the biodistribution of polymer carriers for further use in gene therapy" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(87) "GC-08. Study of the biodistribution of polymer carriers for further use in gene therapy" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(4) "Name" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["DISPLAY_VALUE"]=> string(87) "GC-08. Study of the biodistribution of polymer carriers for further use in gene therapy" } ["ORGANIZATION_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "38" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Organization" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28229" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(343) "<p><sup>1</sup> Peter The Great St. Petersburg Polytechnic University, St. Petersburg, Russia<br> <sup>2</sup> Pavlov University, St. Petersburg, Russia </p><br> <p><b>Correspondence:</b><br> Anna S. Rogova, phone: +7 (904) 601-79-55, e-mail: anna.aroo@mail.ru</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(265) "1 Peter The Great St. Petersburg Polytechnic University, St. Petersburg, Russia
2 Pavlov University, St. Petersburg, Russia
Correspondence:
Anna S. Rogova, phone: +7 (904) 601-79-55, e-mail: anna.aroo@mail.ru
1 Peter The Great St. Petersburg Polytechnic University, St. Petersburg, Russia
2 Pavlov University, St. Petersburg, Russia
Correspondence:
Anna S. Rogova, phone: +7 (904) 601-79-55, e-mail: anna.aroo@mail.ru
Анна С. Рогова1, Анастасия С. Букреева1, Алиса С. Постовалова1, Дарья Р. Ахметова1, Александр С. Тимин1,2, Альберт Р. Муслимов1,2
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Авторы" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(293) "Анна С. Рогова1, Анастасия С. Букреева1, Алиса С. Постовалова1, Дарья Р. Ахметова1, Александр С. Тимин1,2, Альберт Р. Муслимов1,2
" } ["SUMMARY_RU"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "27" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28226" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(6800) "<p style="text-align: justify;"> Различные методы генной терапии имеют большие перспективы при лечении различных наследственных, инфекционных и онкологических заболеваний. Тем не менее, в настоящее время эффективность их применения ограничена отсутствием действенных и безопасных методов доставки генетического материала в клетки. Для решения этой проблемы может быть использован следующий метод, заключающийся в доставке генетического материала с использованием полимерных частиц. Одним из важных преимуществ данного метода является структура капсулы, позволяющая обеспечить защиту содержимого ее полости от агрессивного воздействия биологических сред организма. Однако для дальнейшего использования данных носителей в клинической практике необходимо детально изучить их биораспределение после введения в организм. Цель исследования: изучение биораспределения полимерных частиц в организме мыши различными методами, а также гистопатологический анализ тканей после введения носителей. </p> <h3>Материалы и методы</h3> <p style="text-align: justify;"> В данной работе использовались полимерные частицы, полученные путем нанесения полиаргинина и сульфата декстрана (PARG/DEXS) по технологии Layer-by-Layer на ядра из карбоната кальция. Ядра были получены путем соосаждения водных растворов солей: карбоната натрия и хлорида кальция с добавлением флуоресцентных красителей FITC и Cy5, а также частиц магнетита. Синтезированные носители были оценены методами световой и конфокальной микроскопии, а также динамического светорассеяния. Далее частицы вводились мышам в хвостовую вену, после чего на 2, 5, 7, 10 и 15 день анализировались их органы (сердце, легкие, печень, селезенка и почки) на приборе для <i>in vivo</i> визуализации флуоресценции – IVIS Spectrum CT. Также были получены данные гистологических срезов с помощью методов визуализации на конфокальном лазерном сканирующем микроскопе (КЛСМ) и световом микроскопе. </p> <h3>Результаты</h3> <p style="text-align: justify;"> В данной работе результаты, полученные методами КЛСМ (частицы, меченные FITC), световой микроскопии (меченные магнетитом) и биолюминографе IVIS (меченные Cy5) коррелируют между собой, однако оценка биораспределение с помощью частиц, меченных магнетитом, не является оптимальной из-за особенностей ткани печени и селезенки. После введения частицы обнаруживаются в большом количестве в легких, предположительно из-за малого размера капилляров и в печени. Далее замечается общее снижение количества частиц в органах. В легких на 10 день количество частиц становится минимальным, в то время как в печени регистрируется достаточное количество. Также, на 10 и 15 день частицы были зарегистрированы в селезенке. Общая картина иллюстрирует отсутствие патологических изменений при использовании полимерных микронных частиц. Наблюдается значительное накопление частиц в тканях с высокоразвитой ретикулоэндотелиальной системой (печень, селезенка, а также легкие). </p> <h3>Заключение</h3> <p style="text-align: justify;"> Представленные данные позволяют лучше понять распределение частиц в организме животного в течение длительного времени и предоставить информацию о том, в какие органы потенциально можно доставлять терапевтические агенты с помощью данной системы доставки. В дальнейшем запланированы проведение экспериментов по доставке клинически релевантного генетического материала <i>in vivo</i>. </p> <h3>Благодарность</h3> <p style="text-align: justify;"> Работа выполнена при поддержке проекта Российского Научного Фонда «19-75-10010». </p> <h2>Ключевые слова</h2> <p style="text-align: justify;"> Полимерные носители, доставка генетического материала, биораспределение, гистологическое исследование, визуализация <i>in vivo</i>. </p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(6572) "Различные методы генной терапии имеют большие перспективы при лечении различных наследственных, инфекционных и онкологических заболеваний. Тем не менее, в настоящее время эффективность их применения ограничена отсутствием действенных и безопасных методов доставки генетического материала в клетки. Для решения этой проблемы может быть использован следующий метод, заключающийся в доставке генетического материала с использованием полимерных частиц. Одним из важных преимуществ данного метода является структура капсулы, позволяющая обеспечить защиту содержимого ее полости от агрессивного воздействия биологических сред организма. Однако для дальнейшего использования данных носителей в клинической практике необходимо детально изучить их биораспределение после введения в организм. Цель исследования: изучение биораспределения полимерных частиц в организме мыши различными методами, а также гистопатологический анализ тканей после введения носителей.
Материалы и методы
В данной работе использовались полимерные частицы, полученные путем нанесения полиаргинина и сульфата декстрана (PARG/DEXS) по технологии Layer-by-Layer на ядра из карбоната кальция. Ядра были получены путем соосаждения водных растворов солей: карбоната натрия и хлорида кальция с добавлением флуоресцентных красителей FITC и Cy5, а также частиц магнетита. Синтезированные носители были оценены методами световой и конфокальной микроскопии, а также динамического светорассеяния. Далее частицы вводились мышам в хвостовую вену, после чего на 2, 5, 7, 10 и 15 день анализировались их органы (сердце, легкие, печень, селезенка и почки) на приборе для in vivo визуализации флуоресценции – IVIS Spectrum CT. Также были получены данные гистологических срезов с помощью методов визуализации на конфокальном лазерном сканирующем микроскопе (КЛСМ) и световом микроскопе.
Результаты
В данной работе результаты, полученные методами КЛСМ (частицы, меченные FITC), световой микроскопии (меченные магнетитом) и биолюминографе IVIS (меченные Cy5) коррелируют между собой, однако оценка биораспределение с помощью частиц, меченных магнетитом, не является оптимальной из-за особенностей ткани печени и селезенки. После введения частицы обнаруживаются в большом количестве в легких, предположительно из-за малого размера капилляров и в печени. Далее замечается общее снижение количества частиц в органах. В легких на 10 день количество частиц становится минимальным, в то время как в печени регистрируется достаточное количество. Также, на 10 и 15 день частицы были зарегистрированы в селезенке. Общая картина иллюстрирует отсутствие патологических изменений при использовании полимерных микронных частиц. Наблюдается значительное накопление частиц в тканях с высокоразвитой ретикулоэндотелиальной системой (печень, селезенка, а также легкие).
Заключение
Представленные данные позволяют лучше понять распределение частиц в организме животного в течение длительного времени и предоставить информацию о том, в какие органы потенциально можно доставлять терапевтические агенты с помощью данной системы доставки. В дальнейшем запланированы проведение экспериментов по доставке клинически релевантного генетического материала in vivo.
Благодарность
Работа выполнена при поддержке проекта Российского Научного Фонда «19-75-10010».
Ключевые слова
Полимерные носители, доставка генетического материала, биораспределение, гистологическое исследование, визуализация in vivo.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(6572) "Различные методы генной терапии имеют большие перспективы при лечении различных наследственных, инфекционных и онкологических заболеваний. Тем не менее, в настоящее время эффективность их применения ограничена отсутствием действенных и безопасных методов доставки генетического материала в клетки. Для решения этой проблемы может быть использован следующий метод, заключающийся в доставке генетического материала с использованием полимерных частиц. Одним из важных преимуществ данного метода является структура капсулы, позволяющая обеспечить защиту содержимого ее полости от агрессивного воздействия биологических сред организма. Однако для дальнейшего использования данных носителей в клинической практике необходимо детально изучить их биораспределение после введения в организм. Цель исследования: изучение биораспределения полимерных частиц в организме мыши различными методами, а также гистопатологический анализ тканей после введения носителей.
Материалы и методы
В данной работе использовались полимерные частицы, полученные путем нанесения полиаргинина и сульфата декстрана (PARG/DEXS) по технологии Layer-by-Layer на ядра из карбоната кальция. Ядра были получены путем соосаждения водных растворов солей: карбоната натрия и хлорида кальция с добавлением флуоресцентных красителей FITC и Cy5, а также частиц магнетита. Синтезированные носители были оценены методами световой и конфокальной микроскопии, а также динамического светорассеяния. Далее частицы вводились мышам в хвостовую вену, после чего на 2, 5, 7, 10 и 15 день анализировались их органы (сердце, легкие, печень, селезенка и почки) на приборе для in vivo визуализации флуоресценции – IVIS Spectrum CT. Также были получены данные гистологических срезов с помощью методов визуализации на конфокальном лазерном сканирующем микроскопе (КЛСМ) и световом микроскопе.
Результаты
В данной работе результаты, полученные методами КЛСМ (частицы, меченные FITC), световой микроскопии (меченные магнетитом) и биолюминографе IVIS (меченные Cy5) коррелируют между собой, однако оценка биораспределение с помощью частиц, меченных магнетитом, не является оптимальной из-за особенностей ткани печени и селезенки. После введения частицы обнаруживаются в большом количестве в легких, предположительно из-за малого размера капилляров и в печени. Далее замечается общее снижение количества частиц в органах. В легких на 10 день количество частиц становится минимальным, в то время как в печени регистрируется достаточное количество. Также, на 10 и 15 день частицы были зарегистрированы в селезенке. Общая картина иллюстрирует отсутствие патологических изменений при использовании полимерных микронных частиц. Наблюдается значительное накопление частиц в тканях с высокоразвитой ретикулоэндотелиальной системой (печень, селезенка, а также легкие).
Заключение
Представленные данные позволяют лучше понять распределение частиц в организме животного в течение длительного времени и предоставить информацию о том, в какие органы потенциально можно доставлять терапевтические агенты с помощью данной системы доставки. В дальнейшем запланированы проведение экспериментов по доставке клинически релевантного генетического материала in vivo.
Благодарность
Работа выполнена при поддержке проекта Российского Научного Фонда «19-75-10010».
Ключевые слова
Полимерные носители, доставка генетического материала, биораспределение, гистологическое исследование, визуализация in vivo.
" } ["ORGANIZATION_RU"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "26" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(22) "Организации" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28225" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(446) "<p><sup>1</sup> Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого, Санкт-Петербург, Россия<br> <sup>2</sup> Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И. П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия </p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(404) "1 Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого, Санкт-Петербург, Россия
2 Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И. П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия
1 Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого, Санкт-Петербург, Россия
2 Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И. П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия
Анастасия С. Букреева1, Анна С. Рогова1, Татьяна В. Машель3, Дарья Р. Ахметова1, Александр С. Тимин1,2, Альберт Р. Муслимов1,2
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Авторы" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["ORGANIZATION_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "26" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(22) "Организации" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28175" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(559) "<p><sup>1</sup> Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого, Санкт-Петербург, Россия<br> <sup>2</sup> Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И. П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия<br> <sup>3</sup> Университет ИТМО, Санкт-Петербург, Россия</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(499) "1 Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого, Санкт-Петербург, Россия
2 Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И. П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия
3 Университет ИТМО, Санкт-Петербург, Россия
В настоящее время генная терапия является перспективным направлением для лечения широкого спектра заболеваний. Основным ограничением для развития генной терапии является проблема эффективной доставки генетического материала, так как использование «голых» нуклеиновых кислот не дает желаемого результата. Полимерные носители защищают генетический материал во время транспортировки к клеткам-мишеням, однако необходимо также защитить его и после попаданию в клетку. Фоновая активность нуклеаз считается значительным препятствием для эффективной доставки генов с использованием невирусных векторов. Для решения данной проблемы необходимо подобрать ингибитор, защищающий генетический материал от деградации и положительно влияющий на эффективность трансфекции. Целью данной работы является оценка эффективности пептидного ингибитора ДНКаз II (SLRLLQWFLWAC) на увеличение уровня трансфекции клеток млекопитающих.
Материалы и методы
В работе были использованы полиэлектролитные носители, полученные нанесением по технологии Layer-by-Layer слоев разнозаряженных полимеров (Polyarginine/Dextran sulfate) на ядра из карбоната кальция, предварительно полученные путем соосаждения водных растворов солей карбоната натрия и хлорида кальция. Модельным генетическим материалом являлась плазмидная ДНК, кодирующая зеленый флуоресцентный белок. Были рассмотрены варианты инкапсуляции пДНК в ядро, между полимерными слоями и одновременная запаковка в ядро и в слой. Пептидный ингибитор добавляли к пДНК в соотношении 1:1. Эксперименты ставились на клеточной культуре НЕК 293. Были рассмотрены разные способы засева частиц к клеткам: их добавляли либо к уже адгезированным клеткам, либо частицы предварительно инкубировали с клетками, после чего их засевали на культуральных пластик. Было изучено влияние добавления эмбриональной бычьей сыворотки (FBS) на эффективность трансфекции. Частицы добавлялись к клеткам в соотношении 100:1. Эффективность трансфекции оценивалась качественно на лазерном сканирующем конфокальном микроскопе и количественно при помощи проточной цитометрии.
Результаты
Анализ результатов экспериментов показал, что использование пептидного ингибитора ДНКазы II значительно повышает эффективность трансфекции. Наилучший результат был получен при включении генетического материала одновременно в ядро, и в качестве слоя полимерной частицы. Было выявлено, что добавление частиц к адгезированным клеткам, а также использование среды, не содержащей FBS, положительно влияет на уровень трансфекции.
Выводы
В результате работы было исследовано влияние пептидного ингибитора ДНКазы II на эффективность трансфекции, а также выявлены оптимальные условия засева частиц, содержащих генетический материал, к клеткам млекопитающих.
Благодарность
Работа выполнена при поддержке проекта Российского Научного Фонда 19-75-10010.
Ключевые слова
Генная терапия, ингибитор ДНКаз, эффективность трансфекции.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["DOI"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "28" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2016-04-06 14:11:12" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(3) "DOI" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(3) "DOI" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28177" ["VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2021-10-3-1-148" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(3) "DOI" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["AUTHOR_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "37" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(6) "Author" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28178" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(284) "<p>Anastasia S. Bukreeva<sup>1</sup>, Anna S. Rogova<sup>1</sup>, Tatiana V. Machel<sup>3</sup>, Darya R. Akhmetova<sup>1</sup>, Alexander S. Timin<sup>1,2</sup>, Albert R. Muslimov<sup>1,2</sup></p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(200) "Anastasia S. Bukreeva1, Anna S. Rogova1, Tatiana V. Machel3, Darya R. Akhmetova1, Alexander S. Timin1,2, Albert R. Muslimov1,2
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(6) "Author" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["ORGANIZATION_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "38" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Organization" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28179" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(429) "<p><sup>1</sup> Peter The Great St. Petersburg Polytechnic University, St. Petersburg, Russia<br> <sup>2</sup> Pavlov University, St. Petersburg, Russia<br> <sup>3</sup> ITMO University, St.Petersburg, Russia</p><br> <p><b>Correspondence:</b><br> Anastasia S. Bukreeva, phone: +7 (912) 578-67-96, email: ana.bukreevaa@gmail.com</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(333) "1 Peter The Great St. Petersburg Polytechnic University, St. Petersburg, Russia
2 Pavlov University, St. Petersburg, Russia
3 ITMO University, St.Petersburg, Russia
Correspondence:
Anastasia S. Bukreeva, phone: +7 (912) 578-67-96, email: ana.bukreevaa@gmail.com
Currently, gene therapy is a promising approach to the treatment of a wide range of diseases. Low efficiency of genetic material delivery is the main limiting factor for development of gene therapy, since the use of “naked” nucleic acids does not provide the desired result. Polymeric carriers protect the genetic material during its transport to the target cells, but it is also necessary to protect it after its entrance to the cell. Background activity of nucleases is considered a significant obstacle to efficient gene delivery using non-viral vectors. To resolve this problem, it is necessary to select an inhibitor that protects the genetic material from degradation and has a positive effect on the efficiency of transfection. The aim of this work was to evaluate the effectiveness of the peptide DNase II inhibitor (SLRLLQWFLWAC) in increasing the efficiency of transfection of mammalian cells.
Materials and methods
In this work, polyelectrolyte particles have been used, being obtained by applying layers of differently charged polymers (Polyarginine/Dextran sulfate) on calcium carbonate cores prepared in advance by co-precipitation of aqueous sodium carbonate solutions and calcium chloride salts. The model genetic material was plasmid DNA encoding green fluorescent protein. Variants of pDNA encapsulation into the core, between polymer layers and simultaneous packing into the core and into the layer were considered. The peptide inhibitor was added to the DNA at the 1:1 ratio. The in vitro experiments were carried out with HEK 293 cell culture. Different cell inoculation techniques were tested with the particles: they were added either to adherent cells, or were incubated with suspended cells, followed by seeding on culture plastic surface. Effects of fetal bovine serum (FBS) upon transfection efficiency was studied. The particles were added to the cells at a ratio of 100:1. Efficiency of transfection was assessed qualitatively by means of laser scanning confocal microscopy as well as quantitatively, using flow cytometry.
Results
Analysis of the experimental results showed that the use of DNase II peptide inhibitor significantly increases the efficiency of transfection. The best results were obtained by incorporating genetic material both into the core and as a layer of a polymer particle. We have found that addition of particles to adherent cells, as well as usage of FBS-free media exerted positive effects upon the level of transfection.
Conclusions
In summary, the effect of a peptide inhibitor of DNase II upon transfection efficiency was investigated, and optimal conditions were determined for inoculation of mammalian cells with the particles containing genetic material.
Acknowledgments
This work was supported by the project of the Russian Science Foundation No. 19-75-10010.
Keywords
Gene therapy, DNase inhibitor, transfection efficiency.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["NAME_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "40" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:49:47" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(4) "Name" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "NAME_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28181" ["VALUE"]=> string(115) "GC-03. Increasing transfection level during delivery of genetic material by polymer carriers of complex composition" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(115) "GC-03. Increasing transfection level during delivery of genetic material by polymer carriers of complex composition" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(4) "Name" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["FULL_TEXT_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "42" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-07 20:29:18" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(23) "Полный текст" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(12) "FULL_TEXT_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(23) "Полный текст" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["PDF_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "43" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-09 16:05:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(7) "PDF RUS" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(6) "PDF_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "F" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(18) "doc, txt, rtf, pdf" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28182" ["VALUE"]=> string(4) "2631" ["DESCRIPTION"]=> NULL ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(4) "2631" ["~DESCRIPTION"]=> NULL ["~NAME"]=> string(7) "PDF RUS" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["PDF_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "44" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-09 16:05:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(7) "PDF ENG" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(6) "PDF_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "F" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(18) "doc, txt, rtf, pdf" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "28183" ["VALUE"]=> string(4) "2632" ["DESCRIPTION"]=> NULL ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(4) "2632" ["~DESCRIPTION"]=> NULL ["~NAME"]=> string(7) "PDF ENG" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["NAME_LONG"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "45" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2023-04-13 00:55:00" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(72) "Название (для очень длинных заголовков)" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "NAME_LONG" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TYPE"]=> string(4) "HTML" ["TEXT"]=> string(0) "" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> NULL ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(80) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=>